introdução
Conidiobolus Coronatus (C. Coronatus) (entomopfthtorals) é um fungo cosmopolita e de insetos patógenos de diferentes ordens1; Verificou-se na madeira decompondo, lixo foliar, solo2 e também como patógeno de mamíferos, incluindo o homem, que produz rinoentomopomomicose, que afeta a superfície do trato respiratório, pode danificar a mucosa nasal e paranasal e até mesmo estender para a pele de O nariz, lábio superior e área front-glablar3.
O relatório de danos humanos é raro e é restrito a regiões com climas tropicais e alta umidade4. A extensa distribuição de C. Coronatus e os poucos casos de rinoetomoftose reortada sugerem que nem todos os isolados são patógenos para animais humanos e superiores3,5,5.
Na planta de produção de cogumelos (agaricus bisporus) Fungi Rioxal (PERIO, Veracruz, México) Um surto epizootético de C. Coronatus foi detectado em moscas da espécie Lycoriella ingênua (L. ingênua), considerada a praga principal do Champignon6. O cogumelo é produzido em navios fechados que apresentam condições semelhantes a um clima tropical úmido7 e em que há moscas infectadas por C. coronatus. Os trabalhadores estão expostos a ambos os fatores por períodos prolongados, o que implica que eles estão em contato com os esporos do fungo e, apesar disso, não há reservatórios de rhinoetomhoromosis originados em plantas de produção de cogumelos.
A relação entre C. Coronatus e sua ampla gama de anfitriões é digna de estudo e uma indicação de variação intraespecífica pode ser considerada. Com base no acima, o objetivo deste trabalho foi investigar se existe ou não variação genética entre os isolados de C. Coronatus de ferimentos humanos e outras fontes (solo, inseto, composto).
para determinar o A variabilidade genética entre isolados de diferentes hosts é necessária para usar técnicas moleculares8. O espaçador interno transcrito (STIS) é o locus mais popular em pesquisa miológica baseada em seqüências; É o mais bem sucedido para a identificação de um grande número de fungos, por isso foi designado como um marcador de DNA do código de barras universal para fungos; Além disso, sua capacidade comprovada para o estudo da variação inter-intravespecificada torna uma ferramenta muito poderosa9-12. Da mesma forma, a técnica do polimorfismo derivada da amplificação aleatória do DNA (RAPD) adquiriu várias usos no estudo da diversidade genética; Em fungos foi usado com sucesso principalmente em estudos intraespecific13. Estas 2 técnicas foram implementadas em 11 isolados de C. Coronatus e seus resultados foram analisados e discutidos em termos da distância genética de acordo com a fonte dos quais eram isolados (solo, insetos e humanos).
Materiais e Métodossailiments P> 11 isolados de C. Coronatus foram utilizados; 8 deles foram obtidos de coleções públicas e 3 foram isoladas por conta própria (Lyco 1, 4 e 5). Todos foram processados para analisá-los com técnicas e amplificação do RAPD da região IT1-5.8S RADN-ITS2 (intrron localizados entre os genes RADN 28 e 18S). A lista de todos os isolados e a fonte que foram tomadas é mostrada na tabela 1.
