Introdução
Silos Technology Bag para armazenar grãos secos tornou-se uma ferramenta importante para os agricultores na Argentina e outros países do mundo (Bartosik, Comunicação Pessoal) . Saco de silos com maior capacidade de armazenamento tem dimensões atingindo 100m de comprimento e 4,3m de diâmetro, e ter uma capacidade de 500 toneladas de grãos, embora a capacidade mais comum seja de 200 toneladas. Saco Silos são relativamente à prova d’água e têm um alto nível de hidróxido de oxigênio (O2) e dióxido de carbono (CO2). A respiração dos componentes a granel (grãos, insetos e fungos, entre outros) consome o O2 e gera CO225. Isso cria condições desfavoráveis para a sobrevivência de fungos e insetos, impedindo que as perdas de qualidade de grãos36. No entanto, quando os grãos são armazenados com níveis de umidade acima do recomendado como seguro (para milho, trigo e soja: 14%; para girassol: 11%) (http://www.cosechaypostcosecha.org, consultado em abril de 2015 ), há uma alta probabilidade que rigorosos microorganismos aeróbicos, alguns anaerobes facultativos, como bactérias e leveduras. Mesmo algumas espécies fúngicas, como o Fusarium Oxysporum, são capazes de mudar seu metabolismo e adaptadas às condições de ausência de O242.
Inúmeras espécies de fusarium, Aspergillus e penicílio e outros gêneros colonizam grãos no campo e podem Continue seu desenvolvimento em condições de armazenamento. Como alguns deles têm o potencial de produzir micotoxinas, além de alterar as propriedades físicas dos grãos, esses agentes podem causar desvantagens à saúde humana e animal. As manifestações de toxicidade em animais são tão diversas quanto as espécies de cogumelos que produzem esses metabólitos, aspecto que causou uma preocupação global sobre alimentos e segurança alimentar. O consumo repetido de baixas doses de aflatoxinas, produzido por Aspergillus Flavus, tem um efeito mutagênico e carcinogênico em animais, além de ser letal em doses altas. Fumonisinas, produzidas por espécies de fusarium, foram relacionadas a algumas doenças específicas, como o leucoencefaloma equino e a síndrome do edema pulmonar em Porcinos7. Embora seja conhecido que as espécies de Aspergillus e penicílio apresentam maior competitividade durante o armazenamento de grãos secos em relação às espécies de Fusarium22.33, as espécies deste gênero podem crescer durante o armazenamento quando os grãos estão molhados.
A deterioração produzida por fungos em grãos armazenados depende de uma série de fatores, que podem ser classificados como extrínsecos, intrínsecos e tecnológicos. Fatores extrínsecos estão associados a condições ambientais, como temperatura, umidade relativa e tensão de O2 e CO2. Os fatores intrínsecos estão relacionados à composição química e às propriedades físicas dos grãos, enquanto os tipos tecnológicos incluem a localização dos grãos nos diferentes setores das estruturas que os contêm, neste caso particular, com referência ao saco de silos. Esses fatores condicionariam o crescimento dos fungos, a potencial produção de micotoxinas e a qualidade final do grão armazenado. Por esta razão, a relevância da detecção da presença de populações fúngicas é entendida, bem como conhecer sua distribuição e tamanho e fatores ambientais que condicionem seu desenvolvimento nos grãos armazenados dentro dos sacos.
As informações compiladas Pode ser usado para projetar estratégias e aplicar práticas corretivas durante o cultivo ou armazenamento, e evitar perdas de qualidade de grãos, principalmente pela produção de micotoxinas.
O objetivo deste estudo foi caracterizado populações fúngicas, particularmente micotoxigênico, que colonizam Grãos de milho armazenados no saco de silos com humididades maiores que os recomendados e também avaliam fatores extrínsecos, intrínsecos e tecnológicos que poderiam influenciar essas populações.
