Valutazione di tre substrati impiegati nel test di immunofluorescenza indiretta che misura anticorpi antimitigondriali per la diagnosi di cirrosi biliare primaria

Insegnamento articoli di ricerca opzionali

Valutazione di tre substrati impiegati nell’immunofluorescenza indiretta Test misurazione anticorpi antimitocondrie per diagnosi di cirrosi biliare primaria

Poma Huanca, Patricia1 Sosa Tordya, Luis Fernando1
Corrispondenza: Patricia Poma
Av. Saavedra 2224 (Seladis Building, Floor 4). Telefono: 2612445
[email protected]
1 Istituto di servizio dei laboratori diagnostici e ricerca in salute (Seladis) -FCFB-UMSA

Riepilogo

Primary La cirrosi biliare (CBP) è una malattia epatica infiammatoria cronica di eziologia sconosciuta caratterizzata dalla distruzione dei dotti biliari intraepatici che innesca una cirrosi epatica. Nel presente studio, sono stati valutati tre substrati comunemente usati per rilevare anticorpi antimitigondriali (AMA) mediante immunofluorescenza indiretta (IFI) per la diagnosi del CBP. I substrati valutati erano: taglio istologico (topo renale), cellule HEP-2 (cellule epiteliali derivate dal carcinoma laringeo umano) e le cellule BHK-21 (fibroblasti rognali del criceto dorato della Siria) che sono stati confrontati con i risultati del test di conferma commerciale che Misure Anti-Mitocondrial M2 Anti-antigeni (ELISA, TRINITY BIOTECH).

25 SERA sono stati selezionati con risultati positivi per ELISA (indice > 1,10UI / ML ). I controlli negativi erano SERA di pazienti che non hanno avuto una storia di malattia del fegato e ha presentato risultati negativi per AMA (indice < a 0,90 UI / ml).

Dei tre substrati valutati, la linea cellulare BHK-21 basata sull’utilità limitata, con valori di efficienza del 56%, sensibilità del 48%, specificità del 64% e un tasso di concordanza Kappa di 0,12 (basso) rispetto ai risultati dello standard di test dell’oro (ELISA-AMA). Per il substrato HEP-2, è stata trovata una concordanza moderata (Kappa = 0,6) contro l’oro standard, è stata ottenuta una specificità = 100%, sensibilità = 60% e efficienza dell’80% I tagli istologici dei reni del mouse hanno mostrato una sensibilità, specificità ed efficienza del 92%; Hanno anche mostrato risultati con maggiore conformità con il metodo ELISA (KAPPA = 0,84). Dei tre metodi di immunofluorescenza valutati, è stato determinato che quello che utilizza i tagli ai reni istologici del topo è il più efficiente e quindi potrebbe essere uno strumento utile come metodo di setaccio nella diagnosi di CBP.

Parole chiave / P>

Cirrosi biliare primaria (CBP), anticorpi antimitocondriali (AMA), immunofluorescenza indiretta (IFI).

Astratto

Astratto

Primary Biliare Cirrosis (PBC) è un infiammatorio cronico Malattia del fegato di eziologia sconosciuta caratterizzata dalla distruzione dei dotti della bile intraepatica che innesca la cirrosi del fegato. Nel presente studio abbiamo valutato tre substrato comunemente usato per gli anticorpi mitocondriali (AMA) mediante immunofluorescenza indiretta (IIF) per la diagnosi di PBC. I substrati sono stati valutati: istologici (rene del mouse), cellule HEP-2 (cellule epiteliali derivate dal carcinoma dell’umanialingualiano) e BHK-21 (fibroblasti dei nani del criceto siriano d’oro) che sono stati condivisi con i risultati del test di conferma (immunusiay enzyme) antigeni commerciali Misurato anticorpi mitocondriali M2 (ELISA, Trinity Biotech).

