sistema imune em peixes
Sistema imunológico de peixe
Susana E. Olabuenaga *
* membro da carreira do pesquisador de conicet. Presidente da ictiopatologia, Centro Regional da Universidade de Bariloche, Universidade Nacional de Comaue, Quintral 1250, Unidade Postal National Univeriversity of Comaue, 8400 Bariloche, Rio Negro. E-mail: [email protected]
a função essencial do Sistema imune em todos os vertebrados é a defesa contra infecções. O peixe apresenta uma resposta imunológica bem desenvolvida e integrada, e no caso de teleosts, com algumas semelhanças com relação a vertebrados superiores. Pode ser dividido em dois tipos: inato ou não-específico e adquirido ou específico, ambos compostos de uma parte humoral e celular. Sua importância pode variar com a idade do peixe e é influenciada por diferentes fatores. Seus componentes mais relevantes são mencionados aqui. No peixe há dois fatores que influenciam notoriamente a resposta imune e a produção de anticorpos, que são mudanças sazonais e temperatura. Os principais órgãos linfóides, o timo, o rim e o baço são descritos, bem como o processo ontogênico linfocítico. Enquanto o progresso foi feito nos últimos anos, os estudos básicos de imunologia são ainda necessários em diferentes espécies que ajudam a caracterizar as populações efetivas e seus mecanismos de ação.
Palavras-chave: antígeno, anticorpo, leucócitos, fagocitose, linfocinas, inflamação, imunoestimulantes.
A defesa contra infecções é a função essencial do sistema imunológico de todos os vertebrados. Peixe apresenta uma resposta imunológica eficiente e desenvolveu e, no caso de teleosts, com alguma semelhança com os vertebrados mais elevados. Pode ser dividido em dois tipos: inato ou não específico e adquirido ou específico, ambos com um compreensivo humoral e celular. Sua importância relativa pode mudar de acordo com a idade dos peixes e está sempre sob influência de diferentes fatores. Os componentes mais relevantes são mencionados aqui. Existem dois fatores em peixes que influenciam fortemente a produção imunológica e a produção de anticorpos, mudanças sazonais e temperatura. Os principais órgãos linfóides são descritos aqui: o timo, o rim e o baço, bem como o processo ontogênico de linfócitos. Alguns avanços no conhecimento foram publicados durante os últimos anos, no entanto, ainda é necessário desenvolver novos estudos em imunologia básica em diferentes espécies para caracterizar as populações de células efetivas e suas funções.
Palavras-chave: antígeno, anticorpo, leucócitos, fagocitose, linfocinas, inflamação, imunoestimulantes.
A função essencial do sistema imunológico em todos os vertebrados é a defesa contra infecções, este sistema Permite a sobrevivência do indivíduo e manter suas funções corporais em um meio que por natureza é hostil. Os peixes são um grupo amplamente divergente representava aproximadamente 20.000 espécies que ocupam diferentes habitats. Estudos filogenéticos indicaram uma divergência entre protostos (anelídeos, moluscos, artrópodes) e deuterostos (Echinoderms, tunicados, cordados) que ocorreram cerca de 500 a 600 milhões de anos atrás e é do último grupo que os peixes foram desenvolvidos em diferentes direções (Jarvik 1980).
dentro da linha de vertebrados são, primeiro, os elasmobranches (listras, tubarões) que têm imunoglobulinas e moléculas do grande complexo histocompatibilidade e depois são seguidos pelos teleosts que também apresentam o suplemento do sistema e a proteína C reativa (Marchalonis & Schluter 1994).
A resposta imune dos peixes em geral é bem desenvolvida e integrada, e no teleosts é onde muitas semelhanças funcionais são encontradas com a resposta observada em vertebrados mais altos; Geralmente funciona eficientemente, embora como qualquer outro sistema fisiológico, o sistema imunológico de um indivíduo é afetado quando o estado de saúde é deficiente. Em termos de uma população, quando as condições ambientais são adversas, os riscos de um aumento de infecção e a saúde de todo o conjunto de amostras são ameaçados. Há uma série de fatores que influenciam o desenvolvimento de uma boa resposta, e às vezes deprimi significativamente.Estes são classificados em: fatores intrínsecos ou aqueles inerentes aos peixes, como idade e estado de saúde, e fatores extrínsecos, como temperatura, mudanças de temporada e os parâmetros abióticos de água. Dentro dos fatores extrínsecos há um número de estímulos que atuam negativamente em um sistema biológico, e então originam uma reação subseqüente e que é conhecida como estresse, o peixe tem a capacidade de responder, e envolve reações fisiológicas e comportamentais, que ajudam você a se adaptar a uma nova situação. Em alguns casos, quando o estresse é prolongado ou se torna mais severo, ele pode exceder sua capacidade de ajuste, e um colapso do sistema imunológico é produzido e também de outros sistemas (Ellis 1981A). O efeito supressivo do estresse é mediado por hormônios, principalmente corticosteróides (Jeney et al., 1992). O cortisol é o principal glucocorticoide que é produzido (na crosta adrenal) nas células interrenal dos pronfros no peixe. Sua secreção é aumentada pelo hormônio adrenocorticotericotrófico (ACTH), que é, por sua vez, pela glândula pituitária e está sob um controle positivo do fator de liberação da corticotrófina (CRF) do hipotálamo. A inibição do sistema de feedback clássico sobre a secreção do CRF ocorre quando a concentração de cortisol no sangue aumenta. O cortisol é o mais comum e biologicamente ativo de corticosteróides em peixes.
