Introdução
Alterações no metabolismo de cálcio-fósforo são um problema prevalente e de grande importância para pacientes com CKD (doença renal crônica) .1-8 A avaliação, bem como o tratamento é vital para o controle ideal de nossos pacientes.
O método de diagnóstico ideal para o grau e tipo de osteodistrofia renal ainda é a biópsia da crista ilíaca após a tetraciclina dupla rotulagem, 9-25, mas, devido Para sua natureza invasiva e trabalhada, é de aplicação difícil na prática clínica diária.26 Atualmente, o diagnóstico e o tratamento dessas alterações são baseados na determinação de níveis plasmáticos de hormônio paratireóide intacto (ipth) .10,17,27-31 No entanto, a determinação deste hormônio não é simples e é submetida a grande variabilidade.32-34 Além disso, os métodos utilizados para processar as amostras IPTH não são padronizados, um fato que pode ser uma importante fonte de variabilidade pré-teste.
Objetivo do estudo
para ana A variabilidade de lisonso no IPTH Determination Resultam comparando diferentes métodos de processamento da mesma amostra de plasma tratada com ácido etilenodiaminetetraacético (EDTA) em pacientes com DRC em diferentes estágios de desenvolvimento.
material e método
Em nosso estudo, analisamos 294 amostras de sangue de 49 pacientes com doença renal crônica (CRC) em diferentes estágios de desenvolvimento, 18 foram de pacientes transplantados na unidade de transplante renal (36,7%) e 31 da unidade de hemodiálise crônica em nosso hospital ( 63,3%).
Todas as amostras de sangue foram coletadas pela manhã (entre 8 e 9h) após uma rápida e prediallysis de oito horas para os pacientes submetidos ao tratamento renal substitutivo. O sangue foi desenhado no serviço de hemodiálise do nosso hospital. Três tubos de EDTA foram extraídos de cada paciente: dois tubos 5ml e um tubo de 10 ml. Imediatamente após a extração, eles foram enviados para a geladeira no departamento de medicina nuclear, onde cada um foi processado de forma diferente, como será descrito aqui.
grupo de referência ou grupo 1 (tubo de 5ml EDTA):
– amostra de sangue coletada (e enviada rapidamente refrigerada ao departamento de medicina nuclear).
– centrifugação refrigerada.
– plasma imediatamente congelado.
Grupo 2 (tubo de 10ml EDTA):
– amostra de sangue coletada.
– mantido uma hora à temperatura ambiente.
– centrifugação normal.
– Separado em 3 tubos:
– Um dos tubos é imediatamente congelado. Grupo 2A
– um tubo é refrigerado por oito horas e depois congelado. Grupo 2b
– Outro tubo é refrigerado para > 24 horas e congelados. Grupo 2C
Grupo 3 (Tubo EDTA 5ML):
– amostra de sangue coletada.
– mantido > 3 horas à temperatura ambiente.
– centrifugação normal.
– separado em dois tubos:
– imediatamente congelado. Grupo 3A
– Um tubo é refrigerado para > 8 horas e congelados. Grupo 3B
Os métodos de processamento usados para as amostras de sangue em nosso estudo foram aqueles geralmente aplicados neste domínio. O IPTH foi medido usando o ensaio imunoradiométrico (Ensaio Total Total de Scantibodies Intact, 2ª geração). A variabilidade no interior foi obtida foi inferior a 2,5%. O grupo 1 foi considerado o padrão de ouro, uma vez que estas são as condições geralmente recomendadas para este tipo de amostras, independentemente do método ou conservante usado (EDTA ou citrato).
Um de duas comparações foi realizada entre o ipth valores médios no grupo de referência e os outros. Portanto, a normalidade da distribuição foi verificada primeiro aplicando testes de variância de homogeneidade e normalidade. Posteriormente, realizamos uma comparação por pares com o teste T incluindo a correção de Bonferroni. O nível de significância foi estabelecido em resultados p>
A idade média da população estudada foi de 60,88 ± 17,65 e a faixa etária entre 26 e 90 anos. Dos 49 pacientes incluídos no estudo, 25 eram do sexo feminino e 24 masculinos, o que corresponde a 51 e 49%, respectivamente. A principal causa de doença renal crônica é não afiliada, seguida de origem vascular e glomerular. As restantes características descritivas da nossa população de estudo são exibidas na Tabela 1.