Abbiamo selezionato 25 SERA positivi per AMA di ELISA (indice > 1.10 IU / ML). I controlli negativi SERA sono stati da paganti che non avevano storia di malattia del fegato e avevano risultati negativi per AMA (indice < 0.90 iu / ml).

Dei tre substrati Testato, la linea cellulare basata sulla BHK -21 ha dimostrato di avere utilità limitata, valori di efficienza del 56%, sensibilità 48%, specificità del 64% e dell’indice di concordanza Kappa di 0,12 (basso) Meade sui risultati dell’oro standard Test (Elisa -ama). Per il HEP-2 è stato un accordo moderato (Kappa = 0.6) rispetto allo standard GOLD, abbiamo ottenuto il 100% della specificità, la sensibilità = il 60% e l’80% dell’efficienza. Il rene del topo istologico ha mostrato una sensibilità, specificità ed efficienza del 92%, i risultati hanno anche mostrato un accordo migliore con il metodo ELISA (KAPPA = 0,84). Dei tre metodi di immunofluorescenza valutati è stato determinato che il rene del topo istologico è il substrato più efficiente e quindi potrebbe essere utile come test di screening per la diagnosticazione del CBP.

parole chiave

primario Cirrosi biliare (PBC), anticorpi anti-mitocondriali (AMA), immunofluorescenza indiretta (IIF).

INTRODUZIONE

Il CBP e Ahreny Payne nel 1950, è una malattia epatica progressivamente cronica, caratterizzata da infiammazione e distruzione dei condotti interlobulari e della bile settale mediati i linfociti T che culmina in a insufficienza epatica. Si presume che sia una malattia autoimmune perché è comunemente associata all’acidosi tubolare renale, alla vitiligine, alla tiroidite di hashimoto, alla sindrome di sjôgren, al fenomeno di Raynaud, alla sindrome di cresta, all’artrite reumatoide, al lupus del lupus sistemico e carenza nella funzione linfocita i soppressori (Zumueta & Navarrete, 2008).

Le sue principali manifestazioni cliniche sono affaticamento, prurito, ittero, presenza di xanthome, xantelasmas e conseguenze dell’assorbimento intestinale, come ad esempio Una carenza di vitamine e osteoporosi (CBP1). Il CBP influisce sulle donne più tra i 30 ei 60 anni, la relazione di coinvolgimento dell’uomo femminile è da 9 a 1. Inoltre, è stato determinato che esiste un’associazione genetica con HLA-DR8. (Idrovo, 2007).

Un caratteristico marker sierologico della malattia è la presenza di AMA, l’obiettivo antigenico è la proteina M2 della membrana interna del mitocondria (componente E2 della pirutura deidrogenasi), altri Le proteine antigeniche mitocondriali come M4, M8 e M9 sono coinvolte in meno proporzione. Gli AMAS sono presenti nel 90% dei pazienti con CBP, e nel 30% dei casi può essere accompagnato da motivo fluorescente citoplasmatico e / o modello periferico nel test anticorpale antinucleare. (Bruguera & ICHIYANAGUI, 2008). Li adora su una frequenza minore, può anche essere trovato nella malattia del fegato indotta da droghe, sifilide, tubercolosi e altre malattie epatiche autoimmuni. (O’Brien, Giordania, Guindi, Hans & Dienes, 2009).

La diagnosi sierologica del CBP è basata su IFI ed ELISA. L’IFI utilizza come tagli istologici del substrato di fegato, renale o stomaco del mouse o ratto e la linea cellulare HEP-2. I test ELISA utilizzano come substrato antigenico del complesso di deidrogenasi piruvato ottenuto da cuore bovino o porcinale (dahnrich, coppie, llorenq cavalleria, wolfgang & PROBST, 2009).