Basicamente, a resposta imune é um mecanismo de defesa de células e humoral induzido por um agente estrangeiro, que é o antígeno (AG), e as células responsáveis pelo reconhecimento inicial de um vertebrado específico pertencem às linhas celulares e B. Células acessórias também são necessárias para processamento antigênico e apresentação e mediadores fisiológicos chamados citocinas para proliferação, interação e regulação.
O sistema de defesa de peixe, como nos vertebrados superiores, pode ser dividido em dois tipos de mecanismos: sistema de defesa inato, natural ou não-específico e sistema imunológico adquirido ou específico. O primeiro é aquele que possui todos os seres vivos desde o nascimento, formados por componentes celulares e humorais, e o segundo envolve a produção de anticorpos através de um reconhecimento específico dos antígenos, e os elementos celulares também participam. A importância relativa de ambos pode variar com a idade do peixe e são influenciadas por diferentes fatores. No caso de teleosts, o sistema defensivo é composto por subpopulações de leucócitos, incluindo linfócitos B e T, granulócitos, trombócitos, macrófagos e células citotóxicas não específicas. Para entender as reações de defesa imunológica desenvolvidas pelos peixes contra patógenos diferentes, é necessário um amplo conhecimento da biologia dos linfócitos.
1. Sistema de defesa não específico
1a. Fatores humorais solúveis
O epitélio intacto e sua secreção, o muco, formam a barreira de defesa primária entre o peixe e seu ambiente. O muco contém proteínas e carboidratos e tem uma função protetora, evitando a colonização em sua superfície, parasitas, bactérias e fungos, através de uma perda contínua e substituição (Ourth, 1980). O muco, além da mucina, contém outros componentes secretórios, é composto por precipitações não específicas, aglutininas, proteína C-reativa (PCR) e lisozima, que constituem uma barreira de defesa química primária (Fletcher 1981). Além disso, internamente, o muco enfiou as paredes do trato alimentar, que, juntamente com extrema pH e enzimas proteolíticas, servem como defesa contra potenciais patogênicos (Stoskopf 1993). Muitas dessas funções de reconhecimento e regulamentação fazem parte da resposta na fase aguda de uma infecção e talvez seja a forma mais antiga de reconhecimento do não-auto e que tenha sido preservada na linha evolucionária. Nos peixes, eles podem representar um sistema de reconhecimento primitivo, em vez de uma ação efetuada na destruição do patógeno.
Então são os componentes do soro. Proteínas de fase aguda são moléculas que aparecem por um breve período durante os picos febris ou simplesmente aumentam sua concentração durante esse período em mamíferos. Entre os mais importantes são a proteína C-reativa (CRP) e transferrina.
O CRP, representa um grupo muito primitivo de moléculas de reconhecimento e está envolvido em mecanismos de defesa. Em peixes, sua concentração tende a ser uniforme e constante ao longo da vida. Foi demonstrado aglutinar certas bactérias e também apresenta especificidade por pequenas moléculas orgânicas, como fosforilcholina (Volanakis et al., 1990).Sua interação foi demonstrada com uma série de moléculas do sistema imunológico, como o complemento e os receptores FC de linfócitos. Tem um peso molecular de 118.000 e uma mobilidade eletroforética beta. Foi detectado em citometria de fluxo de peixe na superfície de 25% dos linfócitos do sangue periférico e 4% dos linfócitos de Pronefro (Edagawa et al., 1993). Estudos diferentes sugerem que aqui, em contraste com o que acontece em mamíferos, essas proteínas são constituintes séricos normais e sua concentração pode ser aumentada após uma infecção bacteriana. Eles ocorrem em resposta ao estresse, manipulação, exposição antigênica, etc. Alguns concluíram que poderia servir como um indicador de estresse ou doenças únicas que ocorrem durante as primeiras etapas do ciclo de vida dos peixes (Fletcher et al., 1977).
O transferrina é uma glicoproteína globular, tipo B1 sem o grupo heme, mas que pode ser unido a ferro, foi encontrado no soro da maioria dos vertebrados. Quando não estiver totalmente saturado, apresenta propriedades antimicrobianas e, portanto, desempenha um papel importante na patologia de muitas infecções bacterianas, limitando a quantidade de ferro endógeno disponível para invadir patógenos e, portanto, sua capacidade reprodutiva (Buller et al., 1978). No peixe e também em outras espécies, descobriu-se que tem um alto grau de polimorfismo genético. Como nas casas, há diferentes genótipos, 5 foram encontrados no salmão COHO (OnCorhynchus Kisutch) e 3 na truta (O. Mykiss) (Suzumoto et al., 1977, Winter et al., 1980). Van Muiswinkel et al. 1985 mostrou que o tipo de transferrina é herdado. Os diferentes fenótipos parecem ter um papel importante no desenvolvimento da resistência a certas doenças e tem sido demonstrado que certos grupos mostram maior predisposição para uma dada doença. A explicação seria que alguns genótipos têm maior afinidade para o ferro do que outros.
também é encontrado como proteína de fase aguda a-antiprotease que é um análogo da macroglobulina A2 de mamíferos, que neutraliza a atividade proteolítica de uma exotoxina de avião de salmonicida no soro normal da truta arco-íris e pode estabilizar lisossomos de macrófagos (Ellis 1981B).