Lista de isolados usados
| código de isolamento | Origem | Colecione o site | não. Acesso ncbi | ||
| c. coronatus | LYCO 1 | Lycoriella ingênua (Diptera: Sciaridae) A, B, C, D | México, Fungos de plantas Rioxal | HQ602772 | C. coronatus | lyco 4 | lycoriella ingênua (Diptera: sciaridae) a, b, c, d | méxico, planta Cogumelos Rioxal |
| C. coronatus | lyco 5 | lycoriella ingênua (Diptera: sciaridae ) A, B, C, D | México, fúngios Rioxal de plantas | HQ602774 | |
| C. coronatus | arsf 512 | niloparvata lugens (hemiptera: delfacidae) a, b, d | malaysia | ||
| c. coronatus | mocis latipes (Lepidoptera: noctuidae) a, b, d | hq602776 | |||
| c. coronatus | atcc 32865 | humano, b, d | greer, EUA uu | HQ602777 | |
| c.coronatus
Staffs 4: 004 Muestra de suelo de una plantación de pinoa, b, p Reino Unido HQ602778 |
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| C. coronatus
Staffs 15: 008 Muestra de suelo de las orillas de un Área de pastoreoa, b, d Reino Unido HQ602779 |
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| C. coronatus
Staffs 10: 027 Muestra de suelos de plantación de anchaa hoja, b, p Reino Unido HQ602780 |
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| C. coronatus
Staffs 1: 037 Muestra de suelos de plantación una de Pino alerce (. Larix spp), b, p Reino Unido HQ602781 |
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| C. coronatus
Staffs 04: (. Larix spp) 427 Muestra de suelos de plantación una Pino de alerce é, b, p Reino Unido HQ602782 |
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| C. coronatus
VPCI-126P Humanob, ele Índia (Norte) FN421422 |
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| C. coronatus | P1
Inse ctob, ele Hungría AJ345094 |
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| C. coronatus
FSU 784 |
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| C. thromboides |
ARSEF: provenientes de la USDA-ARS O fungo entomopatogênico Coleção (.. Ithaca, Nova York, EE UU); ATCC 32865: proveniente de la American Type Culture Collection (.. Rockville, MD, EE UU); Lyco: Aislamientos Estos é colectaron de la planta de champiñones Rioxal (México); Staffs: procedentes de la Colección del Dr. Arthur A. Callaghan de la Universidad Staffordshire, College Road, Reino Unido
Aislamientos Usados en el análisis RAPD.
Aislamientos Usados en el análisis Sua.
Aislamientos obtenidos en Este estudio.
Las secuencias Sua é obtuvieron en Este estudio.
Las secuencias é um obtuvieron del NCBI Genbank.
Los Aislamientos de C . coronatus Lyco 1, 4 y 5 é obtuvieron en la planta de PRODUCCIÓN de champiñones Hongos Rioxal (Segun metodo de Papierok Hajek14 y), é DETECTO Donde el brote epizoótico de un sobre Hongo entomopatógeno moscas de la especie L. ingenua, que fue pOR el Especialista identificado Arthur A. Callaghan Como C. coronatus. TODOs tão Aislamientos presentaron las Características morfológicas propias de la especie (ejemplo POR, conidios vellosos producidos solo por This especie). Realizaron é tão postulados de Koch y con ellos Que se comprobó C. coronatus fue El agente causal da enfermedad sobre la L. ingenua.
Los Aislamientos de 11 C. coronatus é o mantuvieron temperatura ambiente y en um preservaron Agua estéril destilada. Para su Desarrollo, é inocularon en medio Dextrosa ágar Sabouraud a 25 ° C.
EXTRACCION de ADN
obtuvo micelio liofilizado de los 11 Aislamientos de C. coronatus Siguiendo por el Método descrito Guzman-Franco et al.15 . El ADN é extrajo Mediante el Método CTAB (bromuro de hexacetiltrimetilamonio) modificado de Ahrens y Seemüller16. El Macerado é coloco en un tubo Eppendorf cão 400 de solución de lisis (cloruro de sódio 0,4m, 10 mM Tris-HCl, EDTA 2 mM, 1% de PVP) é mezcló y con un agitador de vórtice para homogenizar. Enseguida é agregaron 50 ul de SDS a 20%, 40 ul de proteinasa K (10 mg / ml) y é incubo a 65 ° C Durante una Hora. Después é agregaron solución 600μl de 3% de CTAB (Sigma Chemicals, EE. UU.) Y é incubo NuevaMente Durante 45 minutos a 65 ° C. Posteriormente é adicionó un Volumen de cloroformo isoamílico y álcool (24: 1), y é mezcló centrifugo 10 min a 14.000rpm, Donde é formaron 2 fases; la fase acuosa é coloco en un tubo Eppendorf con un Volumen y de isopropanol é incubo a -20 ° C POR 60min; después é 10min centrífugo para 14.000rpm. ADN el fue en resuspendido 50 de Agua destilada estéril; concentración y la calidad del ADN é Estimo con un NanoDrop ND-1000 v3.7 (Thermo Scientific, EE. UU.). Por Ultimo, el ADN é visualizó en un gel de agarosa ai de 1% de X 1 en tampão TBE (Tris0,089M, Acido bórico 0,089M, EDTA 0,002M) bromuro cão teñido de etidio (0,5μg rent-1 POR 10min) y con un é fotografió fotodocumentador-Gel Doc MOD. 2000 (Bio-Rad®, EE. UU.).
