Ce texte par Carmen Sánchez de Rivas est apparu à l’origine au numéro 14 (2013) du réseau CIC et de la reproduire dans son intégrité pour votre intérêt.
avec la dernière disparition de François Jacob (19 avril 2013), le dernier des trois chercheurs ayant reçu le prix Nobel de la physiologie et de la médecine en 1965 (Jacob, monod et Lwoff) est parti. Ce prix a traversé les travaux sur la réglementation de l’expression génétique de la synthèse d’enzymes et de virus bactériens, pour de nombreuses consécrations de l’opéron.
Aujourd’hui, quand plus de 50 ans ont passé depuis la publication de ces travaux Il est important de mettre en évidence la conjonction des connaissances et des intérêts impliqués dans l’élucidation de la régulation de la lisogénie et la synthèse d’enzymes métaboliques. Les études ont été menées sur des virus bactériens (bactériophages), de la lisogénie et de l’induction des profagos, du transfert de gènes par conjugaison, de l’induction cigotique, réalisée en premier par André Lwoff, puis de François Jacob et Elie Wollman, ceux qui Ils ont mené monod et Jacob à être associés à l’élucidate que le complexe réglementaire permettrait également d’expliquer comment la bactérie Escherichia coli régule les gènes impliqués dans l’utilisation du lactose comme source de carbone.
pendant et après la guerre World, un groupe important de chercheurs rassemblait sous la protection et les auspices de A. Lwoff, qui ont été logés aux mensonges de l’Institut Pasteur (Le Grenier) du bâtiment de la chimie biologique. Monod d’abord, puis Jacob, ils se sont rencontrés ici après avoir participé très activement à la guerre. Jacques monod a eu une participation très intense à la résistance accompagnant le parti communiste, bien qu’il en a rarement parlé. Cependant, il lui a apporté des difficultés importantes d’obtenir le visa à chaque voyage qui a fait les États-Unis. Jacob, avec des phrases 20 ans et a seulement lancé ses études médicales, a ensuite adressé à General de Gaulle à Londres, a ensuite été envoyé à la lutte en Afrique Nord et a travaillé comme un chirurgien. Au cours de l’atterrissage de la Normandie, c’était gravement blessé. En ce sens, Jacob a été l’un des rares combattants de Compagnon de la libération nommés par Général de Gaulle.
En 1954-1955, après plusieurs années de coexistence sur le loft, J. monod a été nommé chef de service et s’est déplacé au rez-de-chaussée où il a reçu un domaine important, qui appellerait le service par Biochimie Cellulaire. Cela a permis d’accroître les possibilités du «Grenier» et de partager les bibliothèques où se trouvaient les séminaires et une salle à manger. En 1958, après avoir terminé 3 ans d’études techniques en biochimie, j’ai eu la possibilité de commencer à travailler avec Jacques monod. À cette époque, Monod interviewait des jeunes, des assistants potentiels, de compléter le groupe qui avait besoin de lui et de ses collègues du nouveau département. Monod m’a engagé dans son équipe et a commencé pour moi cette grande aventure personnelle de recherche scientifique. Monod m’a présenté à A. Lwoff d’intercéder à mon rendez-vous en tant que technique IP. La figure de Lwoff infusé un grand respect et même un point de peur de l’ensemble des techniciens et des chercheurs; Je dois dire que son bureau était dans un coin caché du loft et la porte était protégée par ses secrétaires. Cependant, il est également vrai qu’il m’a toujours reçu avec son plus grand sourire et il s’est amusé à me voir dans les séminaires, car il n’était pas habituel de voir de jeunes techniques dans cet environnement.
rapidement, monod introduit Moi dans le studio des courbes d’induction des tests en β-galactosidase, enzymologie et immunologique. A cette époque, pour étudier la ß-gal dans un grand nombre de souches, les cultures avec détergent et le toluène étaient d’abord perméabilisées, puis ajoutent le substrat (ONPG) et mesurent l’enzyme par la couleur jaune du ortho-phénol libéré. Cela nous a amenés à mettre un tampon qui a permis la plus grande activité reproductible que nous avons nommé PM2 et a ensuite été renommée «tampon Z …»; Et nous avons également introduit le bicarbonate de sodium pour freiner la réaction.La mesure des perméasures, des transacétylasses dans les mutants, avec différents inducteurs libres ou non, étaient les éléments de travail quotidiens. J’ai appris à organiser des protocoles et des expériences, d’écrire et d’analyser les résultats, puis de leur dire avec le professeur monod.