Una caratteristica di vantaggio del test IFI è che consente di valutare contemporaneamente diversi tipi di proteine antigeniche nello stesso substrato (esempi: SP100, GP210, LB2, LKM1, LC1, SLA, M1 – M9) ciò che lo rende un Testare molto sensibile, d’altra parte, il test ELISA utilizza antigeni purificati per un singolo marker di laboratorio che conferisce una caratteristica maggiore. Nel test ELISA, un campione contenente anticorpi ad alta affinità a bassa concentrazione può presentare la stessa densità ottica di un campione con anticorpi a bassa affinità, ma con alta concentrazione non fornisce informazioni quantitative come con la tecnica IFI, in cui è possibile determinare da una serie di diluizione il titolo massimo anticorpo presente nel campione di un dato paziente (cortese & Malera, 2009).

Tra il 2008 e il 2009, nel 2008 e 2009, nel 2008 e 2009 ISTOCompatibilità e laboratorio immunogenetico del Seladis Institute, è stato osservato che c’erano 162 richieste di determinazione AMA dal 162, 49 hanno reattivo per AMA. Per effettuare una buona diagnosi e il monitoraggio di questo tipo di malattia, metodi diagnostici commerciali o ottimizzati e sono richiesti elevate sensibilità e specificità diagnostica. La conoscenza di questi aspetti provoca la garanzia in cui la diagnosi di laboratorio di un determinato metodo è efficiente e affidabile. Prima menzionato, tre substrati vengono valutati nel presente lavoro (tagli ai reni dei topo istologici, linee cellule HEP-2 e linea cellulare BHK-21 del test IFI per la diagnosi di CBP che Mide ama per determinare quale substrato è il più sensibile , specifico, efficiente e che ha un accordo migliore con il test ELISA che Mide ama.

Materiali e metodi

Popolazione in studio

I campioni utilizzati in questo studio è venuto da pazienti che hanno partecipato al Seladis Institute nel mese di aprile 2008 a maggio 2009. I campioni positivi del pannello Sera sono provenienti da pazienti con diagnosi clinica del CBP con sierologia negativa per l’epatite virale e hanno dato risultati ELISA (Trinity Biotech) per AMA positivo (Indice di esempio > 1,10 ui / ml). I campioni del pannello Sera negativo erano SERA di pazienti apparentemente sani senza una storia di malattia del fegato (risultati della transaminasi, fosfatasi alcalina e di bilirubina normale, sierologia per il virus dell’epatite negativo ed ELISA Risultati per la padrona negativa (indice < 0.90 UI / ml).Ciascuno dei pannelli sierici è stato costituito da 25 campioni. Tutti i pazienti che hanno utilizzato il SERA per costruire i pannelli sieri positivi e negativi hanno dato il loro consenso a rendere il loro campione utilizzato nel presente studio.

Analisi dei dati

Tutti i dati del presente Gli studi sono stati effettuati con l’aiuto del database Excel 2007, gli indicatori statistici sono stati utilizzati per convalidazioni come l’indice Kappa e il test MAC Nemar (López de Ullibarri & CURA, 2008) .

Preparazione di impronte

Impront con il substrato cellulare BHK-21

Tutta questa procedura è stata effettuata in Flow Hood Laminar (Gelaire) e ha lavorato con nuovo e materiale sterile.

Un aliquota di cellule memorizzate in azoto liquido e è stato trasferito a un tubo da 15 ml di falco e 3 ml di rpmi 1640 è stato aggiunto quindi è stato centrifugato a 2500 rpm per 5 minuti, questa volta è stato eliminato dal Supernatante e il Pellet è stato risospeso su 1 ml di rpmi 1640 s Pensione (il 10% del siero di latte fetale Bobino (SFB) integrato, antibiotici (gentamicina e streptomicina), quindi trasferiti in una scatola di coltura cellulare di 25 cm2 e incubata per una settimana a 37 ° C, 5% C02 e 90% di umidità relativa.

