lipaze și Esterazele sunt biocatali versatile și cele mai utilizate tipuri de enzime pentru scopuri biotehnologice. OPHIOSTOMA PICAEE produce o esterază de sterol (Ope) cu afinitate ridicată asupra trigliceridelor și a esterilor de sterol care este capabilă să hidrolizeze amestecuri naturale eficiente ale acestor compuși din lemn extractive. Datorită acestor proprietăți, sa propus utilizarea acestei enzime pentru a reduce problema depunerii pasului în lemn de esență tare și a pulberii de rasinoase. Secvența de proteină matură a Opei a fost exprimată cu succes în tulpinile Mut + și Muts Pichia Pastoris, care diferă în funcție de capacitatea lor de metabolizare a metanolului ca inductor de exprimare, ducând la niveluri mai ridicate de activitate decât cele obținute în culturile O. Piceae Erlenmeyer. În plus, producția de enzime recombinante (Opei *) a fost scalată la bioreactor care funcționează în procesele de lot și hrănit cu ambele tulpini. În toate condițiile analizate, nivelurile de activitate au fost mai mari decât cele obținute în balonul Erlenmeyer, atingând activitatea maximă (30 U / ml) cu tulpina de muts care funcționează într-o strategie de co-hrănire a sorbitolului în timpul cultivării Fed-lot.
Kineticul Caracterizarea proteinei recombinante a arătat o enzimă îmbunătățită cu o eficiență catalitică aparentă mai mare decât enzima nativă (~ 8 ori) pentru toate substraturile testate (p-nitrofenol, glicerol și esteri de colesterol). Nici cel mai mare nivel de N-glicozilare, nici prezența resturilor de metionină oxidate în regiunea legată de substrat a Opei * par să fie responsabilă de această îmbunătățire. Studiile dihroismului circular au arătat schimbări în spectrele lor, dar analiza datelor (metoda K2D din Dicroweb) a rezultat într-un conținut identic de -helix (0,46) și -foaie (0,23) pentru ambele proteine, astfel încât nu s-au dezvăluit modificări ale structurii secundare. Diferența principală a fost găsită în secvența N-terminală a OPE * care conține 6-8 reziduuri mai mari decât opera. Acestea au fost derivate din vectorul utilizat pentru expresia proteinei cuplată cu o prelucrare ineficientă a factorului de împerechere de la Saccharomyces cerevisiae utilizat pentru secreție. Acest lucru afectează starea de agregare detectată în OPE * (mai mică decât cea raportată în OPE) Îmbunătățirea eficienței sale catalitice. Noi aplicații biotehnologice pentru această enzimă au fost studiate de la: i) este capabil să deacetilate acetat de polivinil (PVAC), unul dintre compușii identificați în stickias formată în timpul producerii de hârtie reciclată, ceea ce a fost confirmat utilizând spectroscopia FTIR, analiza spectrometriei de masă și titrimetrie. Rezultatele obținute în condițiile testate au fost comparabile cu cele obținute cu comercializate în mod specific pentru acest obiectiv OPTIZYME® 530. II) Sintetizează esterii în medii ecologice și a fost utilizat în sinteza esterilor fitosterol, ca produse nutraceutice. În acest caz, a fost studiată influența substratului și a concentrației enzimatice și efectul diferitelor solvenți organici și fără apă în reacții. Rezultatele au arătat că enzimele de la O. Piceae par să aibă activitate sintetică similară, chiar mai bună în anumite condiții, la enzima comercială de la C. Rugosa utilizat; Obținerea unei producții generale de esteri de stelare de 60-80% în 24 de ore, în funcție de excesul molar al substratului, ceea ce a fost brevetat. În legătură cu aplicația sa potențială industrială, enzima nativă a fost imobilizată cu succes prin intermediul grupurilor epoxidice activate în noul transportator DILBEADS ™. Biocatalizatorul imobilizat a arătat o mai bună stabilitate semnificativă la valori ridicate de pH și temperaturi decât enzima solubilă și a fost capabilă să hidrolizeze colesterolul oleat pe parcursul mai multor zile când a fost ambalat ca un bioreactor. În cele din urmă, au fost efectuate diferite experimente de cristalizare cu enzima nativă. Cu toate acestea, comportamentul său ridicat de agregare nu a permis obținerea de cristale de calitate bune pentru difracția cu raze X.