à midi ou une fois les séminaires, les chercheurs, les techniciens et les visiteurs des deux groupes qui se rassemblaient pour manger La «salle à manger», c’était un grand courbe gluant à côté de la bibliothèque. L’un des rites était le café que Sarah Rapkine a préparé. La plupart des scientifiques qui «construisant» biologie moléculaire ont effectué différentes pièces du laboratoire. Entre le loft et notre service, il y avait un ascenseur étroit sans trop de sécurité – plus comme les chariots élévateurs d’un chantier de construction – qui permettait le transit des tubes, des plaques de Pétri et des idées entre les 2 équipes.
Chaque matin, Jacob utilisait rapidement dans notre laboratoire avant de se bloquer avec ses techniques, Martine et Danièle, pour analyser les colonies des colonies des plaques de Pétri, résultant de l’efficacité de la dégradation du lactose, des souches soumises à des mutagènes comme UV, Rx … , et reproduire, isoler et programmer en détail les expériences suivantes. Après avoir visualisé vos assiettes, il a choisi de nombreux «mutants» qui ont ensuite « descendu » à notre laboratoire. Madeleine Jolit (l’autre technique monod) était responsable de la cartographie d’eux. J’ai analysé les enzymes du système dans diverses conditions de croissance. Les données ont été analysées et comptabilisées en fonction de l’induction ou non et non répétées. Une nomenclature appropriée des souches et des mutants nous a permis de savoir si c’était des souches HFR (Dadoras) ou des récepteurs F pour la conjugaison; Des souches sauvages pour les mutants du lactose ou des mutants UV ou Rx dans l’un de ses gènes, les auxurants, etc. Jacob, que nous avons appelé Le Grand François, rentré dans l’après-midi à notre laboratoire de «contrôler» les résultats et en discuter avec monod. Son bureau a été communiqué avec le laboratoire et dans ce calendrier, nous avions l’habitude de partager le thé avec Madeleine, David Perrin, Gérard Buttin et d’autres invités. Il ne restait que étranger au silencieux Shiro Nao, qui n’a pas partagé la langue ou la douane culinaire, et encore moins de «thé», mais il nous a donné son meilleur sourire comme oriental bien éduqué.
Les discussions étaient intense et David est intervenu continuellement. Petit à petit, Monod utilisait une carte sur le bureau où des mutants et des activités enzymatiques étaient installés, induits ou non. Le « modèle » est apparu et analysé quelles expériences et constructions manquaient d’être plus convaincantes. L’isolement des plasmides f’epermited Obtient des merodiploïdes stables pour le BAC Operon, construire des fusions lacs à d’autres ouvrages et avancez avec le modèle. Beaucoup d’après-midi, Jacob a marché avec une impatience qui attend les résultats: l’apparition de jaune dans les tubes de l’expérience en cours! Les «expériences du siècle» étaient tous les jours et nous en avons tous cru, jusqu’à plusieurs heures ou des jours de travail, ils nous ont convaincus que le résultat n’était pas le bon et il a été «enterré dans la placard de résultat non explicable». Jacob Il a disparu dès qu’il a coupé que le résultat était négatif. Plusieurs jours sont venus nous convaincre de l’expérience importante, «copier» monod qui avait en tant que principe expliquent à la fois les objectifs des expériences et des bases des techniques et des dispositifs utilisés.
