Questo testo di Carmen Sánchez de Rivas è originariamente apparso al numero 14 (2013) della rete CIC e riproducalo nella sua integrità per il vostro interesse.
con la recente scomparsa di François Jacob (19 aprile 2013), l’ultimo dei tre ricercatori che ha ricevuto il premio Nobel per la fisiologia e la medicina nel 1965 (Jacob, Monod e Lwoff) è andato via. Tale premio ha attraversato il lavoro sulla regolazione dell’espressione genetica della sintesi di enzimi e virus batterici, per molte la consacrazione dell’Oleton.
Oggi, quando sono passati oltre 50 anni dalla pubblicazione di queste opere , è importante sottolineare la congiunzione delle conoscenze e degli interessi coinvolti sia nella liquucinazione del regolamento della Lisogenia, sia della sintesi degli enzimi metabolici. Erano gli studi condotti sui virus batterici (batteriofagi), della Lisogenia e dell’induzione di profano, del trasferimento dei geni mediante coniugazione, dell’induzione cigotica, effettuata prima da André Lwoff, poi di François Jacob ed Elie Wollman, coloro che Hanno condotto Monod e Jacob per essere associato a chiarire quel complesso normativo che consentirebbe anche di spiegare come i batteri di Escherichia Coli regolano i geni coinvolti nell’uso del lattosio come fonte di carbonio.
Durante e dopo II guerra Mondo, un gruppo significativo di ricercatori si stava raccogliendo sotto la protezione e l’auspica di A. Lwoff, che è stato presentato presso le bugie del Pasteur dell’Institut (Le Grenier) dell’edificio biologico della chimica. Monod prima e poi Jacob, si sono incontrati qui dopo aver partecipato molto attivamente in guerra. Jacques Monod ha avuto una partecipazione molto intensa alla resistenza che accompagna il partito comunista, anche se raramente ne parlava. Tuttavia, gli ha portato importanti difficoltà a ottenere il visto in ogni viaggio che ha reso gli Stati Uniti. Giacobbe, con condanne 20 anni e ha avviato solo i suoi studi medici, unito a General de Gaulle a Londra, è stato successivamente inviato a combattere in Africa a nord e lavorato come un chirurgo. Durante l’atterraggio della Normandia è stato gravemente ferito. In questo senso, Jacob è stato uno dei pochi combattenti Compagnon della Liberazione nominata dal generale di Gaulle.
Nel 1954-55, dopo diversi anni di convivenza sul loft, J. Monod è stato nominato capo del servizio e si è trasferito al piano terra dove è stato assegnato un’area importante, che chiamerebbe servizio da Biochimie Cellulaire. Ciò ha permesso di aumentare le possibilità dell ‘”Grenier” e condividere le biblioteche in cui erano fatti i seminari e una sala da pranzo. Nel 1958, dopo aver terminato 3 anni di studi tecnici in biochimica, ho avuto l’opportunità di iniziare a lavorare con Jacques Monod. A quel tempo Monod intervistava i giovani, potenziali assistenti, per completare il gruppo che aveva bisogno di lui e dei suoi colleghi nel nuovo dipartimento. Monod mi ha assunto nella sua squadra e ha iniziato per me quella grande avventura personale della ricerca scientifica. Monod mi ha presentato a A. Lwoff per intercedere nel mio appuntamento come tecnica IP. La figura di Lwoff ha infuso un grande rispetto e persino un punto di paura del set di tecnici e ricercatori; Devo dire che la sua scrivania era in un angolo nascosto del loft e la porta era protetta dai suoi segretari. Tuttavia, è anche vero che mi ha sempre ricevuto con il suo più grande sorriso e si è divertito a vedermi nei seminari, poiché non era normale vedere giovani tecniche in quell’ambiente.
Velocemente, ha introdotto Monod Me nello studio delle curve di induzione dei test β-galattosidasi, enzimologici e immunologici. A quel tempo, per studiare la ß-Gal in un gran numero di ceppi, le colture con detersivo e toluene sono state prima permeabilizzate e quindi aggiungere il substrato (onpg) e misura l’enzima dal colore giallo dell’ortho-fenolo rilasciato. Ciò ci ha portato a mettere un buffer che ha permesso la più grande attività riproducibile, che abbiamo nominato PM2, e successivamente è stato rinominato come “buffer z …”; E abbiamo anche introdotto il bicarbonato di sodio per frenare la reazione.La misurazione delle permessi, dai transacetilassini nei mutanti, con diversi induttori liberi o meno, erano gli elementi di lavoro quotidiani. Ho imparato a organizzare protocolli e esperimenti, scrivere e analizzare i risultati e poi dire loro con il professor Monod.