Amplificación RAPD
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR por sus siglas en inglés) é realizo en un termociclador Meu Thermal Cycler ™ termociclador Bio-Rad Modelo 580BR 09275. É usaron tubos de 0,5 ml Eppendorf; Volumen el finais de la mezcla fue 25? l / y PCR contenía 4 ul de ADN (80 ng / jil), de tampão 10X, cloruro de magnesio 3 mM, 2,5mm each de dNTP (Gene escolha), 1,5 U de Taq polimerasa (Biogênica) y Cada 2 ul de Iniciador (10 pmole).Iniciadores aleatórios da série Operon Technology® e a série B de Invitrogen (Tabela 2). De 19 iniciadores comprovados, apenas aqueles que deram resultados reprodutíveis (3 amplificações) foram utilizados na análise do RAPD, portanto, no final 13.
Sequência dos iniciadores RAPD e fragmentos amplificados
| iniciador | sequence (5 ‘→ 3’) | Número de fragmentos | Polimórficos fragmentos (%) |
| a03 | 5′-agtcagccac-3 ‘ | 2 (22) | |
| a18 | 5′-aggtgaccgt-3 ‘ | 5 | 4 (80) |
| b01 | 5′-gtt tcg ctc c-3 ‘ | 3 | 3 (100) |
| b02 | 5′-tga tcc ctg g-3 ‘ | 3 | 3 (100) |
| b03 | 5′-cat ccc cct g-3 ‘ | 3 | 1 (33) |
| b04 | 5′-gga ctg gag t-3 ‘ | 5 | 4 (80) |
| B06 | 5′-tgc tct gcc c-3 ‘ | 2 | 2 (100) |
| B07 | 5′-ggt gac gca g-3 ‘ | 2 | 1 (50) |
| b10 | 5′-ctg ctg gga c-3 ‘ | 2 | 2 (100) |
| b11 | 5′-gta gac ccg t-3 ‘ | 2 | 2 (100) |
| b13 | 5′-td> | 2 | |
| b15 | 5′-gga ggg tgt t-3 ‘ | 6 | 6 (100) |
| b17 | 5′-AGG GAA CGA G-3 ‘ | 4 (80) | 48 |
O programa de amplificação foi de um ciclo desnaturado Íon inicial a 94 ° C por UNMIN, seguido por 38 ciclos de desnaturação a 94 ° C durante 30 s, hibridização a 35 ° C durante 30 s, e extensão a 72 ° C, seguido de uma extensão final para 72 ° C por 5min. O tamanho dos fragmentos ampliados foi estimado utilizando um marcador de peso molecular de 1KB (Qiagen). Na amplificação de cada iniciador, radicanos de zoophtora (isolados de Plutella Xyllostella) e Cercospora Agavicola (isolado de Tequilana de Agave) (Fig. 1), que não foram incluídos na análise de dados RAPD. A gestão desses isolados (crescimento e extração do DNA) é descrita em Guzmán-Franco et al.15 e Ayala-Escobar et al.17.