Materiais e Méticosis
As amostras de milho foram obtidas a partir de 5 saco de silos localizado no Sudeste da província de Buenos Aires, Argentina (37 ° 45, 58 ° 18 ‘o; 130m acima do nível do mar). O saco de silos (polietileno de 250 μm de espessura) foram 60m de comprimento, 2,5m de diâmetro, 1,7 m de alta e uma capacidade de armazenamento de 180 toneladas de grãos cada. O teor de umidade dos grãos registrados para cada um dos 5 saco de silos durante a colheita foi maior que 14,5%.O saco Silos identificou como 1, 2, 3, 4 e 5 apresentou valores de umidade de 16,8%, 16,9%, 15,7%, 15,4 e 17,4%, respectivamente. A preparação do Bolsa Silos foi realizada em julho (Silos Bolsa 1 e 2) e Agosto (Silos Bolsa 3, 4 e 5) de 2010, e estes foram extraídos em dezembro de 2010 (Silos Bolsa 1 e 2) e janeiro de 2011 (silos Bag 3, 4 e 5). No total, 270 amostras de feijões de milho foram analisadas, extraídas de 3 estratos do perfil vertical do saco silos. O estrato superior englobou uma profundidade de 0 a 0,2m, o estrato médio de 0,2 a 0,6 m e o estrato inferior de 0,6 a 1,8m. Além disso, do ponto de encerramento dos sacos, foram estabelecidas diferentes áreas para a extração das amostras, localizadas em 6 setores equidistantes ao longo do Silos Bolsa: a 10m (zona 1), a 20m (zona 2), 30m (zona 3), 30m ), 40m (zona 4), 50m (zona 5) e 60m (zona 6). As amostras foram coletadas com uma salada de grãos de 1,8m de comprimento, em 3 vezes de armazenamento: no fechamento do saco de silos (tempo 1), após 90 dias (tempo 2) e antes da abertura do saco de silos ou no final do período (Tempo 3). Em cada estrato e zona, 3 amostras de aproximadamente 1,5 kg foram coletadas para formar uma amostra composta de 4,5 a 5kg. Os grãos coletados foram colocados em sacos de papel e armazenados a 4 ° C até a análise.
Análises físicas e químicas
dentro do saco de silos foi registrada a temperatura do perfil em massa nas 3 vezes de amostragem. Para isso, foi utilizado um tubo de temperatura portátil equipado com sensores de 3 pontos, que foi inserido no centro de cada saco de silo a 30m a partir do fechamento de cada (entre as zonas 3 e 4). A localização de cada sensor coincidiu com os 3 estratos do perfil vertical da bolsa.
A concentração de O2 e CO2 da atmosfera interna dos sacos foi determinada nos três tempos de armazenamento e para as 6 zonas , embora apenas o estrato médio do perfil vertical seja considerado, porque os gases se difundem verticalmente. Para esta medição, foi utilizado um medidor de gase portátil (ponto de verificação, PBI, sensor Dan, Dinamarca).
O teor de umidade dos grãos foi medido com um medidor de umidade (Dickey-John, GAC 2100, EUA) . O pH dos grãos em solução aquosa também foi registrado em uma proporção de 2: 1 (20ml de água destilada: 10g de grãos de terra), com o uso de um pêssego digital e portátil (Oakton Model Ph11, N ° Série 203852, Singapura ).
Quantificação, Isolamento e Identificação de Micobiota
A contagem de fungos filamentosos e levedura foi realizada pela técnica de diluições decimais em tubo e semeadura (em duplicata) em placas de placa de petri com glicose de agar abstrato de levedura (YGCA , Merck®, USA UU) 29 Para fazer isso, e de cada amostra, as suspensões foram feitas com 10g de grãos em 90ml de solução de diluente (0,1%) de Casino Pepton (Britania®, Argentina). As placas foram incubadas a 25 ° C (na escuridão) durante 7 dias e o número total de unidades de formação de colônias (UFC / g) foram determinadas, bem como de cada gênero ou espécie identificada. Os valores do UFC / G foram transformados para LOG10 UFC / G para executar análises estatísticas.
Para obter os isolados para identificação, cada colônia com características morfológicas diferentes foi cultivada novamente em placas de Petri com YGCA durante 7 dias a 25 ° C e na escuridão. Cepas puras foram preservadas a uma temperatura de -20 ° C em glicerol de alta pureza (BioPack®, Argentina) em uma concentração a 35% v / v na água.
O isolamento de espécies de penicílio, Aspergillus, Eurotium , Eupenicillium, wallemia, clasporium, epiccocum, acremonum e leveduras foram identificados com chaves taxonômicas29. Os isolados de espécies de fusarium foram identificados a partir de chaves específicas15,26,38,41. Para a denominação da espécie, a última atualização da nomenclatura do Código Internacional de Nomenclatura (ICN) 20.30 e o fungorum do índice foi consultado (http://www.speciesfungorum.org, consultado em abril de 2015).