Una volta che la piastra era in confluenza era racchiusa per 10 minuti a 37 ° C per tutte le cellule Le cellule hanno aderito alla base della scatola di coltura, il tempo delle cellule decollare 15 ml del tubo falco è stato posizionato e centrifugato a 1500 giri / min per 5 minuti. Il soprannatante è stato rimosso, il pellet è stato risospeso in 1 ml di integratori RPMI1640 e la concentrazione cellulare è stata regolata a celle 2.5×106 / ml. Nelle diapositive a 12 pozzetti (MP biomedici, USA), le impronte sono state preparate posizionando 8 line delle celle regolate a ciascun pozzetto. Le impronte sono state centrifugate a 1000 giri / min per 3 minuti e le impronte sono state avvolte con paraphilm (3m), per la conservazione di esse sono state trasportate a 4 ° C per 30 minuti e poi conservate a -20 ° C fino all’uso.

Impront con i tagli renali istologici del sottostratto dei reni

I reni di 25 topi (albini svizzeri) di 28 settimane sono stati estratti con peso medio di 20 g +/- 2 g, che sono stati donati dal bioterio della facoltà di scienze farmaceutiche e biochimiche. I reni sono stati lavati con tampone salino di fosfati (PBS) costituito da fosfato di sodio 112,5 mmol / L, fosfato di potassio di 30 mmol / l, cloruro di sodio 1.15 mol / l, sodio azide 0,95 g / l pH 7.5 Quindi, i reni sono stati collocati in una capsula di Petri contenenti carbossimetil-cellulosa di sodio (Sigma Aldrich) e si stava congelando a -20 ° C fino al momento dell’uso. Per eseguire i tagli di cristallo, i tacos sono stati preparati con i reni confezionati nel 4% di carbossimetil-cellulosa di sodio. I tagli sono stati effettuati per congelare usando un cristallo (Leyca) a -27 ° C, quattro tagli reni sono stati posti per ogni foglio di diapositiva. I tagli realizzati avevano un diametro medio di 5 mm e 5 um spessore.

Preparazione del coniugato fluorescente

per determinare il titolo ottimale del coniugato fluorescente (IgG anti-gammaglobulina e IgM contrassegnati con fluorescein tiioisocyanate) diluizioni (1/100, 1/150, 1/200 e 1/300) sono state preparate con DIL | U.YE del coniugato (50 ul di Evans Blue 0,4% in 3,5 ml di PBS).

Titazione del coniugato fluorescente per il “IFI che utilizza come tagli istologici del substrato di celle rene del topo e linee BHK-21.

Per la titolazione del coniugato fluorescente è stato utilizzato positivo e negativo Controlli per amore della casa commerciale Organtec, Germania.

Le impronte con acetone PA (-20 ° C) sono state fissate per 8 minuti, idratato da 10 minuti in un barattolo di Koplin contenente PBS (10x) pH 7.2 . Le diluizioni (1/10.1 / 20 e 1/40) del controllo di controllo positivo e negativo sono state eseguite. Poi, sono stati seminati 40 diluizioni di Sera , 30 min è stato incubato a temperatura ambiente (T ° A) e in una camera umida per evitare l’essiccazione di tagli o cellule istologici fissi. Le impronte sono state lavate da 10 minuti in PBS e agitazione continua. Le impronte sono state asciugate con carta assorbente e sono state posizionate di nuovo in una camera bagnata. 25 UL è stato posto di diluizioni da valutare dal coniugato fluorescente (1/100.1 / 150, 1/200 e 1/300). È stato incubato nell’oscurità per 30 minuti a ° a. Dopo questo tempo, è stato eseguito il processo di lavaggio e asciugatura sopra descritto. La soluzione di montaggio (12% mowiolo, glicerolo, glicerolo del 30%, tris 20 mmol / l, 0,95 g / l azide sodio) è stato aggiunto e una copertura è stata posizionata su ciascuna diapositiva per evitare l’essiccazione delle impronte. Infine, le piastre del microscopio UV con aumento di 40x sono state lette.

Immunofluorescenza indiretta (IFI)

Il test IFI con celle HEP-2 è stata eseguita in base alle istruzioni del produttore del kit Commerciale (il sito di rilegatura, Regno Unito).In breve: le diluizioni da 1/40 e 80 e 1/160 sono state eseguite dei pannelli SERA e di controllo SERA.