Produtos PCR com o iniciador Rapd A18 em gel de Agarose de 1%. LANES 1 e 10: marcadores; LANES 2-4: LYCO 1, 4 e 5; LANES 5 e 6: ARSEF 512 e 1884; Lane 7: ATCC 32865; Pistas 8 e 9 testemunhas (Z. Radicans e C. Agavicola); Pista 11-15: Pessoal 4: 004, pessoal 15: 008, pessoal 10: 027, pessoal 1: 037, pessoal 04: 427.
análise de dados Rapd
a presença ou ausência de padrões de Rapd bandas foi considerada um caractere independente e analisado visualmente de fotografias de géis de agarose; A presença foi registrada com 1 e a ausência com 0. Com estes resultados, uma matriz binária foi construída onde os polimorfismos foram encontrados de cada um dos iniciadores. Dessa matriz de similaridade e o coeficiente de acasalamento simples, foi construído um dendrograma; Para gerar e visualizar os relacionamentos Ntsys 2.0 foi usado. Para obter um dendrograma de maior solidez, foram realizadas 1.000 réplicas bootstrap (BS) com Winboot.
amplificação das regiões IT1-5.8 ADNR-STS2 do DNA ribossômico para os 11 isolados de C. Coronatus utilizando o seu 5 universal Iniciadores (5’GgaagtaaAagtcgtaacaagg) e STS 4 (5’tcccccccttattgatatgc) 18. As amplificações foram feitas em tubos eppendorf de 0,5 mL e o volume final da amostra por reação foi de 25 μl. Cada reação continha 2μl de DNA (80ng / μl), cloreto de magnésio 2,6 mm, 2,5 mm de cada DNTP (escolha genética), 1,5 u / μl de polimerase TAQ, 2μL de cada iniciador (20pmol). Os tubos de testemunha continham água destilada estéril em vez de DNA.O programa de amplificação foi um ciclo de desnaturação inicial a 95 ° C para 5min, depois 35 ciclos de naturalização a 95 ° C durante 30 ° C por 50 ° C por unizin, a extensão a 1,5 min e uma extensão final a 1,5 min e uma extensão final a 1,5min e C por 5min. O tamanho dos fragmentos amplificados foi estimado utilizando marcadores de peso moleculares 1KB e 100 pb.
Para encontrar diferenças ao nível dos nucleotídeos entre os isolados, os produtos PCR-STS foram enviados para a sua limpeza e sequenciamento ao Empresa de macrógeno (Coreia). O sequenciamento foi realizado em ambas as direções usando iniciadores universais 4 e 518.
Análise de dados da sua região
As 11 sequências STI foram editadas manualmente com Bioedit e FINCTV 1.3. O alinhamento de múltiplas sequências foi realizado com Clustal W. As sequências foram depositadas no Genbank NCBI (Tabela 1). Para construir uma árvore filogenética mais confiável, adicionais às 11 sequências de C. Coronatus obtidas neste estudo, 3 seqüências de C. Coronatus e um dos NCBI Genbank Conidiobolus Thrombooides (Tabela 1).
A seleção de C. Thromboets como um grupo externo foi feito de uma explosão (NCBI Genbank) com as 11 seqüências de C. Coronatus e uma análise de parcimônia, cujos resultados lançam que está intimamente relacionado a C. Coronatus, mas é diferente na sua região.
com mega5 Uma árvore filogenética foi construída com métodos máximos de parsímonia, junção de vizinho (NJ) e evolução mínima; Nos últimos 2, o modelo Tamura-Nei foi usado. Avaliar a confiança das relações filogenéticas; A solidez dos nós foi estimada pela análise BS com 2.000 réplicas.
Para analisar ainda mais a diversidade genética dos isolados, as sequências STI foram agrupadas de acordo com seu substrato ou host: 1) Inseto, 2) , 3) Composto Humano e 4); Com o programa Mega5, uma contagem foi uma contagem para determinar o número de sites variáveis dentro de cada grupo e entre todos os grupos, bem como a região onde eles foram (ITS1-5.8S RADN-STS2) (Tabela 3). Para estas 2 avaliações, o grupo externo não foi considerado.