As identificações das espécies de fusarium e uma espécie de Aspergillus foram confirmadas por análise filogenética do fator de alongamento da transcrição 1 Alpha (TEF1) com os primers EF-728M / EF239, com a metodologia proposta por Chaverri e Samuels8. As reações de sequenciamento foram realizadas em um Equipamento Bigdyetm Terminator V 3.1 (Biosystems Aplicados, EUA), com base no método Sanger e cumshots com o analisador genético 3130xl em Sigysa (Argentina). Um alinhamento com Clustalw foi realizado em Mega 4.1 das seqüências obtidas juntas com sequências de referência salvas no Genbank.Análises de parcimônia foram realizadas em NonA com o uso do ambiente invernado com busca heurística com 10000 repetições e estratégia de pesquisa TBR, e o suporte de ramos foi calculado com base em um bootstrap de 1000 réplicas. Para estas análises, as sequências de espécies estreitas foram adicionadas como um grupo de controle externo.
Determinação de micotoxinas
composta de grãos de 5 kg foram formadas por cada estrato, incluindo as 6 zonas de cada um dos 5 saco de silos, e eles Foram encaminhados para a Fundação da Pesquisa Científica Teresa Bento de La Cruz, Luján (Província de Buenos Aires), onde foram avaliados. A presença de aflatoxinas foi investigada (AFLA: B1, B2, G1, G2), Zearalenona (ZEA) e desoxinivalenol (DON), de acordo com o Romer No. My8402S, versão 94.237, e fumonisinas (FB1, FB2, FB3) foi investigada com o protocolo AOAC, o método oficial 995.152. Para as quantificações acima mencionadas, foi utilizada a cromatografia líquida de alta resolução (HPLC). O sistema HPLC utilizado foi da Agilent 1100 Series (Alemanha), que incluiu um Degasser G1322A, um amostrador automático G1313A, um detector de fluorescência G1321A, uma bomba G1311A Quaternária e um controlador de temperatura G1316A.
Análise Estatística
As observações feitas dentro do mesmo saco de silo não podiam ser assumidas como estatisticamente independentes, o uso de modelos lineares mistos que nos permitiram estudar os efeitos dos fatores de interesse e, ao mesmo tempo, a possível estrutura de correlação entre as observações. Os modelos lineares mistos foram ajustados para determinar o efeito fixo do estrato, a área da embarcação, o tempo de armazenamento e suas interações sobre o pH, a umidade dos grãos, o número total de fungos e leveduras UFC e O número total de Fusarium SPP UFC. E de A. Flavus. Esses modelos também incorporavam os efeitos aleatórios do saco, estratem, zona e tempo, incorporar uma correlação positiva entre observações feitas no mesmo nível de qualquer um desses fatores. Por outro lado, os modelos ajustados para analisar as concentrações de O2 e CO2 não consideravam o efeito fixo do estrato, e para a temperatura que não consideraram o efeito fixo da área do saco. A função LME do pacote “NLME” da linguagem R34 foi usada. Quando o efeito significativo dos fatores (P
0,05) foi detectado, foram realizadas várias comparações simultâneas das medições estimadas pelo modelo, utilizando a função “GLHT” do pacote R19 “multocup”. Esta função usa a distribuição de conjunto de todas as diferenças estimadas de meios a serem comparadas, sem corrigir o nível de significância pelas comparações múltiplas, de maneira semelhante a um teste significativo de diferença mínima. Análise física e química
no momento de grãos de ensacamento , o conteúdo médio de umidade considerando 5 saco de silos foi de 16,4 ± 0,7%, enquanto no final do período analisou os valores aumentados significativamente (p = 0,005) a 16,7 ± 1, 11% no estrato superior. A temperatura dos grãos foi aumentada de 8.6 ° C no início do armazenamento a 22,8 ° C aos 5 meses de armazenamento. Naquela época, a temperatura foi significativamente diferente nos 3 estratos analisados: isso foi maior no estrato superior em relação ao estrato médio (p = 0,029) e inferior (p
0,001). As concentrações de O2 e CO2 durante o armazenamento podem ser observadas na Tabela 1. No início do armazenamento, os níveis de O2 variaram entre 19,20 e 19,66% e níveis de CO2 entre 0,76 e os 1,30%. Depois do tempo passa, os níveis de O2 foram progressivamente reduzidos, enquanto o CO2 aumentou. Foi detectado um efeito de interação significativo entre a área do saco silo e o tempo de armazenamento para o nível de O2 (p = 0,0054) e CO2 (p = 0,0226). A concentração de CO2 foi aumentada para a terceira amostragem e foi significativamente diferente (p = 0,0091) entre as zonas. A concentração O2 diminuiu significativamente no final do período analisado e concentrações significativamente diferentes também foram detectadas (p = 0,0003) entre as zonas do saco silos. O pH dos grãos variou significativamente entre os estratos (P0.001) e os tempos (p = 0,0036): a maior acidez foi registrada no estrato superior e no final do período de armazenamento (Tabela 2).