Je me souviens que beaucoup de nuits que je suis retournée au laboratoire, avant de fermer l’entrée principale de l’Institut, de mettre fin à une expérience, de modifier des échantillons dans le comptoir de scintillation, des cultures repiquées, etc. Puis il a écouté au passage de sereine qu’il éteignait assez du gaz et des lumières, laissant leur sonnerie maigre qui dérangeait le silence de la nuit; cela semblait être un personnage sinistre nouveau. Je n’ai jamais eu à sauter la porte pour entrer comme Beaucoup de mes collègues, mais je me suis passé plus d’une occasion à travers l’accès hospitalier.
À cette époque, en plus des séminaires qui ont été effectués quotidiennement, un vendredi par mois, nous faisons tous défiler jusqu’à la bibliothèque. de l’Institut de Physico Chimie, dans le quartier latin, où des séminaires plus importants ont été faits (Physiologie Cellulaire Club) avec la présence d’invités étrangers. Monod voulait dès le début que j’étais présent dans tous les séminaires, puis j’ai eu un examen et j’ai écrit un rapport de celui-ci.
Je me souviens du genre de génétique que Jacob dicté au Collège de France, qu’ils étaient un réel plaisir pour leur qualité, leur imagination et leur humour.La classe inaugurale de monod au Collège de France, en 1967, où il a présenté son premier essai sur l’analyse philosophique de la science, a soulevé beaucoup de controverse et a eu une incidence sur les scientifiques et les philosophes.
« Comment un scientifique ose parler de philosophie? » C’était le début de ses nouvelles préoccupations, qui le plâssait dans son livre Le Hasard et la Nécessité, même aujourd’hui sur le thème de l’analyse et de la discussion dans les cours de philosophie. La présence de monod dans les séminaires était en même temps apprécié et craignait, puisque il Avait la capacité de déranger quiconque qui a fait une question qu’il avait jugée absurde ou peu élaborée. Son regard a quitté «cloué» à un à sa chaise et ses réflexions pourraient devenir disqualifiantes. D’autre part, sa capacité d’analyse, de synthèse, il a permis lui expliquer à l’exposant de l’étendue de ses résultats, les expériences qui manquaient …, même sur des terres non directement liées à sa spécialité, qui ont le plus admiré et respecté.
enthousiaste, cordial, attentionné, C’était la «Jacques» que Jacob décrit également et est celle qui a stimulé mon engagement envers la science, qui m’a permis de terminer mes études universitaires. J’ai eu la chance de participer à quelle était la grande aventure de l’opéron et plus tard dans l’ensemble de l’UE Foria de la Alteria J’ai participé à de nombreuses expériences sur des enzymes d’allualisation avec JP Condux. À la fin de mon diplôme, ils me faisaient confiance pour analyser le GDH (glutamic-déshydrogénase) de E. coli pour mettre en œuvre de manière évidente ses propriétés d’allostal. Purification, cinétique de toutes sortes, détermination de la vitesse de sédimentation, km et ki de différents substrats dans les deux directions …, tous ont montré le comportement attendu pour une enzyme d’alostérica, mais aucune nouvelle propriété pour « le modèle », alors seulement Il est resté dans mes cahiers. Après plus d’un an, cette ligne de travail a été abandonnée; Rien n’a été publié qui n’était pas considéré comme roman et accepté par Le Patron. Ce qui aurait été son étonnement (et sa joie) s’il avait découvert que le répresseur, son répresseur Lac, est une protéine alostale !.
Lorsque ma carrière scientifique était destinée, Monod mettait une lumière d’alerte: « Carmen , ce bureau est très difficile, donnons-le aux garçons! ». Toute opinion explicite qui montre à quel point il a été difficile pour les femmes l’accès au monde de la science, comme les analyses de la légende de Sandra. Bien qu’il y ait eu beaucoup de scientifiques travaillant dans son laboratoire, Je pense que j’ai été la seule femme à avoir fait une thèse sous sa direction.