análise de sites variáveis Totais e dentro de cada grupo na região ITS1-5.8S RADN-STS2
| Grupo | Totais | seu ID de 1 | id = “2e03e1cb0b”> Número de isolados | ||
| inseto | 29 | 19 | 1 | 9 | |
| piso | 22 | 13 | 8 | 5 | 0 | 2 | 2 |
| composto | – | – | – | 1 | |
| totais | 69 | 3 | 3 | ||
Resultores RAPD
Os iniciadores selecionados amplificados 48 bandas com uma variação polimórfica de 22 a 100%; 34 faixas polimórficas foram obtidas, resultando em 70,83% do polimorfismo; 2 a 9 bandas por iniciador foram obtidos (Tabela 2). A Figura 1 mostra os padrões de bandeja obtidos pela amplificação com o iniciador A18 e a diferença genética entre o isolamento avaliado a partir de diferentes fontes.
O dendrograma construído a partir da análise dos padrões de bandeja obtidos com os 13 iniciadores revela a formação de 4 grupos principais (A, B, C e D) com 40% de similaridade. Os resultados indicam um alto nível de diversidade genética. A estabilidade dos agrupamentos obtidos foi avaliada com uma análise BS com 1.000 réplicas (Fig. 1). O grupo A inclui 8 isolados divididos em 2 subgrupos, I e II; Subgrupo I Contém os isolados obtidos a partir de L. ingênuo Lyco 1, Lyco 4 e Lyco 5 (Lyco 1 e Lyco 4 têm 100% similaridade); Subgrupo II é composto por pessoal 4: 004 isolados de piso, pessoal 15: 008, pessoal 1: 037, pessoal 10: 027 e pessoal 04: 427 (Pessoal 4: 004, pessoal 15: 008 tem 100% similaridade). O grupo B inclui apenas o isolamento Arsaf 1884 retirado da Latipe Mocis, com 80% de similaridade. O grupo C inclui apenas o isolamento do NARSF 512 de Niloparvata Lugens, com 50% de similaridade. No grupo D, sozinho é o isolamento ATCC 32865 de ferimentos humanos, com 40% de similaridade, e isso apresenta a maior distância genética do resto dos isolados (Figura 2).
Dendrogram construído a partir da análise dos fragmentos de DNA de 11 isolados de C. Coronatus amplificado com 13 iniciadores RAPD. Os números em cada ponto dos nós representam os valores de bootstrap.
(0.1mb).
Análise da sua região
Os seus iniciadores utilizados18 amplificados um fragmento de 666 bp (os espaços foram considerados locais informativos) correspondentes à regiões ITS1-5.8S RADN-ITS2 no isolamento 11 avaliado. A duração de cada uma das regiões era homogênea em todos os isolados: sua1 223 BB; 5.8S RADN, 155 BP; Seu2, 288 pb. O alinhamento e análise das sequências com o programa Mega5 do ITS1-5.8S RADN-ITS2 de Isolados C. Coronatus (Tabela 1) mostra 69 locais variáveis entre os 14 isolados. Destes, 40 são encontrados em sua1, tornando-a na região mais polimórfica, ambos os grupos e os isolados de cada grupo. A região de 5.8S é a mais conservada, uma vez que possui apenas 3 locais variáveis entre os 14 isolados. No interior de cada grupo, também houve diferenças no número de locais variáveis totais, sendo o grupo de insetos com o maior número (29) e o grupo de humanos mais homogêneos (5) (Tabela 3).
A variabilidade da sua região forneceu informações sobre os padrões de diversificação de C. coronatus. Uma árvore filogenética foi construída com os métodos estatísticos de parsimonia máxima, junção de vizinho (NJ) e evolução mínima e usando C. Thromboets como um grupo externo. O mesmo resultado foi obtido com as 3 abordagens tanto na topologia quanto no apoio dos ramos (valor BS); A sua região claramente diferenciada C. Coronatus de C. Thrombooides (espécies intimamente relacionadas). A Figura 3 mostra o resultado da árvore da análise NJ.