evolução de CO2 e O2 concentrações na atmosfera de grãos de milho armazenado em silos saco
Zonasa | Concentração de CO2 (% ) | O2 concentração (%) | ||||
---|---|---|---|---|---|---|
tempo de 1 | tempo de 2 | Time 3 | Hora 1 | Time 2 | Tempo 3 | |
1 | 0,78 ± 0,5 AB | 9,50 ± 5,1 AA | 12,57 ± 4,4 BA | 19,58 ± 0,7 a a | 10,54 ± 5,1 AB | 7,80 ± 4,1 AB |
2 | 1,30 ± 1,2 AB | 11,24 ± 4,4 AA | 14,68 ± 4,3 B A | 19,20 ± 0,9 A A | 7,70 ± 5,4 A B | 5,72 ± 3,3 A B |
3 | 0,90 ± 0,5 AB | 10,80 ± 4,0 AA | 14,44 ± 6,5 BA | 19, 30 ± 0,8 AA | 7,38 ± 4,6 AB | 6,68 ± 4,3 AB |
4 | 0,84 ± 0,5 AB | 12,06 ± 3,3 AA | 17,72 ± 4,7 AB A | 19,40 ± 0,4 A A | 6,62 ± 5,3 A B | 3,12 ± 1,5 A B |
5 | 0,76 ± 0,2 para C | 12,34 ± 4,1 AB | 19,00 ± 4,5 AB A | 19,46 ± 0,4 AA | 6,16 ± 5,1 AB | 2,86 ± 2,3 AB B |
6 | 0,81 ± 0,5 AC | 12, 12 ± 5,5 AB | 21,44 ± 3,9 AA | 19, 66 ± 0,6 AA | 7,50 ± 5,7 AB | 1,14 ± 0,4 BC |
os valores correspondem às médias ± da bolsa 5 silos. Diferentes letras minúsculas dentro da mesma coluna indicam diferenças significativas (P0.05) entre as diferentes áreas avaliadas. Letras maiúsculas diferentes dentro da mesma linha indicam diferenças significativas (p0,05) entre os diferentes tempos.
Evolução do pH dos grãos de milho armazenados em saco de silos
pH | ||||
---|---|---|---|---|
tempo | é | em | ei | médio |
1 | 6, 12 ± 0,1 | 6,14 ± 0,0 | 6,16 ± 0,1 | 6,14 ± 0,1 a |
2 | 6,13 ± 0,1 | 6,15 ± 0,1 | 6, 17 ± 0,2 | 6,15 ± 0,1 A |
3 | 5,88 ± 0,0 | 5,90 ± 0,0 | 5,93 ± 0,1 | 5,90 ± 0,1 B |
Média | 6,04 ± 0,1 C | 6,06 ± 0,1 B | 6,09 ± 0,1 A | – |
os valores correspondem às meias ± da bolsa 5 silos
Tempo 1:. fechamento do saco silos; Tempo 2: 90 dias de armazenamento; Tempo 3: cinco meses de armazenamento.
Diferentes letras indicam diferenças significativas (P0.05) entre estratos ou horários.
é: Stratum superior; Em: estrato médio; Ei: stratum inferior.
composição do micobiota
o número Total LOG10 UFC / G No início do armazenamento foi 4.11 ± 0,5 e antes da abertura dos sacos foi de 4,42 ± 1,0) (Tabela 3). Embora não foram observadas diferenças significativas nas contagens totais entre os tempos (p > 0,05) e as zonas do saco silos (p > determinou-se a 0,05), um efeito significativo do estrato (p = 0,0314), em que o estrato superior gravado um número maior de UFC / g em relação ao estrato inferior.