O valor médio no grupo de referência foi de 202,25 ± 199.72pg / ml. Os valores médios de IPTH intactos nos outros grupos analisados, exibidos na Tabela 2, foram 196 ± 203,23PG / ml, 202,8 ± 200,2PG / ml, 200.06 ± 194,87 pg / ml, 204,08 ± 204.073pg / 197,9pg / ml. Como pode ser visto na Figura 1, os resultados eram praticamente idênticos para cada grupo, sem diferenças importantes em relação ao grupo de referência (p = 0,87, p = 0,95, p = 0,96, p = 0,90, p = 0,90, p = 0,90, p = 0,90, p = 0,90, p = 0,90, p = 0,90, p = 0,90, p = 0,90, p = 0,90, p = 0,90, p = 0,90), quando comparando com os grupos 2a, 2b, 2c, 3a e 3b, respectivamente).
Discussão
Determinação de soro de paratormona é difícil de quantificar, pois é bastante instável tanto no soro quanto no sangue43-45 (AV. 5 minutos). O método de referência é baseado no giro refrigerado e congelando a amostra imediatamente após a extração. No entanto, este procedimento é muito difícil na prática clínica diária, uma vez que a atividade de nefrologia não é apenas limitada ao domínio do hospital. Em geral, as amostras são desenhadas nas clínicas e depois enviadas para os hospitais de encaminhamento para análise. Na ocasião, essas clínicas estão a uma distância dos hospitais. A maioria das amostras não são giradas ou separadas no local de extração porque não têm os meios necessários para fazê-lo. Além disso, as amostras são giradas à temperatura ambiente. Podemos derivar desta importância de saber e reduzir a variabilidade para um máximo no manuseio de amostras.
Atualmente, não há um método padronizado de processá-los. Há alguma controvérsia sobre a estabilidade do paratormônio em soro ou plasma tratada com EDTA. Vários estudos afirmam que a determinação do IPTH no soro é menos estável do que a obtida de plasma e amostra de sangue conservada em tubos tratados com EDTA.35-42 No entanto, Omar et al.38 em 2001 observaram que os níveis de IPTH em EDTA diminuíram 14,8 % após o restante à temperatura ambiente durante 48 horas. Além disso, recentemente, Cavalier et al.42 provaram que as amostras processadas com EDTA nem sempre são mais estáveis do que no soro. Eles argumentam que a estabilidade do ipth após 24 horas a -20ºC é maior no soro do que para o plasma tratado com EDTA.
Em quase todos os estudos realizados até a data, o soro e o EDTA são comparados.35-42 No entanto, uma das limitações que nosso estudo apresenta é que um grupo controle com soro (citrato) não foi estabelecido. Portanto, não podemos avaliar as determinações do IPTH no soro e plasma (EDTA) uma vez congelados a -20ºC, nem comparar com as conclusões de Cavalier et al. Além disso, não analisamos o que ocorre após 48 horas à temperatura ambiente, a fim de comparar com o Omar et al. Resultados.
As descobertas deste estudo não mostram diferenças significativas entre o grupo de referência e os outros grupos analisados. É confirmado que as amostras de plasma tratadas com EDTA são estável e seu uso é recomendado com centrifugação refrigerada e congelamento imediato é difícil de alcançar.
Conclusão
O uso de EDTA como conservante No processamento de amostras analíticas para a determinação do sangue do IPTH permite um maior tempo de processamento sem a exigência de congelamento imediato, exibindo uma variabilidade mínima nos resultados obtidos de acordo com diferentes métodos de processamento. Esses resultados podem ajudar a estabelecer estratégias logísticas para o processamento de amostras de sangue em pacientes com CRC.
tabela 1. Recursos descritivos da população do estudo
tabela 2. Mean ipth value (pg / ml) para cada grupo estudado
figura 1.