árvore filogênica baseada na sequência do seu Região de C. Coronatus, usando o método NJ. C. Thromboets foi usado como um grupo externo. Os números próximos dos nós representam valores de bootstrap expressos como uma porcentagem de 2.000 repetições.
As distâncias genéticas entre os isolacionamentos são representadas pelo comprimento do ramo dos grupos que são formados. Grupos A, B e C foram formados. O grupo A inclui 10 isolados divididos em subgrupos I e II; Subgrupo I Contém isolados Lyco 1, Lyco 4 e Lyco 5 (obtido L. ingênuo), FSU 784 (obtido a partir do composto de cogumelos) e P1 (obtido a partir do inseto). No subgrupo II são a equipe 4: 004, pessoal 15: 008, pessoal 10: 027, pessoal 1: 037 e pessoal 04: 427 (obtido do solo); O valor BS do nó que une subgrupos I e II é baixo (44%), mas o valor BS do nó que une os isolados do subgrupo I é de 79% e o subgrupo II é de 88%. O grupo B inclui os isolados Asof 512 e ARSF 1884 (isolado de insetos homopteres e coleoptera, respectivamente) e, finalmente, no grupo C são os isolados ATCC 32865 e VPCI-126P (retirados de lesões humanas). Este grupo apresenta a maior distância genética com relação a outros isolados e seu valor BS é 98%.
Discussão
Os resultados deste trabalho mostram a evidente variação genética entre o isolamento de C. Coronatus avaliado, agrupados de acordo com Sua origem em: 1) Inseto, 2) Composto, 3) Solo e 4) Humano.
Embora os princípios da técnica com sequências STI diferem daquelas da técnica Rapd19,20, é cumprida O que SOLL21 indica, que afirma que, para os resultados obtidos com um método a serem considerados válidos, eles devem ser confirmados com pelo menos uma técnica diferente. Nossos resultados são consistentes com ambas as técnicas baseadas em: 1) Há variação intraespecífica nos isolados avaliados; 2) Os isolados humanos apresentam a maior divergência genética em relação ao resto dos isolados; 3) A maior distância genética entre os grupos de isolamento é dada entre os de seres humanos e lycos (isolados de L. ingênuo).
Apesar de resultados como os de Ribes et al.5, Valle et al .3 e Wieloch et al.4 sugerem que nem todos os isolados são patógenos para o humano e que, por sua vez, esta é uma indicação de variação intraespecífica do fungo, não há estudos que o apoiem. Este trabalho é o primeiro a avaliar e demonstrar que há variação intraespecífica no nível molecular de C. coronatus relacionado à fonte dos quais foram realizados.
Estudos semelhantes têm avaliado a variação em outros entomoptorales com Rapd e amplificação de ITS22,23. Tal como os resultados mostram uma clara distância genética entre os isolados a partir de diferentes fontes, Fargues et al.9 e Morton et al.24 relataram a relação entre a variação genética e de acolhimento.
Há estudos do Fusarium complexos, Que, embora não seja um entoophrim, ele compartilha com C. coronatus a característica de infectar uma ampla gama de hosts, incluindo o humano. Zhang et al.25 procuravam variação intraespecífica sem sucesso em 471 isolados retirados de seres humanos, solo, animais, ar de hospitais e plantas. A razão para isso é que o Fusarium é um fungo multi-hospedado26, o que implica que o mesmo isolamento pode infectar um grande número de organismos de vários filos.
Cada microorganismo tem um conjunto de recursos que funcionam como fatores de virulência em seus anfitriões; No entanto, é desconhecido em que medida eles condicionam os mecanismos de infecção em diferentes grupos de host. Uma causa disso é a ausência de modelos que permitem analisar a virulência entre os grupos infectados27. Tendo em conta as várias fontes em que C. Coronatus foi encontrado e nossos resultados que mostram claramente a variação intraespecífica entre isolando, consideramos que C. Coronatus poderia servir como um modelo para avaliar mecanismos de virulência que o tornam específico para cada de cada grupo de organismos a que ele ataca.