Evolución del recuento total de de la micobiota en granos de maíz almacenados en silos bolsa
Recuento total (log10UFC / g) | ||||
---|---|---|---|---|
Tiempo | ES | eM | EI | mídia |
1
4,21 ± 0,3 |
4,07 ± 0,6 | 4,11 ± 0,5 a | ||
4,28 ± 0,7 | 4,05 ± 0,8 | |||
3 | 4,64 ± 1,0 | 4,46 ± 1,0 | 4,15 ± 0,9 | 4,42 ± 1,0 a |
Média | 4,36 ± 0,7 a
4,26 ± 0,7 a 0,8 ± 4,09 b – |
Gênero Numero de especies |
|
|||
---|---|---|---|---|
T1 | T2 | T3b | ||
Penicillium spp. Fazer a ligação
51.40 7 10 11 |
||||
Aspergillus spp. Fr.:Fr. | 5,71 | 2 | 0 | 0 |
Fusarium spp. Fazer a ligação
11.40 4 4 4 |
||||
Eupenicillium spp. A. Ludw. | 2,85 | 1 | 0
1 |
|
Cladosporium sp. Fazer a ligação | 2,85 | 1 | 0 | 0 |
Epicocum sp. Fazer a ligação | 2,85 | 0
1 |
0 | |
Wallemia sp. (Pe) Arx | 2,85 | 0
1 |
0 | |
5,71 | 0
1 2 |
|||
Moniliella sp. Stolk & Dakin | 2,85 | 0 | 0
1 |
|
Acremonium spp.Link | 2,85 | 1 | 1 | 1 |
hifopichia spp. (Biidin et al.) ARX & | 2,85 | 1 | 1 | 1 |
candida spp. Berkhout | 2,85 | 0 | 1 | 1 |
debaryomyces spp. Lodder & kreger ex kreger | 2,85 | 0 | 1 | 1 |
Proporção de espécies de cada gênero com relação ao número total de espécies identificadas
.
As espécies de fusarium foram isoladas em 82,3% do total de amostras analisadas durante os 5 meses de armazenamento. Com base nas características macroscópicas das colónias e microscópica de estruturas reprodutivas e o estudo filogenética com o marcador TEF1, foram identificadas as seguintes espécies Fusarium: Fusarium verticillioides (. SACC) Nirenberg, Fusarium proliferatum (Matsushima) Nirenberg, Fusarium subglutinans (Wollenw E Vigilizar) Nelson, Toussoun e Marasas e F. Oxysporum Schlecht. Emendous. SNYD. e Hans.
Em relação a Aspergillus spp., A partir da caracterização morfológica dos isolados e estudo das sequências de ITS identificados 2 espécies no primeiro tempo de armazenagem, em todos os silos de saco. A referida espécie pertencia ao subgénero Circumdati, Secção Flavi, A. flavus Link e a secção Nigri, Aspergillus Níger Tiegh.
A presença de Eurotium spp. Observou-se no segundo e na terceira amostragem em 10% e 37,8% das amostras, respectivamente. As espécies predominantes foi Eurotium Amstelodami L. Margem.
Em relação à levedura, 27,8% de amostras de milho recolhidos no início de armazenamento mostraram contaminação com este grupo microbiana, enquanto que no final do período em que foram isolados em 58% deles. As contagens médias foram 3,3 ± 0,70 log10 ufc / g e 4,62 (± 0,74) log10 ufc / g no início e no final do armazenamento, respectivamente. A espécie dominante era Hyphopichia Burtonii (Bidin et al.) Arx & van der Walt, isolado em 91,9% das amostras de grãos. As restantes espécies foram classificadas como pertencentes ao gênero Candida.
espécies fúngicas com capacidade potencial para produzir micotoxinas
f. Verticillioides, F. proliferatum, A. flavus, P. Citrinum, P. verrucosum e E. Amstelodami foram isoladas as espécies de amostras de grãos de todos os silos de saco. A frequência de isolamento e contagens das espécies de fusarium foi reduzida no final do período analisado e aspergilus não foi encontrada naquela época. A. Flavus foi isolado em 11,44% do tempo amostras 1, com uma contagem de 2,73 ± 0,71 log10 ufc / g. A percentagem de amostras contaminadas com espécies Fusarium foi reduzida para 5 meses a um valor de 54,4%, apesar do facto das contagens não apresentou variações significativas (p = 0,0552) entre o primeiro (2,83 ± 0, 92 log 10 UFC / L) e o terceiro tempo de amostragem (3,18 ± 0,77 log10 ufc / g). Em contraste, a espécie de penicílio e o Eurotium aumentou sua frequência de isolamento e abundância para o final do armazenamento. P. citrinum foi isolado em amostras de grãos de 3,30% da segunda metade e com uma contagem de 3,53 ± 0,60 log 10 UFC / L, enquanto que P. verrucosum foi isolado a partir de amostras de grãos recolhidos no segundo (0,55% das amostras e as contagens de 2,3 ± 0,00 log 10 UFC / L) e, no terceiro tempo de armazenamento (3,88% das amostras e as contagens de 2,98 ± 1,00 log 10 UFC / g) A contagem das populações do Eurotium SPP. Aumentou entre a segunda e terceira vez de armazenamento, e foi de 2,08 ± 0,49 e 2,57 ± 0,49 log 10 UFC / L, respectivamente.