lyozyme é uma enzima mucolítica com propriedades antimicrobianas e foi detectada em soro, muco e outros tecidos ricos em leucócitos, tais como rim, baço e intestino, tanto em peixes de água como água fresca ( Grinde et al., 1988, Lie et al., 1989). Tem a capacidade de degradar mucopolissacarídeos da parede celular de bactérias, particularmente gram positivo, causando lise (Ellis 1990). Também é encontrado em neutrófilos, monócitos e em menor quantidade em macrófagos. O pH ideal pode variar entre as diferentes espécies em resposta a condições ambientais (Ellis 1990, Murray & Fletcher 1976). Em algumas espécies, foram relatadas variações no nível de lisozima de acordo com mudanças sazonais ou sexuais nas diferentes espécies.
Outras substâncias que podem participar deste sistema de defesa não específica são mencionadas abaixo de acordo com o Ingram (1980).
A quitinase é uma enzima que desdobra a n-acetil-d-glucosamina ou quitina por hidrólise das ligações de 1,4 glucosamina e ter um peso molecular de cerca de 30000. Sua atividade foi detectada no baço, plasma , linfa e tecidos linforróides, podem ter uma função protetora atuando contra o chitin presente em fungos e parasitas invertebrados.
As citocinas são polipéptidos ou glicoproteínas que atuam como moduladores do sistema imunológico e em muitas espécies de peixes como nos vertebrados superiores, a existência de muitos deles como interleouquins 1 e 2 (IL) foi informada -1, IL-2), o interferão (IFN), o fator de ativação dos macrófagos (MAF) (Verlurg-van-Kemmenade et al., 1985, Secombes et al., 1996), IL-3, IL- 6 , o fator de necrose do tumor alfa (TNF a) e o receptor solúvel para IL-2 no soro de animais infectados com vírus ou parasitas (AHNE 1994).
O IFNS constituir uma série de importantes moléculas como agentes antivirais (dorson et al., 1975, Graham & Secooproteínas produzidas por macrófagos, linfócitos , Fibroblastos e células assassinas naturais (NK) em resposta a uma infecção viral, uma estimulação imunológica ou uma variedade de estimuladores químicos. Eles foram identificados em muitas espécies de peixes. Sua produção, como em mamíferos, foi demonstrada pela estimulação tanto in vivo como in vitro com vírus (de Serra et al., 1975, dorson et al., 1992, Rogel-Gaillard et al., 1993) ou com ativadores sintéticos ( Eaton et al., 1990; Tangelsen et al.1991) ou com MITEGENS (Graham et al., 1990b). A maioria dos estudos sugere que a IFN é espécie específica, mas não vírus específico (Gordon et al., 1981, Johnson et al., 1994). A IFN foi encontrada que se assemelha ao tipo I de vertebrados mais altos ou beta e beta e também tipo II ou gama (Secomes 1991); Nos últimos anos, os genes de outras citocinas de peixes foram sequenciados, incluindo o fator de crescimento beta (TGF B), IL-1 B, o fator fator fibroblasto (FGF) e algumas chimoquinas e estudos de hibridização os genes da citocina, como a IFN e eritropoietina (Secombes et al., 1999) foram encontradas.
Estes estudos representam um avanço importante, confirmam os dados biológicos inicialmente encontrados e nos permitirão expandir as investigações realizadas até agora, a existência dessas citocinas indicaria uma origem muito cedo na evolução e que também Sistema de comunicação intercelular foi preservado em milhões de anos.
As aglutininas estão presentes no soro e agem contra uma variedade de microorganismos e glóbulos heteroganos vermelhos. Como muitos tipos de microrganismos compartilham especificidades sorológicas com glóbulos vermelhos de vertebrados, eles podem ser “protetores”, bactérias ou vírus aglutinantes e promovendo sua fagocitose (Roberson, 1990).
O sistema de complemento (c) desempenha um papel importante na imunidade humoral e também no celular contra patógenos diferentes e no processo inflamatório (Ingram 1990, Yano 1992). É constituído por pelo menos vinte proteínas plasmáticas sintetizadas principalmente como precursores inativos (pró-enzima) que funcionam como enzimas ou como proteínas que estão se juntando quando ativadas pela introdução e / ou presença de certas substâncias no plasma do sangue normal. Muitas dessas proteínas são sintetizadas no fígado e no epitélio intestinal, enquanto outros se originam em macrófagos (Tyzard, 1992). A estimulação do sistema de complemento desencadeia reações bioquímicas, que são acompanhadas pela geração de numerosos mediadores biologicamente ativos na inflamação. Eles agem sequencialmente na lise de uma célula branca, participando da morte e eliminação de antígenos celulares, geralmente bactérias e também na ativação de muitas respostas de defesa não específicas associadas à inflamação. Pode ser ativado através de duas maneiras, o anticorpo clássico ou dependente e a alternativa ou o proprietário ou anticorpo independente. A presença do sistema de complemento no muco da pele foi descrita, atuando como a primeira barreira de defesa, ativando uma das duas maneiras (Lambris, 1993, Sakai, 1992a). O sistema C no Mammals consiste em aproximadamente 12 componentes, denominados dos fatores C1 para C9 e B, D e drogina e outros fatores que regulam a sua atividade. A ativação da via clássica é iniciada pela interação entre o componente C1 e o complexo antígeno-anticorpo e o da via alternada através do componente C3 ativado por diferentes substâncias, como lipopolyisarides, zimosan e outros. Este sistema existe em peixes teleostos, de forma comparável que existe em mamíferos. Até o momento, a presença de ambas as estradas foi demonstrada em diferentes espécies, como a truta arco-íris (O. Mykiss), a tenda (Cyprinus carpio), a tilápia (nilotica tilapia) e o bagre (iptalurus punctus) (nonaka et al Al 1981, Matsuyama et al., 1988a, b; lobb & Hayman 1989).