A mezzogiorno o una volta i seminari, i ricercatori, i tecnici e i visitatori di entrambi i gruppi utilizzati per mangiare La “sala da pranzo”, era un grande corridore smaltato accanto alla biblioteca. Uno dei riti era il caffè che Sarah Rapkine preparava. La maggior parte degli scienziati che stavano “costruire” la biologia molecolare ha eseguito stanze diverse in laboratorio. Tra il soppalco e il nostro servizio, c’era un elevatore stretto senza troppa sicurezza – più come i carrelli elevatori di un cantiere – che hanno permesso il transito di tubi, lastre di Petri e idee tra le 2 squadre.
Ogni mattina, Jacob è stato utilizzato rapidamente attraverso il nostro laboratorio prima di bloccarlo con le sue tecniche, Martine e Danièle, per analizzare le colonie delle colonie dei piatti di Petri, derivanti dall’efficienza del degrado del lattosio, di ceppi sottoposti a mutagens come UV, RX … e replicare, isolare e programmare in dettaglio i seguenti esperimenti. Dopo aver visualizzato i tuoi piatti, ha selezionato un sacco di “mutanti” che poi ‘scese’ al nostro laboratorio. Madeleine Jolit (l’altra tecnica monod) era responsabile della mappatura di loro. Ho analizzato gli enzimi del sistema in varie condizioni di crescita. I dati sono stati analizzati e contabilizzati a seconda dell’induzione o non e ripetuti. Una nomenclatura appropriata di ceppi e mutanti ci ha permesso di sapere se fossero ceppi HFR (dadoras) o recettori F per coniugazione; Dai ceppi selvaggi per il lattosio o il mutanti UV o RX o RX in uno dei suoi geni, Auxurils, ecc. Giacobbe, che abbiamo chiamato Le Grand François, tornò nel pomeriggio al nostro laboratorio per “controllare” i risultati e discuterne con Monod. La sua scrivania è stata comunicata con il laboratorio e in quel programma eravamo abituati a condividere il tè con Madeleine, David Perrin, Gérard Buttin e altri ospiti. Rimase solo alieno per il silenzioso Shiro Nao, che non ha condiviso la lingua o le abitudini culinarie, e persino meno “tè”, ma ci ha dato il suo miglior sorriso come orientale ben educato.
Le discussioni erano intenso, e David è intervenuto continuamente. A poco a poco, Monod usato per distribuire una mappa sulla scrivania in cui erano localizzati mutanti e attività enzimatici, indotti o meno. Il “modello” è apparso e analizzato ciò che gli esperimenti e le costruzioni mancavano essere più convincenti. L’isolamento dei plasmidi è riuscito a ottenere merodiploidi stabili per l’operone Lac, costruire le fusioni del lac ad altri apre e avanzano con il modello. Molti pomeriggi, Jacob camminava con un po ‘di impazienza in attesa dei risultati: l’aspetto del giallo nei tubi dell’esperimento in corso! Gli “esperimenti del secolo” erano tutti i giorni e ci credevamo tutti in loro, fino a dopo diverse ore o giorni di lavoro ci hanno convinto che il risultato non era quello giusto ed è stato “sepolto nel risultato non-esplicabile del risultato”. Giacobbe È scomparso non appena ha intravisto il risultato che il risultato è stato negativo. Molti giorni vennero a convincerci dell’importante esperimento, “copia ‘a Monod che aveva come principio spiegare sia gli obiettivi degli esperimenti che le basi delle tecniche e dei dispositivi utilizzati.
Ricordo che molte notti sono tornato al laboratorio, prima di chiudere l’ingresso principale dell’Istituto, bene per porre fine ad alcuni esperimenti, cambiare i campioni nel contatore di Scintillation, riparare colture, ecc. Allora ascoltò al passaggio di sereno che era abbastanza spegnendo il gas e le luci, lasciando il loro squillo magro che disturbato il silenzio della notte; sembrava un personaggio romanzo sinistro. Non ho mai dovuto saltare il cancello per entrare come Molti dei miei colleghi, ma sono andato in più di un’occasione attraverso l’accesso all’ospedale.