micotoxinas
A contaminação apresentada amostras totais Analisado com fumonisinas, enquanto 40% revelaram a presença de aflatoxinas. Fumonisinas FB1 foram detectadas em 100% das amostras, fumonisinas do FB2 a 86% e fb3 fumonisinas a 53%. Por outro lado, 18,4% das amostras apresentaram apenas FB1; 18,4%, FB1 + FB2 e 47,3%, FB1 + FB2 + FB3 (Tabela 5).
CONCENTRACION de fumonisinas (mg / kg) en Grãos de maíz almacenados en Los Cinco silos bolsa foi então 90 Dias
fumonisinas | Valor Mínimo | Valor Máximo | mídia conteúdo > | Mediana |
---|---|---|---|---|
0,120 | 5.707 | 1.708 | 0,479 | |
FB1 | 0,116 | 4.166 | 1.190 | 0,299 |
FB2 | 0,067 | 1.217 | 0,446 | 0,196 |
FB3 | 0,049 | 0,317 | 0,176 | 0,171 |
Cuando las analizaron é af latoxinas de solo é DETECTO la presencia en B1 de AFLA concentraciones Mínimas de 0,0003mg / kg 0,0008mg de Maximas y / kg.
Los Valores de micotoxinas determinados al finais del almacenamiento ou registraron incrementos respecto de los niveles detectados de modo que 90 Dias (Cardoso, Comunicación pessoal). Las micotoxinas ZEA y ENTER ou detectadas Fueron POR empleadas las Técnicas.
Discusión
La temperatura, la actividad Agua (aw) y la Humedad de los Granos para Factores condicionantes de la Colonização fúngica y de la PRODUCCIÓN de micotoxinas Durante el almacenamiento de los granos23. Isso embargo, hasta el sonido ou é realizaron Estudos sobre la composición de gases de la atmósfera intergranaria y de la acidez de los granos, Factores that podrían Contribuir para explicar el Comportamiento de las poblaciones fúngicas en Sistemas de almacenamiento Como los silos bolsa.
El incremento de la Humedad Registrado hacia el último del almacenamiento en el estrato Superior de los silos bolsa estudiados podria ser explicado por la existencia de ESTRATIFICACION de la Humedad de los granos ubicados en Áreas de contacto con la cubierta plástica, causado posiblemente pOR Ciclos repetidos de adsorción condensación de Agua y, Como consecuencia de la variación diaria de la temperatura ambiente. Casini et al.5 comunicaron ESTRATIFICACION de Humedad en la capa superficial de Grãos de girasol almacenados plásticas en Bolsas y con la la relacionaron disminución de la temperatura nocturna, que una provocó condensación de la superficie de los granos y de la cubierta plástica.
Los cambios en la composición de O2 y de CO2 Durante el Período de la actividad almacenamiento reflejaron metabólica en el interior de los silos bolsa. Así que es la de los granos respiración y de la microbiota asociada redujo el nivel de O2 é incrementó el nivel de CO2, Generando una atmósfera anaerobia. Estos Resultados con los reportados coinciden en Italia para el almacenamiento de Grãos de trigo de maíz y en bolsa18 silos. Por otro lado, en la zona 1 (cierre da Bolsa) de los 5 silos bolsa final de Al del almacenamiento é determinó la Mayor concentración de O2, lo que podría Indicar un cierre inadecuado de aquellas; en consecuencia, é favorecería la PRODUCCIÓN de microambientes para el desarrollo de la micobiota aeróbica. Respecto del pH de los granos, é determinó su disminución en los granos ubicados en el estrato Superior hacia el tercer almacenamiento del Tiempo. Este resultado Podría ser explicado a partir del registro de un Mayor Numero de UFC / g totales en Los granos dispuestos en dicho estrato, ocasionado por la actividad Mayor metabólica. El Comportamiento de variável esta en condiciones de almacenamiento hermético ou estudiado fue hasta el sonido. Por ello, el monitoreo de la acidez de los granos Durante el almacenamiento Puede Contribuir para comprender y explicar la dinámica de las poblaciones fúngicas, y en especial la de las micotoxigénicas Associadas a ellos.