Las Lipasas Y Estesrasas Fiul Biocatalizadores Versáthile y El Tipo Más Utilizado de Enzimas Para amenzi Biotecnógicos. El Hongo Ophiosoma Piceae Produce ONE esterol Esterasa (Ope) Con Alta Afinidad Sobre Triglicéridos Y ésteres De Esterol Siendo Capaz de Hidrolizar Eficazment MEZCLAS Naturales de Estos Compunestos A Partir de extractos de madera. Decido o Estas Propiedade, SE Ha Propunete EL USO de Esta Enzima Parabinuir El Problema de la Deponición de Pitch en La Fabricación de Pastele de Madera Procesante de Coníferas Y Fondosas. La Secuencia de la Proteína Madura de la APS HAPAS EXPREDO CONTRANȚĂ DE PICHIA PRECACIDAD DE LA EXCELEN COMODOR DE LA EXCRISIÓN, Dando Como rezultado Niveluri Más Altos de Actividad Que Los Obtenidos en Cultivos en erlenmeyer de O. Piceae.În plus, producția enzimei recombinante (Opei *) a fost scalată la bioreactor care funcționează în discontinuu cu motor discontinuu folosind ambele tulpini. În toate condițiile testate, nivelurile de activitate au fost mai mari decât cele obținute anterior în balonul Erlenmeyer, atingând activitatea maximă (30 U / ml) cu tulpina de muts care funcționează într-o strategie cu sorbitol ca co-substrat în timpul culturii discontinue hrănite. Caracterizarea cinetică a proteinei recombinante a arătat o enzimă îmbunătățită cu o eficiență catalitică aparentă mai mare decât enzima nativă (~ 8 ori) pentru toate substraturile testate (esterii de p-nitrofenol, glicerol și colesterol). Nici cel mai înalt nivel de N-glicozilare, nici prezența reziduurilor de metionină oxidate în regiunea de legare la substratul OPE nu pare a fi responsabili pentru această îmbunătățire. Studiile dihroismului circular au arătat schimbări în spectrele lor, dar analiza datelor (metoda K2D din Dicroweb) a dus la un conținut identic în elice α (0,46) și în foi β (0,23) pentru ambele proteine care indică absența modificărilor structurii secundare. Cu toate acestea, principala diferență în ele a fost găsită în secvența N-terminală a operatorului * care conține mai degrabă 6-8 reziduuri decât Ope. Aceste reziduuri au provenit din vectorul utilizat pentru expresia proteinei și prelucrarea ineficientă a factorului α al Saccharomyces cerevisiae utilizat pentru secreție. Acest lucru afectează starea de agregare detectată în OPE * (mai mică decât cea descrisă în Operat), care îmbunătățește eficiența sa catalitică.
Având în vedere potențialul său, au fost studiate noi aplicații biotehnologice pentru această enzimă: i) dezaotate de acetat de polivinil (PVAC), Unul dintre compușii identificați în stickias format în timpul producției de hârtie reciclată. Capacitatea enzimei de a efectua o astfel de reacție a fost confirmată de spectroscopia FTIR, analiza spectrometriei de masă și titlul; Deci, rezultatele obținute, în condițiile de testare, arată o activitate similară cu cea a enzimei Optizyme® 530 comercializată în acest scop. ii) sinteza esterilor în medii ecologice, în special esteri de fitoresterol, cum ar fi produsele nutraceutice. În acest caz, a fost studiată influența concentrației de enzime și substrat și efectul diferitelor solvenți organici împreună cu prezența și absența apei în reacții. Rezultatele obținute au permis să brevete angajarea enzimei în acest scop, fiind similare cu cele realizate cu enzima comercială a lui C. Rugosa angajați în comparație și chiar mai bună în anumite circumstanțe. O producție totală de esteri de esteri de esteri de 60% în 24 de ore a fost observată atunci când o substanță mică a fost utilizată prin creșterea a 80% cu excesele mai vechi. Gândindu-se la utilizarea sa industrială posibilă, enzima nativă a fost imobilizată cu succes prin grupele epoxidice activate într-un nou suport numit DILBEADS ™. Biocatalizarea imobilizată sa dovedit a fi semnificativ mai stabilă la valorile și temperatura ridicată a pH-ului decât enzima solubilă și reținea capacitatea de a hidroliza oleat de colesteril timp de câteva zile când a fost ambalat ca bioreactor. În cele din urmă, au fost efectuate diferite experimente de cristalizare cu enzima nativă. Cu toate acestea, tendința ridicată care arată pentru a forma agregate a împiedicat obținerea de cristale de bună calitate pentru studiile de difracție cu raze X.