30 minuti sono stati incubati a T ° A. Le piastre corrispondenti sono state lavate per 10 minuti e essiccate, coniugate e incubate nell’oscurità per 30 minuti, quindi le impronte sono state lavate e asciugate di nuovo e il mezzo di montaggio è stato posizionato. Piastre da microscopio UV con aumento 40x.

Per la realizzazione di test IFI con celle BHK-21 e tagli istologici è stato seguito il protocollo descritto nella titolazione coniugata, con l’eccezione che è stata utilizzata il titolo ottimale del coniugato per ogni substrato. Con tutti i substrati valutati, un controllo positivo e negativo (Orgentec) è stato utilizzato simultaneamente. Il controllo positivo di AMA dovrebbe produrre un modello citoplasmatico a colori mela verde con intensità (++) da 1/40 diluizione. Il controllo negativo non dovrebbe emettere fluorescenza a 1/10 diluizione in cellule renali o 1/40 nelle linee cellulari. (Sito vincolante, 2011).

Per l’interpretazione dei risultati dei test IFI, i campioni negativi sono stati considerati quando c’era assenza di fluorescenza della mela verde nel citoplasma. Un campione è stato considerato positivo se la colorazione del citoplasma era maggiore del controllo negativo. (Fig. 1).

Ai fini dello studio, il kit ELISA che misura gli anticorpi contro il marchio M2 Mitocondrial Trinity Biotech Antigen è stato considerato come uno standard d’oro, che riporta una sensibilità del 91% e della specificità di 100% (Jones & Metcalf, 2008).

Risultati

Risultati

Quando si esegue l’analisi precedente dei pazienti che hanno partecipato al servizio di laboratorio è stato determinato questo Di tutte le prove richieste per il rilevamento di malattie autoimmuni durante due accordi (2008 e 2009), la determinazione dell’AMA (ELISA) è stata richiesta del 7% dei casi, con 69 richieste di essere 2008 e 93 nel 2009, aventi un totale di 162 Casi presunti di cirrosi biliare primaria nei due accordi. Dei 162 campioni 49 sono stati costituiti come reattivi per AMA. È stato osservato che la maggior parte dei pazienti diagnosticati come reagenti d’amore erano donne (80%). SERA di 20 donne e 5 uomini sono stati contemplati nel pannello Sera positivo. L’età media dei pazienti i cui campioni sono stati inclusi nel presente studio era di 46 anni, con valori estremi di 22 e 77 anni.

Le diluizioni sono state eseguite: 1/10, 1/20 e 1/40 di controlli positivi e negativi. Il titolo ottimale è stato valutato a cui potrebbe essere utilizzato il coniugato. Le diluizioni sono state valutate 1/100, 1/150, 1/200 e 1/300. Questo esperimento è stato fatto in triplice confezione e di conseguenza è stato osservato che è stata ottenuta la Diluizione 1/150, il vero positivo (VP) e i veri risultati negativi (VN) di Sera di controllo commerciale,

Valutazione dei risultati del test diagnostico nei tre substrati valutati

Valutando la sensibilità, la specificità, i valori predittivi positivi e negativi e l’efficienza dei tre substrati valutati, è stato osservato che la linea cellulare BHK-21 è il substrato meno efficiente, il substrato cellulare HEP-2 ha mostrato Meno specificità, sensibilità inferiore e quindi meno efficienza rispetto ai tagli istologici del substrato. I risultati mostrano chiaramente che i tagli istologici del substrato sono il metodo più efficiente per la diagnosi da IFI per CBP.

Determinazione di Concordanze di diversi substrati impiegati per i risultati anteriori AMAF IFI trovati da ELISA

I test di concordanza utilizzati erano: indice Kappa e il test MC Nemar per due test correlati (abbinati). I risultati dei diversi test di concordanza (P < 0,05) per i diversi substrati rispetto al metodo ELISA che misura anticorpi antigene M2 anti-mitocondriale (standard d’oro). Il valore critico previsto nel test MC Nemar è stato 3.84 (P < 0,05).