1b. Mediada por células
No que diz respeito à parte celular não específica, as células NK ou as células citotóxicas não específicas são encontradas e células fagocíticas.
NK Células desempenham um papel semelhante ao dos vertebrados superiores, ou exercem uma citotoxicidade não específica de diferentes células brancas sem um reconhecimento prévio. Foi postulado que essas células podem ser os progenitores na linha evolutiva da NK de mamíferos (Evans et al., 1984). Peixes teleostos foram encontrados células NK no rim ou pronfros cefálicos, baço, sangue periférico e timo, e realizam humanos, mouse e estas mesmas lise de peixe; Sua presença foi descrita em diferentes espécies (Greenlee et al., 1991, Graves et al., 1985), a citólise exige contato celular celular, eles são células não-aderentes e resistentes à irradiação. Eles representam menos de 1% dos leucócitos de sangue periférico. Em Elasmobrands, a célula efectora seria um monócito / macrófago e em peixes ósseos, células linfóides agrícolas (Moody et al., 1985).
Quanto às células fagocíticas, pode primeiro ser dito que a fagocitose é um mecanismo celular de ingestão e digestão de material estranho particulado, e é provavelmente a reação de defesa mais distribuída em vertebrados e invertebrados, e um segundo que em teleosts foram descritos células diferentes com capacidade fagocítica (Mac Arthur & Fletcher 1985, Finn 1970). O mais comum no peixe como nos mamíferos são granulócitos e fagócitos mononucleares ou agranulócitos, dos quais os últimos são os mais importantes. Dentro desses dois grupos, há diferentes categorias: a) Granulócitos, incluem neutrófilos, eosinófilos e basófilos e b) monócitos-macrófagos (Ellis 1977, Rowley et al., 1988). a) Granulócitos: A maioria deles é móvel e fagociticamente ativa, seu citoplasma contém grânulos lisossômicos, vacúolos, mitocôndrias e outras organelas. Eles estão em diferentes proporções no sangue, dependendo da espécie, mas os mais comuns são neutrófilos e eosinófilos, enquanto as basófilos não estão presentes na maioria das espécies. Os neutrófilos constituem 4,5 a 18% dos leucócitos de sangue, com uma ampla gama entre diferentes espécies. Eles também são chamados de leucócitos polimorfonucleares ou específicos. O citoplasma contém numerosos grânulos, eles são mal fagocíticos, no sentido de ingerir pouco material estranho, mas têm a maioria das enzimas presentes nos mamíferos e, portanto, seu principal papel seria a lise extracelular por secreção dessas enzimas e outras substâncias antimicrobianas. Eles podem produzir danos severos tecidos por liberação dos radicais livres de oxigênio (Tyzard, 1992). Os eosinófilos contêm grânulos citoplasmáticos que são corados com corantes ácidos. Na maioria dos peixes de telesette são escassos ou ausentes em circulação. Alguns estão presentes no peritônio e nos tecidos. Nas elassperances são diferentes graus de eosinofilia com diferenças de tamanho e estrutura. Em algumas espécies, são abundantes no intestino, o que indicaria alguma função na imunidade contra as bactérias. Basófilos contêm grânulos no citoplasma que são corados com corantes básicos e sua presença é escassa e rara no sangue periférico da maioria das espécies estudadas.
b) monócitos-macrófagos: monócitos são móveis, fagocíticos e normalmente maiores do que outros leucócitos. Eles têm um citoplasma desapontado e basofílico. Eles foram encontrados no sangue e no rim e sua presença foi demonstrada apenas em algumas espécies. Os macrófagos são células fagociticamente ativas derivadas de monócitos que estão em tecidos e cavidades peritoneais e pericárdicas, maiores que o acima, e por essa razão, podem fragocar partículas maiores. No teleosts, os macrófagos são especialmente abundantes no baço e no tecido linfomilóide renal e podem ter em outros tecidos, por exemplo a mucosa olfativa.
Neste processo de ingestão, o antígeno é inicialmente capturado pelos macrófagos presentes nas brânquias e os tecidos conjuntivos da pele e do intestino, no indivíduo adulto Os principais locais fagocíticos são os órgãos linfóidos, o rim , o baço e o epicárdio; No rim, o material é inicialmente phagocked pela estrutura celular reticuloendotelial dentro do parênquima hemopético, enquanto no baço, o antígeno é extracelularmente preso nas fibras reticulares na parede de elipsoide (Fergusson 1989). Os macrófagos contendo material de fagócitos são adicionados em áreas linfóides muitas vezes na presença de melanomacrofagos, que são células fagocíticas que transformaram o material phagocked em melanina.