J’ai également rencontré l’autre protagoniste, « monod ». Tout comme nous pouvions voir et apprécier sa créativité et son intelligence, cela pourrait Soyez extrêmement rigide dans la modification de tout aspect renvoyé au « Dogme central »: ADN- > protéines de RNNN. Il n’était pas facile d’accepter la régulation positive de l’Arabinosa (Engelsbeg en 5) et plus proche à nous, la maltose (m Schwart en 5). Dans ce contexte mes résultats de thèse sur, « la répression catabolique dans l’opéron de lactose », qui a proposé une réglementation translationnelle, ou la présence d’un deuxième promoteur pour le début de la traduction (qui serait alors une séquence de shine-delgarienne), n’était pas la bienvenue et elles étaient non publié! Il préférait approfondir les études de la répression catabolique avec les effets de l’AMPC, où les effets de réglementation étaient évidents au niveau de la transcription. Ils montreraient bientôt des travaux montrant des effets réglementaires de la répression catabolique au niveau de la traduction; Je suis moi-même loin de l’institut, j’ai pu fournir des données à cet égard.
Avec le passage du temps, Monod gagnait du terrain. Cela a été exacerbé par son besoin incompréhensible de courtir que certains encouragés. Beaucoup semblaient malheureusement leur passage de thé au whisky entouré d’une cour toxicomane, car à notre avis, il n’était pas nécessaire d’être apprécié. Son intransigeance à accepter différents résultats, en particulier lorsque ses consommateurs ne participaient pas à la «Cour», l’ont conduit à commettre l’injustice. C’est ainsi qu’il n’a pas compris ni accepté les résultats de la « transcriptase inverse » dans les bactéries, qui décrivaient Mirko Beljanski déjà en 1967 dans son propre service avant H. Temin l’a fait dans le virus, qui lui a valu le prix Nobel avec D. Balimore et R. Dulbecco en 1975. Au lieu de cela, une grande discrimination a été commise avec Mirko à la fois en termes scientifiques et en ce qui concerne les ressources fournies par l’Institut. Précisément à cette époque, lors de mes expériences sur la répression catabolique, j’ai suggéré que d’autres mécanismes différents du répresseur puissent intervenir dans la régulation du BAC. Ensuite, je pensais qu’une transcriptase inverse pourrait jouer un rôle dans ce type de réglementation. J’ai mesuré cette enzyme dans des conditions ou non de répression catabolique et observa des différences significatives qui pourraient justifier un type de régulation par une autre voie. Malgré les avertissements de David (Le Patron N’aimera Pas Ça!), quand je suis tombé sur Monod pour analyser les progrès de mon travail, il a essayé d’abord de me convaincre des données peu fiables (et de « Enzyme de Mirko ») et, après ma résistance et insistance sur une analyse plus scientifique, j’étais détourné pour abandonner cette ligne.
Vers les années 70, Jacob était dédié à l’étude des organismes eucaryotes (souris) et s’est déplacé dans le nouveau bâtiment Jacques Monod, de l’autre côté de la rue. C’était une aventure entière de traverser la rue du Dr Roux où la crypte de Pasteur et la bibliothèque centrale, témoins d’une autre époque. À cet endroit, le Nouvel An, les administrateurs ont offert au personnel leurs désirs de bonheur. Aussi à la date de la mort de Pasteur, il y avait une commémoration avec tout le personnel que nous paraissons ensuite à travers la crypte pour donner aux condoléances aux autorités! Deux occasions importantes de traverser la rue!
monod, d’autre part, ont quitté le laboratoire de la direction de l’Institut Pasteur où il a réorganisé les ressources et la répartition des groupes: les projets de recherche seraient effectués à Paris; Les applications et la production à Garches, tout mélanger, à l’Institut Pasteur! Dans une conversation, j’avais avec F. Jacob en 2010, nous examinons notre vision de la science actuelle: trop justifiée vers des «applications». Pour les deux, ce fut un plaisir de se souvenir de quelle était la période passionnante que nous devions vivre, ce que certains ont libellé «la fièvre de la biologie moléculaire». Seules 2 périodes de sa vie étaient si excitantes, l’autre était son expérience en Afrique du Nord pendant les combats et en tant que médecin pendant la Seconde Guerre mondiale.