El Recuento totais de la micobiota colonizó that los Granos de maíz ou presento Variaciones a través del Tiempo, coincidiendo Informado con lo pOR otros en Investigadores Argentina28. Estos Resultados determinados podrían Estar por el incremento de la concentración de CO2 acidez y la de los granos, y por la reducción del nivel de O2, que la actividad afectaron metabólica. Por el contrario, en Italia los Reportes indicaron una reducción en el Recuento de hongos TOTALES Durante el almacenamiento de maíz en silos bolsa18.
Otro Aspecto Relevante de Este estudio determinó that los recuentos fúngicos totales Fueron afectados por el estrato (posición de los granos en el perfil del silos verticais bolsa): é encontraron los mayores Valores en el estrato superior y Los Menores en el inferior.Essa descoberta diferencial na contagem populacional influenciada pela localização dos grãos nunca foi relatada; Isso pode ser devido aos 3 fatores extrínsecos explicados acima: a) o aumento da temperatura na camada superior do saco, em resposta a variações diárias de temperatura ambiente; b) a existência de variação de umidade nos grãos individuais localizados no estrato superior da bolsa, causados por variações diurnas e noturnas de temperatura, o que causa condensação na superfície dos grãos, e c) a influência de uma maior troca de gases entre o ambiente e o interior da bolsa nos grãos localizados no stratum35. No menor estrato, foram também gerados microemblias onde a temperatura inferior e a umidade e a menor troca gasosa influenciaram negativamente o metabolismo respiratório, o que pode ter afetado a sobrevivência de diferentes espécies fúngicas, incluindo micotoxgênica.
quanto à composição de Populações fúngicas, observou-se que a presença de diferentes espécies foi influenciada por condições ambientais dinâmicas que dominaram o interior da embarcação. No início do armazenamento, espécies de Fusarium e Aspergillus foram isoladas junto com outras espécies associadas a grãos. No entanto, a geração de um ambiente anaeróbico e o aumento da temperatura e acidez dos grãos como tempo de armazenamento avançou uma microbiota dominada por espécies de penicílio, Eurotium e levedura. O aumento no número de amostras positivas com o Eurotium no final do armazenamento pode ser devido ao fato de que este gênero é tolerante ao estresse, seus esporos germinam a uma temperatura ideal a 30 ° C e é capaz de adaptar mais a ácido ph16. Da mesma forma, a frequência de isolamento e a levedura conta aumentou no final do período considerado. Embora esses resultados não coincidam com os relatados por outros pesquisadores sob condições semelhantes28, o aumento poderia ser explicado pelo domínio de uma atmosfera anaeróbica.
A frequência de isolamento de espécies potencialmente produzindo (A. Flavus e Fumonisins (F. Verticillioides e F. proliferatum) foi reduzido no final do armazenamento. Alguns pesquisadores relataram que as espécies de Aspergillus seria melhor adaptada ao crescimento dos substratos com pH43 alcalina, reduzindo o pH de grãos poderiam ter afetado a sobrevivência dessas espécies. Por outro lado, pode-se inferir que, embora A. Flavus seja considerado uma espécie favorecida por condições de armazenamento4, provavelmente teria inconveniente para se adaptar às condições ambientais de armazenamento no saco de silos, com importantes restrições à concentração e aumento da acidez. A identificação de A. Flavus em milho em diferentes condições de armazenamento coincidiu com os informados por outros pesquisadores em diferentes regiões agroecológicas da Argentina10,17,32.
a frequência de isolamento do Fusarium SPP. Foi reduzido no final do armazenamento; No entanto, sua contagem populacional não registrou variações. Estes resultados concordam com aqueles relatados por outros pesquisadores na Argentina6,14 e outros países13,31.
Ao contrário do que aconteceu com a contagem total de populações fúngicas, que foi afetada pelo estrato celeiro, sem efeito da posição dos grãos foi detectado no saco na contagem das espécies de fusarium. Pela primeira vez, é comunicada que a posição dos grãos dentro do saco de silo não afetou a contagem da população; Possivelmente, isto é devido ao fato de que as espécies deste gênero estão associadas ao substrato de milho e são menos influenciadas pelas condições ambientais dentro do Bolsa21,33 silo.
A capacidade das espécies de fusarium e a. Flavus Para produzir fumonisinas e aflatoxinas em milho foi demonstrado em diferentes investigações realizadas em nosso país3. No entanto, na Argentina, há apenas legislação para as aflatoxinas totais e esta especifica os limites máximos para amendoim, milho e seus derivados, e para a aflatoxina M1 em leite fluido e pó (http://www.anmat.gov.ar/alimentos/codigoa, consultado em Abril de 2015). Para as micotoxinas restantes, a Argentina considera os limites de tolerância indicados pela legislação em vigor na Comunidade Européia12.