Fagócitos são afectados por transmissores nervosos adrenérgicos e colinérgicos, que aumentam sua capacidade de produzir as espécies reativas de oxigênio, que participam do processo fagocítico (LAMBRIS 1993), produzindo um aumento no ânion superóxido, peróxido de hidrogênio e radicais hidroxil (Graves et al., 1985).
2. Sistema imunológico específico
2a. Imunidade humoral
é representada pelos anticorpos (AC) ou imunoglobulinas (IGs) que são glicoproteínas, no soro 40-50% da proteína total corresponde ao IGS. Nos ciclonstoms, os anticorpos que são encontrados são macroglobulinas de 23,8s e em lampre, encontramos 3 tipos de anticorpos, de 14s, 9s e 7s (Tizardo, 1992), esta última molécula com cadeias leves e pesadas, mas sem pontes intercambiáveis de dissulfeto .
O único IG presente no osso e peixes cartilaginosas é da classe “IgM como”, em Teleostos é apresentado sob a forma de um tetrâmero com duas cadeias leves e duas pesadas com um peso molecular de aproximadamente 700 e um coeficiente de sedimentação de 17 s, também há formas monoméricas em soro (Castillo et al., 1993, Killie et al., 1991, Koumans-van Diepen et al., 1994, Miller et al., 1985). Os peptídeos homólogos foram descritos para a cadeia J no peixe (Tyzard, 1992), nas elasbranches são apresentados na forma de Pentamérica (19s) e aproximadamente 900 kDa e também monogóricos (7s) e aproximadamente 160 kDa (Fange 1992).
Os genes dos IGs são organizados essencialmente da mesma forma que nos vertebrados (Marchalonis 1989). As paredes dos vasos sanguíneos são permeáveis ao IGS do soro e, portanto, são encontradas na maioria dos fluidos tecidos, no plasma, na linfa e do muco epitelial (Stoskopf 1993). No peixe ósseo é o IgM dimerico no muco e deve ser sinterizado localmente.
As células produtoras de anticorpos derivam de linfócitos B, que por interação com o antígeno são transformadas em células plasmáticas. No processo de apresentação antigênica, os macrófagos colaboram. As células plasmáticas foram detectadas em diferentes grupos de peixes, incluindo ciclostomas, embora nestas sejam consideradas propriedades intermediárias entre os vertebrados IGs e as lectinas de invertebrados (Fange 1992). Eles têm um citoplasma basofílico, geralmente não granular e os encontram no tecido conjuntivo, baço, rins e raramente no sangue. Eles são originários de células B ativadas pela AG e são consideradas os principais produtores de IGs (Fange 1992).
A natureza da AG influenciou a resposta do ACS e é de fundamental importância na pesquisa imunológica e também na produção de vacinas. É essencial que a molécula seja reconhecida como estranha estimular o sistema imunológico e, além de ser processado, existem restrições físicas e químicas. Os antígenos mais eficazes são aqueles de alto peso molecular, com estabilidade estrutural e que são moléculas quimicamente complexas e não inertes. Em geral, os complexos virais e bacterianos e os antígenos eritrócitos parecem ser eficazes imunogénios na maioria das espécies Teleost, enquanto proteínas solúveis são mal imunogênicas (Tizard, 1992).
Nas diferentes espécies de poworks existem dois fatores que influenciam notoriamente a produção de anticorpos e a resposta imune, são mudanças sazonais e temperatura. No peixe, tanto a resposta humoral quanto a celular dependem desses fatores.
Com relação à temperatura, Ellis (1988A) define que a faixa ideal para o seu desenvolvimento está relacionada às condições do ambiente natural para as diferentes espécies. Em geral, quanto maior a temperatura dentro da faixa fisiológica normal, quanto mais curta é a fase de indução e maior a magnitude da resposta imune; Em baixas temperaturas, a fase de indução é prolongada com uma redução no título de anticorpos ou falhando que há uma completa ausência da resposta.
Avalion (1981) indicou que, desde que a temperatura de imunização e o período subsequente permaneçam acima do nível crítico, a produção de anticorpos durante a resposta primária e secundária será absolutamente normal, constante e independente do meio ambiente. temperatura. Por outro lado, a temperatura afeta o crescimento de criação e baixas temperaturas prolongará o período exigido pelo peixe para alcançar o estado de desenvolvimento crítico em que se torna imunologicamente competente. Com relação às mudanças sazonais, foi mostrado na truta arco-íris (O. Mykiss), que a produção de anticorpos, bem como a sua estabilidade contra mudanças na temperatura, mobilidade eletroforética e coeficientes de sedimentação dependiam das estações, alguns autores relataram que Nas Poworks há uma resposta fraca durante o período de inverno em comparação ao verão, embora a temperatura permaneça constante (Ellis 1981A).
Idade em que ocorre uma montagem adequada e madura da resposta humoral varia de acordo com as diferentes espécies e também depende das condições ambientais. Em geral, uma resposta completa ocorre entre 2 a 10 meses, após incubação. Anticorpos circulantes foram encontrados em peixes de 15-21 dias e 0,15-0,3 g de peso, mas este não é o mais geral, na prática, acontece recentemente em espécimes de maior peso e tamanho (Ellis 1988b).