Aujourd’hui, 50 ans après ces expériences et de nombreux kilomètres de travers, Je continue à évaluer à quel point il était important de se rencontrer à ce moment-là et avec cet environnement si exceptionnel, ce qui a enflammé la flamme stimulante (Le Feu Sacré) qui me permet de toujours continuer davantage, malgré les obstacles avec lesquels nous avons trébuché au jour le jour .
Bibliographie
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Notes:
Operon
pour une certaine fonction (métabolisme du lactose) Une série d’enzymes (ß-galactosidase, ß-galactosyl pureass, transacétylase) sont nécessaires. Le Les gènes correspondants sont structurellement associés et coordonnamment répondent à une équipe de régulateurs (protéines et séquence opérateur) formant un opéron.Les interactions environnementales permettront une transcription (régulation positive) ou non (régulation négative) de l’articulation (unité de transcription), puis produisent ensuite les protéines nécessaires à la fonction. Dans le cas de la réglementation négative (telle que le lac), l’inducteur (lactose et / ou alolactose) intercepte l’association du répresseur à l’ADN (opérateur) et permet la transcription de l’ensemble. La présence de glucose, source de carbone préférée, interfère la capacité d’induction du lactose exerçant une répression catabolique. Ce n’est que lorsque le glucose est épuisé, les gènes LAC sont exprimés; Dans ces conditions, les courbes de croissance montrent 2 étapes avec des taux de croissance différents séparés par un plateau (diatruxie).
PROFAGE et LISOGONIA
Certains virus de bactéries (bactériophages ou phages) peuvent être rester » Mudos ‘à l’intérieur de votre hôte sous la forme d’un profano et on dit que votre invité est lysat pour ce phage. Cela implique que les bactéries sont à l’abri des virus similaires; Cependant, dans certaines conditions (stress), le profano peut être réveil et mentir à l’invité.
La conjugaison
était évidente dans les bactéries, d’abord à Escherichia coli, ce qu’il a permis de parler de la sexualité des bactéries. Certaines souches ont la capacité de transférer avec une efficacité élevée son génome (HFR, haute fréquence de recombinaison) à d’autres bactéries accepteurs dans une séquence de temps liée à la position des gènes sur le chromosome. Cela est dû à la présence d’une usine F intégrée à son génome absent dans l’accepteur (f-). Dans certains cas, nous avons pu être des souches isolées du facteur F sous la forme de plasmide que lors de l’épluche du génome bactérien, certains des gènes (f’o f Premium) ont été isolés. Cela permet de construire des diploïdes partiels pour ces gènes (merodiploïdes). Lorsque l’ADN entrant est porteur d’un profan, et la bactérie réceptrice est susceptible de ce phage, au moment où le profane pénètre dans la souche de réception, elle provoque une lyse (induction cyclique). Ceci est dû à l’absence de répresseur du cycle lithique dans le récepteur.
L’Alosteria
Les protéines alostériques sont des multimètres dans lesquels la liaison d’une molécule effectrice (substrat ou inhibiteur) à Un de ses monomères (PROTOMER) provoque un changement de conformation qui modifie l’affinité (km, ki) et / ou la vitesse de la réaction (vmax) par l’effecteur.
transcriptase inverse
Ce sont des enzymes que de l’ARN, synthétisez l’ADN. Les virus dont le génome est l’ARN, exiger que cette enzyme reste et associe au génome de l’invité.
CARMEN SÁNCHEZ DE RIVAS , (Barcelone, 1939): Baccalauréat en chimie et physiologie, PhD en biochimie (Université de Paris VI). Il a développé sa carrière scientifique entre la France (Pasteur Institut et l’Université d’Orsay) et l’Argentine (Université de Buenos Aires). Il participe actuellement à un groupe de recherche sur les bactéries à gram positif, leurs phages et leur stress. Il est un chercheur ad-honoreem de la Conicet (Conseil national de la science et de la technologie) de l’Argentine.
Edition effectuée par César Tomé López des matériaux fournis par CIC Network