apesar de nossos resultados mostram uma clara diferença em um nível molecular entre isolados de C. coronatus de humano e de outras fontes, neste trabalho resultados não morfológicas ou fisiológicas não são apresentados de os isolados para verificar se as diferenças genéticas são traduzidas em diferenças fenotípicas; No entanto, existem nossas próprias observações (apenas com alguns isolados) e outros autores que nos ajudam a inferir, além de elevar a possibilidade de que exista qualquer isolamento que não seja patógeno humano. Hall et al.28 consideram que a capacidade de se desenvolver a 37 ° C é um critério para avaliar o potencial dos fungos como patógenos humanos; Mier et al.29 trabalhado numa estirpe de humano e desenvolvido a 37 ° C, enquanto Papierok et al.2 estudados 10 estirpes, das quais apenas uma de origem humana e um Hanseniella isolado miriapodo unguiculata cresceram a 37 ° C; O resto veio de insetos de várias ordens. No nosso caso, observou-se o efeito da temperatura nos isolados de Lyco 1, 4 e 5, descobrindo que não havia desenvolvimento a 37 ° C (dados não apresentados). Além disso, observou-se que a ATCC 32865 isolamento (feita a partir de humano) levou cerca de 4 dias mais para preencher uma 85 milímetros de diâmetro placa de Petri com respeito aos obtidos a partir de insectos (dados não mostrados) e tinha um algodão, baixa rugosidade e tonalidades Grisaceous, características que não foram apresentadas no outro isolamento avaliado. Essas características também sustentam as diferenças entre o isolamento dos humanos e o resto, o que poderia ser atribuído à fonte dos quais foi obtido e sugere que isso pode ser um fator que gera distâncias genéticas. Os resultados de López-Martínez et al.30 também sugerem variação intraespecífica e que nem todos os isolados são patógenos de mamíferos; Eles realizaram testes em camundongos, hamsters e cobaias com uma tensão de C. Coronatus retiradas da Postica Aenolamia e, embora houvesse uma invasão inicial em todos os animais, desapareceu 15 dias após a inoculação, o que indica que o fungo não conseguiu estabelecer cada infectá-las. Os destaques acima a ausência de patogenicidade desta estirpe em particular nos mamíferos.
Desta forma, os nossos resultados numa distância genética com STS e RAPD entre ATCC 32865 isolamento (humanos) e as tomadas de insectos, em conjunto com o Características fisiológicas e morfológicas dos isolados de Lycos descritos acima, sugerem que estes não são patógenos para o ser humano; Esta poderia ser a razão pela qual, apesar do fato de que os trabalhadores estão em contato com o fungo, não há relatos de danos humanos por C. coronatus em plantas produtoras de cogumelos.
Os nossos resultados não são conclusivos Para sugerir o uso de C.Coronatus no controle biológico de insetos; A pesquisa é necessária para determiná-lo, como aconteceu com a estirpe 251 do fungo PurpleCillium Lilacinus que é atualmente usado para controle biológico de nematóides, mesmo que o fungo seja relatado como patógeno de seres humanos e animais. Essa estirpe é a única que não produz a pashecilotoxina, que é o agente causador de danos em humanos31. Vale ressaltar que, para C. Coronatus, o Metabolite Coronatin-1 já foi identificado em larvas de Galleria Mellonella e, embora seja necessário determinar seu modo de ação, seria interessante investigar se esse metabólito é capaz de causar alterações. Em Humans4.
O tamanho da amostra e o número de hosts / substratos deste trabalho foram limitados, o que poderia ter afetado a análise da diversidade genética e o número de ramos que foram formados nas árvores filogenéticas. Recomenda-se realizar testes com um maior número de isolados e incluir estudos de morfologia e fisiologia. Apesar dessas limitações, nossos resultados com as técnicas Rapd e STS fornecem informações sobre a diversidade intraespecífica de C. coronatus relacionadas ao host / substrato.
Conflito de Interesse
Os autores declaram que não há conflito de interesses.