Foi mostrado, conforme descrito para mamíferos, a resposta de produção de anticorpos primária e secundária clássica.A fase de indução é geralmente mais longa e com títulos que aumentam de forma mais lenta (Ellis 1989). Os neurotransmissores podem influenciar significativamente a indução in vitro de células secretoras de anticorpos em culturas de leucócitos no baço de truta. Os agonistas B adrenérgicos suprimem a resposta dos anticorpos contra antígenos T independentes, enquanto o aumento adrenérgico e colinérgico A-2 (Flory 1990).
Como em mamíferos, a tolerância ocorre em peixes e isso pode ocorrer antes de se tornarem imunologicamente competentes. Estudos em O. Mykiss e C. Carpio conduzidos por Ellis (1988b) mostraram que as células citotóxicas e a produção de anticorpos contra antígenos T independentes, são desenvolvidas 4 semanas pós-eclosão. A capacidade de estabelecer uma memória imunológica e produzir anticorpos contra antígenos t dependentes, é desenvolvido 8 semanas pós-eclosão (Tatner 1986). Se injetado com um AG TP antes desta vez, ocorre a tolerância imunológica.
Os ACs monoclonais permitiram definir a heterogeneidade molecular das cadeias pesadas e claras da IGs em muitas espécies como uma barraca, bagre, truta arco-íris (rhombout et al., Ainsworth et al., Ainsworth et al., 1990; Sánchez & Domínguez 1991) e muitos outros, e ajudaram a entender a cinética da resposta humoral primária e secundária após o desafio antigênico.
2b. Imunidade medida pelas células
em peixes cartilaginosos e ósseos encontramos dentro do grupo de glóbulos brancos, células não granulocíticas envolvidas em mecanismos de imunidade celular. Neste grupo, linfócitos, células imunocompetentes que constituem a base de reações imunes estão incluídas. Os linfócitos no sentido morfológico são células relativamente pequenas com um núcleo redondo para oval, seu tamanho varia de 4,5 a 8 μm, são células não fagocíticas e constituem 50-80% do total de leucócitos. A maioria dos linfócitos é produzida em pronfros e no timo. Como mencionado acima, há dois tipos, linfócitos B e T. A população de linfócitos T e seus diferentes clones são responsáveis pela imunidade mediada por células. Este aspecto da resposta imune tem uma ampla gama e, por sua vez, recruta outros tipos de células, como macrófagos, permitindo uma assembléia eficiente da resposta. Na estimulação antigênica primária, esses clones diferem em diferentes tipos de células com funções específicas. Estas incluem células citotóxicas ou “assassino”, capazes de culas estranhas de contacto físico direto entre células T e células brancas; Células supressoras que regulam a produção de anticorpos e linfocinas que fornecem um fechamento para o processo e colaborar células ou “ajudante”, que ajudam as células produtoras de anticorpos e também liberam livremente fatores solúveis ou linfocinas que aumentam a capacidade de defesa.
No momento, uma bateria de anticorpos monoclonais está disponível que permitiu demonstrar que esses dois tipos de células linfócitos (células B e células T) estão em várias espécies de peixes (de Luca et al. 1983) . No entanto, a maioria desses anticorpos é direcionada contra imunoglobulinas e células B (portadores de IGs em sua superfície) e apenas alguns reconhecem células T periféricas (Scapigliati et al., 1999). O desenvolvimento desses e novos ACs permitirá uma melhor caracterização fenotípica dos linfócitos e suas diferentes subpopulações celulares, no entanto, existem poucos dados sobre a origem ontogênica e a diferenciação de células limoides (Castillo et al., 1993). Devido à falta de anticorpos monoclonais anti-T específicos, as respostas foram controladas indiretamente e apenas a sua participação é presumida, por exemplo, na proliferação induzida por mitógenos, como fitohemaglutinina a (PHA), concanvalina A (CONA) e lipopolissacarídeos (PHA), LPS) (Sizemore et al., 1984), a resposta em reações de cultura mista (Miller et al., 1985), a função como células colaboradoras na produção de ACS contra AGs dependentes de células T (Miller et al., 1987, Clem et al., 1985), a rejeição de tumores e aloenxertos (Manning 1994) e a secreção de linfoquinas (Secombes et al., 1996). A preparação desses ACs definiu a distribuição no corpo dessas células e sua heterogeneidade e pesquisa aumentou na área de imunologia e patologia imunológica.
Nos ciclonstoms eles têm apenas duas populações de leucócitos em seu sangue, um único tipo e outro linfócito, 70% destes têm IGs em sua superfície, originam-se no rim anterior e não possuem células plasmáticas.
3.Órgãos linfóides
Os principais órgãos linfóides em peixes teleostos são o timo, o rim e o baço (Ellis 1988a, Fergusson, 1989).
O timo é um par, órgão bilateral, localizado abaixo do epitélio faríngeo, traseira lateral e hospedado no topo interno das câmaras branquiais. O principal componente celular é timócito ou linfócitos em maturação. Como em outros vertebrados, é considerado como um corpo linfóide primário, onde o conjunto de linfócitos virgens que migram para juntar linfócitos periféricos em circulação e outros órgãos linfóides é produzido. Não participa da produção de anticorpos ou na captura do antígeno. Eles também podem estar presentes células epitelioídeos ou macrófagos ou células de macrófagos adequadamente e células granulares eosinofílicas (Fergusson 1989). Como nos mamíferos, a involução desse órgão é observada em espécimes mais antigos. Nos jovens salmões, o timo é totalmente diferenciado e separado do meio externo por uma camada de células epiteliais simples, e, por exemplo, em truta arco-íris (O. mykiss) possuem poros de 20 μm de diâmetro, nos espécimes mais antigos poros próximos e contados o epitélio. Seu local superficial sugere uma certa vulnerabilidade a infecções mycóticas e bacterianas graves.