I tagli istologici hanno mostrato un indice Kappa di 0, 84 che secondo la scala dell’indice corrisponde ad un’ottima concordanza con i risultati ottenuti dal metodo ELISA. Il test MC Nemar ha presentato un risultato di 0,25.

La cellula LINGEBHK-21 ha presentato un indice Kappa di 0,12 (concordanza carente) con i risultati ottenuti dal metodo ELISA. Il test doccia MC Nemar ha mostrato un valore di 1.13.

La linea cellulare HEP-2 ha presentato un indice Kappa di 0,6 (concordanza moderata) rispetto ai risultati ottenuti dal metodo ELISA. Il valore di MC Nemar era 12.1.

Perché i tagli istologici hanno mostrato come il metodo IFI è più efficiente per la diagnosi del CBP Con IFI, i risultati sono stati confrontati con un metodo commerciale IFI per AMA.L’indice Kappa trovato era 0,66 (ottima concordanza). Il test MC Nemar ha presentato un valore di 1,33.

Discussione

Discussione

Durante l’analisi dei casi positivi per il CBP nel nostro laboratorio, determiniamo che l’80% dei casi colpisce le donne, essendo le donne / Uomo 4: 1 Questi risultati sono simili a quelli riportati da: Abarca, Peña Herrera & GARACE (2006) dove determinano l’eziologia, la sopravvivenza, le complicanze e la mortalità nella cirrosi epatica in Ecuador Evidencing un rapporto donna / uomo di 2,4: 1; Anche Cedeño & Medina (2008) Determina che il 90% delle donne è influenzata da questa malattia. Dei 25 campioni positivi che sono stati utilizzati in questo studio 20 provengono da donne. Valera, Smok & PONIACHIK (2007) Nello studio condotto presso l’ospedale clinico dell’Università del Cile e alla clinica Las Condes de Cile in 115 pazienti, ha dimostrato che 110 erano donne Ciò che era equivalente al 96% trovando un rapporto di coinvolgimento donna / uomo di 9: 1, è noto che i fattori ormonali sono uno dei fattori predisponendo le malattie autoimmuni. (Rojas, 2007, P.324).

Nel presente studio determiniamo che l’età in cui sono presentati i casi PCP è di 45 anni. Dati simili sono stati riportati da Dávalal, Román & BUSTIOS (2007) in uno studio sull’epatite autoimmune in cui hanno incluso il CBP più le loro forme cliniche e fattori relativi alla risposta al trattamento che mostra il rango di età di affettazione da 48 a 59 anni, una possibile spiegazione a questo fenomeno è che a questa età il Thymus ha in gran parte perso la sua capacità di distruggere i linfociti T autorcenti T per selezione negativa, che è un fattore predisposto per la malattia autoimmune.

Fai una buona diagnosi clinica e laboratorio per questo e altro tipo di malattie autoimmuni è vitale, principalmente a causa del carattere invalidatore nel paziente o nel fatto che possono mettere a rischio la durata del paziente in altri casi. In quest’ultimo aspetto Jones & Metcalf (2008) ha determinato che i pazienti con la malattia del CBP nella fase III / IVDE hanno una maggiore mortalità (43,6%) rispetto alla popolazione normale. Pertanto, in caso di diagnosi di laboratorio di CBP, deve essere disponibile un test di efficienza più elevato. Nella nostra esperienza abbiamo osservato che l’utilizzo di substrati se, le linee cellulari (BHK-21, HEP-2) o i tagli di cristalli dei tessuti (fegato o del topo del topo) fluorescenza possono essere evidenziati a livello di citoplasma cellulare che è direttamente correlato alle malattie epatiche di tipo immunologico, Infezioni virali o altri extra autoimmune Ho nature, ecc. (Almeida et al., 2008).