Os níveis totais de fumonização excedidos os valores máximos permitidos de 4 mg / kg11 em 3 das amostras analisadas, correspondentes 3 para o mesmo saco de silo (saco 3).Os grãos deste saco de silo foram pampers no mês de agosto, para que as altas concentrações determinadas pudessem ser explicadas por uma maior permanência de grãos na cultura, onde espécies de fusarium têm maiores vantagens adaptativas para colonizar grãos e produzir o micotoxin9. Este aspecto é relevante, uma vez que poderia ser inferido que um atraso na colheita causaria um acúmulo de fumonisinas nos grãos no campo. Aqueles pesquisadores que analisaram fumonisinas totais em milho em diferentes áreas de produção da Argentina determinados níveis que foram de 2.525mg / kg a 11.528mg / kg14 e de 0,01mg / kg a 31.108mg / kg28, que manifestam uma variabilidade marcada.
Em relação à aflatoxinas, os níveis registrados foram inferiores aos limites estabelecidos em nosso país para grãos de milho (0,020mg / kg), que podem estar relacionados à menor adaptação de A. Flavus às Condições Descrições Ambientais para a Área de Estudo . Esta espécie é comumente isolada em milho cultivado nas regiões central e norte da Argentina, onde é favorecida por temperaturas acima de 30 ° C24.
entre as micotoxinas produzidas pela Penicillium spp. Ocratoxin A (OTA), Patulina e Citrinine27 destacam-se. Neste estudo, P. Citrinum e P. Verrucosum, potenciais produtores de citrinina e OTA, respectivamente, foram isolados com baixa frequência. Possivelmente, a composição do gase da atmosfera e o aumento da acidez não favoreceram seu desenvolvimento.
Com referência ao aumento de E. Amstelodami, atualmente não há relatos de produção OTA não são conhecidos para esta espécie em milho armazenado no saco de silos. No entanto, foi relatado que esta espécie produziu OTA em grãos de cereais no armazenamento1, então haveria estudos necessários sobre a produção OTA pelo Eurotium spp. Em grãos de milho armazenados em saco de silos, já que esta micotoxina, bem como as já mencionadas, representa um risco potencial para a saúde humana e animal.
Embora o armazenamento de grãos no saco de silos constitua um armazenamento simples do sistema e com um Baixo custo de investimento para preservar grãos, é necessário monitorar o estado dos grãos antes de serem embalados e periodicamente em armazenamento, a fim de detectar precisamente sua possível deterioração devido ao desenvolvimento de fungos. Os dados sobre a dinâmica das populações micotoxiênicas e os fatores que condicionam sua aparência e proliferação fornecidos por este estudo podem contribuir para projetar estratégias destinadas a evitar a alteração da qualidade dos grãos durante o armazenamento. Pode-se estar relacionado ao uso de diferentes misturas de gás (com alto teor de CO2), considerando a baixa característica de permeabilidade plástica da embarcação. Desta forma, seria uma alternativa válida para reduzir as perdas de qualidade dos grãos destinados ao consumo humano e animal causadas pela produção de metabólitos tóxicos, quando os armazenados por períodos superiores a 5 meses.
legislação que estabelece limites de tolerância para diferentes micotoxinas nas matérias-primas e alimentos elaborados, seria relevante estabelecer valores máximos de tolerância para fumonisinas, uma vez que sua presença foi detectada em uma alta porcentagem de amostras de grãos de milho analisadas nos últimos anos na Argentina, Uma situação que poderia ser um problema para o marketing e industrialização de grãos, seja para consumo humano ou animal.
Responsabilidades ÉticasProtecção de pessoas e animais
Os autores declaram que, para esta pesquisa, não foi realizado experimentos em humanos ou animais.
Confidencialidade dos dados
os autores Eles declaram que neste artigo não aparecem dados do paciente.
Direito à Privacidade e consentimento informado
Os autores declaram que os dados do paciente não aparecem neste artigo.
Financiamento
O trabalho atual foi financiado Pela Universidade Nacional de Mar del Plata (Projecto AGR375 / 12) e do Instituto Nacional de Tecnologia Agrícola (Projecto Aeai 274.420, Área Estratégica da Agroindústria), e foi apresentada por Claudia C Castellari como requisito parcial para obter o grau acadêmico de médico Na ciência agrícola na Universidade Nacional de Mar del Plata, Argentina.
Conflito de Interesse
Os autores declaram não ter conflito de interesses.