O rim ou pronfros cefálicos é o principal órgão hematopoiético do peixe e do local principal da diferenciação de eritrócitos, granulócitos, linfócitos B e monócitos. É o principal corpo produtor de anticorpos (Ellis 1989). É um órgão de filtragem contendo macrófagos que fagocina os diferentes antigénios, contêm componentes linfomilóides, renais e endócrinos suplementados pelo sangue das artérias e da veia transportadora caudal. Serve como um análogo da medula óssea, dos gânglios linfáticos e em parte da glândula adrenal dos vertebrados superiores (FANGE 1992). Os mesonefros ou o rim estão corretamente conformes com as funções do equilíbrio de hidrossalina.
O baço contém menor número de células hemopoiéticas e linfóide em comparação com o rim e é composto principalmente de sangue alojado em cavidades. Consiste em elipsóides, paredes capilares compostas de uma quadriculação de fibras reticulares e macrófagos. As fibras se especializam em capturar complexos imunes e antígenos de partículas (Vallejo et al., 1992), enquanto os macrófagos são altamente fagocíticos (Ellis 1980). Uma característica particular do baço de teleosts é a presença de macrófagos contendo pigmentos de cor escura, principalmente melanina e que são chamados de melanoma-cryophops. Estes são agrupados e formam agregados chamados centros melanomacróficos (CMM). Seu número e tamanho aumenta em peixes cronicamente doentes, quando o catabolismo foi excessivo (Fergusson 1989). Eles servem como depósito dos produtos finais do metabolismo (por exemplo, fosfolipídios) e também de antígenos e material particulado (Herraez et al., 1986), sua função exata não é conhecida, mas além do acima mencionado, sabe-se que a melanina A capacidade de prender a oxidação livre de radicais e que protegeria os tecidos contra esses produtos liberados por células fagocíticas, como neutrófilos. Eles também são encontrados no rim e no fígado e, ocasionalmente, nas gônadas e da tireóide (Fergusson 1989).
No que diz respeito ao sistema imunológico, numerosos estudos foram realizados para defini-lo e com base nisso, as seguintes considerações podem ser deduzidas. Uma descrição histológica completa do desenvolvimento ontogênico dos órgãos linfóides em peixes relatou que em várias espécies a primeira aparição de linfócitos ocorreria no thymus (graça & Manning 1980; Botham & manning 1981; Doggett & Harris 1987), embora, no entanto, outros autores encontraram uma detecção anterior no rim (Grace et al., 1981, Ellis. 1977; O’Neill 1989). De qualquer forma, embora as células precursor aparecessem no rim antes da diferenciação de linfócitos no timo, os linfócitos maduros são primeiro presentes no timo e depois aparecem sequencialmente no rim e no baço (Zapata et al., 1990), o que é considerado que o O timo é o primeiro corpo linfóide onde os linfócitos são desenvolvidos.
O tempo do início dos linfócitos na circulação sanguínea e dos órgãos linfoideos foi comparado em diferentes espécies (Ellis 1988A). Após a diferenciação de um grande número de células no timo, os linfócitos aparecem no sangue e no rim ao mesmo tempo, o rim é então rico em células linfóides. O tempo de diferenciação dos linfócitos varia com a espécie e provavelmente está relacionado à taxa de crescimento e desenvolvimento geral (Ellis 1988A). É claro que pequenos linfócitos maduros aparecem pouco antes ou após a eclosão.Durante as primeiras semanas após a ocorrência, a taxa de crescimento dos órgãos linfoide é maior do que a do resto do corpo, mas mais tarde começa a diminuir com a idade. Muitos timócitos migram para os corpos periféricos durante os primeiros 2-3 meses deste período e sinais de involução são observados em torno de 9 meses (Ellis 1988A). O desenvolvimento dos órgãos linfóides se correlaciona melhor com o peso do peixe do que com a idade e, portanto, parece ser uma função da taxa de crescimento.
Como mencionado acima, em espécimes adultos, os linfócitos periféricos continuam em sua superfície de certas AGs relacionadas à função celular e sua presença pode ser usada como marcador para diferenciar células imaturas de maduras. Com o uso de anticorpos monoclonais, a aparência desses marcadores poderia ser estudada nas células linfóides (1983 Secomes), foi determinada que, embora os linfócitos parecessem cedo no desenvolvimento, sua maturação funcional leva um longo período de tempo antes que seja capaz de Monte uma resposta imune (Ellis 1988A).
4. Resposta inflamatória
A resposta inflamatória é a característica protetora do tecido em resposta a um certo dano e é comum a todos os vertebrados, incluindo peixes (Finn & Nielsen 1971 ). A inflamação é não específica e pode ser iniciada por diferentes fatores, incluindo parasitas, bactérias ou vírus e outros agentes, como radiação e toxinas químicas. Eventos que caracterizam a resposta inflamatória são: 1) vasodilatação com um aumento no fluxo sanguíneo e permeabilidade vascular, 2) exsudação de plasma, e 3) migração de leucócitos a tecidos (Ellis 1989).