Dei tre substrati valutati determiniamo che quelli basati su linee cellulari hanno un’utilità limitata, specialmente quelle utilizzate dalla linea cellulare BHK-21 che hanno un’efficienza del 56% , Sensibilità del 48% e della specificità del 64%. Mentre questo substrato è considerato buono per determinare anticorpi antinucleari. (SOSA & SÁNCHEZ, 2007) non è per la diagnosi di CBP in quanto ha una bassa concordanza con il test GOLD standard valutato (ELISA-AMA). Non ci sono rapporti sulla bibliografia sulla presenza o sulla assenza di questi antigeni mitocondriali sulla linea cellulare BHK-21.

Una scoperta interessante era trovarla con la linea cellulare HEP-2 nonostante abbia una concordanza moderata (Secondo l’indice Kappa) contro il test Elisa, ha dimostrato di avere una specificità del 100%, vale la pena che se questo substrato fosse stato utilizzato, nessuna fluorescenza è stata osservata a livello di citoplasmale cellulare, si potrebbe dire che il paziente non presenta La malattia ma ancora, è necessario utilizzare un test più efficiente per confermare i suddetti. Per quanto riguarda la sensibilità di questo substrato, nessuna differenza significativa è osservata con le celle BHK-21.

I tagli criostatici del rene del mouse hanno dimostrato di essere il più efficiente con sensibilità del 92% e specificità del 92% rispettivamente. Hanno anche mostrato risultati più ampi con il metodo ELISA-AMA (KAPPA 0.84). In generale è noto che la sensibilità e la specificità dei metodi IFI per AMA sono il 95% (Valera, Smok & PONIA-CHIK, 2007). Questi risultati ci mostrano che il metodo IFI ottimizzato nell’istocompatibilità e al laboratorio immunogenetico dell’Istituto Seladis è buono come metodi simili offerti da diverse case commerciali.Sebbene ci siano differenze a livello di sensibilità e la specificità con il metodo ELISA (metodo definitivo per diagnosticare il CBP), l’unico o forse il vantaggio più importante del metodo IFI rispetto al metodo ELISA è che non è solo limitato per rilevare il Mitocondrial M-2 Antigen, ma può dare risultati positivi contro gli antigeni M1 a M9. Orientare il medico in questo modo per la diagnosi di malattie epatiche autoimmuni, tipo I, II, III o altri autoimmuni non epatici e persino casi di infezioni virali. (Meléndez & DUJARRIC, 2008). Un altro vantaggio non è meno importante è che il metodo ottimizzato rende il test ai pazienti più accessibili perché il costo del reagente per test è BS. 13 contro BS. 45 del kit di immunofluorescenza e BS. 31.50 del kit di ELISA. Il metodo ottimizzato mostra anche svantaggi, il primo è il consumo del tempo (sacrifica il mouse, l’estrazione e la conservazione dei ri-Ñoni, le diluizioni seriali dei campioni di controllo, i lavaggi, la lettura nel microscopio a fluorescenza). Per l’esperienza proprio, scopriamo che è investito un’ora a un’ora e una mezza più elaborazione dei campioni di IFI che da Elisa. È anche importante sottolineare che sono necessari professionisti per fare la lettura e l’interpretazione dei modelli fluorescenti. Un’altra importante scoperta trovata era che diversi modelli citoplasmatici fluorescenti potrebbero essere evidenziati in un certo substrato. Con i risultati ottenuti da questo studio, è stato possibile determinare che dei tre substrati valutati, i tagli ai reni del topo istologici sono il substrato più efficiente ed è il substrato che ha la migliore concordanza con i risultati del test ELISA per la diagnosi di CBP. D’altra parte, è stato determinato che c’è una buona concordanza con i risultati IFI da un kit commerciale di caratteristiche simili. Il test diagnostico utilizzato ci ha permesso di convalidare il test IFI che utilizza i tagli istologici come schermata di prova per la diagnosi della CBP.

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