Os neutrófilos são as primeiras células que migram para os tecidos e podem ser vistas freqüentemente em lesões inflamatórias (Wolke 1975, Tyzard, 1992). Seu papel nessas lesões não é muito relevante, mas eles exercem uma atividade extracelular liberando enzimas livres e radicais que causam danos severos do tecido.
Os macrófagos mononucleares têm um papel fagocítico importante, ingerindo o material inerte e antigênico. Os linfócitos são menos associados a lesões inflamatórias, exceto que uma resposta imune mediada por células está envolvida. Se o processo inflamatório não for eficaz em neutralizar a causa dos danos ou se o dano tecidual continuar, pode ocorrer um encapsulamento ou manter na área, que é acompanhada por depósitos de fibra de colágeno, cálcio e pigmentação (Fergusson 1989).
5. Os imunoestimulantes
imunoestimulantes são uma série de agentes naturais e artificiais, que são usados para controlar as doenças de peixe e são mencionadas aqui à medida que atuam diretamente nas células do sistema imunológico, estimulando sua ação efetiva. Eles incluem agentes químicos sintéticos, como o Levamisole (Kajita et al., 1990, Siwiki et al., 1990); Substâncias biológicas como derivados bacterianos, como o LPS (Mac Arthur et al., 1985, Neumann et al., 1995), Beta Glucan (Jorgessen et al., 1993, Thompson et al., 1995), etc., ou polissacarídeos , como Chitin (Sakai et al., 1992) e oligossacáridos (Yoshida et al., 1993); Extractos de animais ou plantas (Davis & Hayasaka 1984; Jang et al., 1995); Fatores nutricionais, como vitaminas C e E (Thompson et al., 1993, Wise et al., 1993); Hormônios, como prolactina e hormônio de crescimento (Sakai et al., 1996, Kajita et al., 1992) e citocinas como IFN e IL-2 (Tamai et al., 1993, Tamai et al., 1992). Estes são apenas alguns exemplos representativos da lista atualmente disponíveis. Atuando fundamentalmente, facilitando a função das células fagocíticas, aumentando sua atividade bactericida, estimulando a atividade das células naturais assassinas, o sistema de complemento, a lisozima e a resposta do anticorpo. A ativação dessas funções imunológicas está associada a um aumento na proteção contra doenças infecciosas. Esses agentes são eficazes em algumas doenças e também sua ação varia com períodos de tempo, dose, métodos de administração e condição fisiológica do peixe (Sakai, 1999).
Em termos gerais, foi descrito que o peixe desenvolve uma boa resposta imunológica, embora quanto Já mencionamos, está sob a influência de diferentes fatores especialmente os do meio ambiente, o que modificam fortemente seu desenvolvimento. O sistema responde e controla os agentes infecciosos que fazem contato com o convidado e é por isso que o conhecimento é básico para o desenvolvimento de programas de controle de doenças.Foi progredido muito nos últimos anos, embora ainda seja necessário realizar estudos básicos de imunologia em diferentes espécies. Por esta razão, é importante ser muito cauteloso ao comparar as observações feitas em algumas espécies de peixes com aquelas realizadas em mamíferos, e da mesma forma dentro de uma espécie para outro peixe. Com exceção do peixe teleste, as informações encontradas nos diferentes grupos ainda são escassas e, portanto, são insuficientes no momento da emissão de conclusões.
O estudo das doenças de peixe aumentou significativamente nos últimos 40 anos, obtendo mais e mais atenção, e isso tem sido principalmente devido ao grande desenvolvimento da aquicultura. O cultivo de peixe é uma grande indústria, sendo muito variado as espécies cultivadas e a produção em todo o mundo aumenta a cada ano. Este aumento afeta adversamente a saúde dos peixes, aumentando a suscetibilidade a diferentes infecções. As informações atualizadas e métodos rápidos e sensíveis de diagnóstico são necessários para detectar efetivamente as diferentes condições. Nesse sentido, diagnósticos com base em reações imunológicas têm a peculiaridade de detectar casos subclínicos em populações de peixes aparentemente saudáveis, permitindo a prevenção da transmissão e disseminação de doenças. Também obtendo vacinas durante a última década baseia-se principalmente no progresso da área de imunologia, e eles foram eficazes no controle de algumas doenças. Finalmente, os imunoestimulantes aumentam a resistência a doenças infecciosas, ativando os mecanismos de defesa.
Para todos os expostos, é evidente que, apesar dos grandes progressos realizados nos últimos anos, é necessário continuar com estudos morfológicos e fisiológicos combinados das populações efetoras, que permitem algumas questões sobre mecanismos funcionais. Básico E isso ajudará a entender por que os diferentes agentes infecciosos são estabelecidos e como eles induzem a patogênese.
Este trabalho de revisão foi realizado com fundos subsidiados B037 concedidos pela Universidade Nacional de Comaue. Agradeço aos meus colegas no laboratório da ictiopatologia do Centro Regional Universitário de Bariloche por seu apoio e por terem generosamente provido de parte do material bibliográfico aqui utilizado. Eu aprecio muito especialmente sobre a LIC. Oscar Serra por sua ajuda na preparação deste trabalho e seu apoio permanente e do Dr. María Marta de E. de Bracco por me encorajar a escrever esta revisão.
Data de recepção: 23.02.2000
Aceitação Data: 30.04.2000
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