A quel tempo, oltre ai seminari che sono stati effettuati quotidianamente, un venerdì al mese, tutti scorriamo fino alla biblioteca dell’Institut of Physico Chimie, nel quartiere latino, dove sono stati fatti seminari più importanti (Fisiologie Cellulaire Club) con la presenza di ospiti stranieri. Monod voleva fin dall’inizio che ero presente in tutti i seminari e poi ho avuto un esame e ho scritto un rapporto di esso.
Ricordo il tipo di genetica che Jacob dettato nel Collège de France, che loro erano un vero piacere per la loro qualità, immaginazione e umorismo.La classe inaugurale di Monod nel Collège de France, nel 1967, dove ha presentato il suo primo saggio sull’analisi filosofica della scienza, sollevò molta polemica e ha colpito sia scienziati che filosofi.
“Come uno scienziato osa parlare della filosofia? ” Quello era l’inizio delle sue nuove preoccupazioni, che lo intonacò nel suo libro Le hasard et la nécessité, anche oggi tema di analisi e discussione nelle classi di filosofia. La presenza di monografia nei seminari era allo stesso tempo apprezzata e temita, da quando lui ha avuto la capacità di disturbare chiunque abbia fatto una domanda che ha considerato assurdo o poco elaborato. Il suo sguardo lasciato “inchiodato” a uno sulla sua sedia e le sue riflessioni potevano diventare squalifica. D’altra parte, la sua capacità di analisi, sintesi, ha permesso l’analisi Per spiegare all’espositore dell’ambito dei suoi risultati, gli esperimenti che mancavano …, anche a terra non direttamente collegati alla sua specialità, che più ammirati e rispettati.
entusiasta, cordiale, attento, Erano i “Jacques” che Jacob descrive anche ed è colui che ha stimolato il mio impegno per la scienza, che mi ha permesso di finire i miei studi universitari. Sono stato fortunato a partecipare a quale era la grande avventura dell’Operton e in seguito in pieno UE Foria de la Alososteria Ho partecipato a molti esperimenti sugli enzimi allostalici con JP Changex. Alla fine della mia laurea, si sono fidati di me per analizzare il GDH (Glutamic-Deidrogenasi) di E. Coli per implementare le sue proprietà allostal. Purificazione, cinetica di tutti i tipi, determinazione della velocità di sedimentazione, km e ki di diversi substrati nelle due direzioni …, tutti hanno mostrato il comportamento previsto per un enzima di alostérica, ma nessuna nuova proprietà per “il modello”, quindi solo Rimase nei miei quaderni. Dopo più di un anno, questa linea di lavoro è stata abbandonata; Nulla è stato pubblicato che non è stato considerato romanzo e accettato da Le Patron. Quale sarebbe stato il suo stupore (e la gioia) se avesse scoperto che il repressore, il suo repressore lac, è una proteina alostale!
Quando la mia carriera scientifica era mirata, Monod ha messo una luce di avviso: “Carmen , questo ufficio è molto difficile, dariamolo ai ragazzi! “. Qualsiasi opinione esplicita che mostra quanto sia stato difficile per le donne accedere al mondo della scienza, come analizza di Sandra Legout. Sebbene ci siano stati molti scienziati che lavorano nel suo laboratorio, Penso di essere stata l’unica donna ad aver fatto una tesi sotto la sua direzione.
Ho anche incontrato l’altro protagonista, “Monod”. Proprio come potevamo vedere e apprezzare la sua creatività e intelligenza, potrebbe essere estremamente rigido nella modifica di qualsiasi aspetto riferito al “Dogma centrale”: DNA- > Proteine RNNA. Non è stato facile accettare la regolazione positiva di Arabinosa (Engelsbeg in 5) e più vicina a noi, il maltose (m schwart in 5). In quel contesto i miei risultati di tesi, “la repressione catabolica nell’Opera del lattosio”, che ha proposto un regolamento traslazionale o la presenza di un secondo promotore per l’inizio della traduzione (che sarebbe quindi una sequenza di lucentezza-delgari), non erano i benvenuti e lo erano benvenuti non pubblicato! Preferiva approfondire gli studi della repressione catabolica con gli effetti dell’AMPC, in cui gli effetti di regolamentazione erano evidenti a livello trascrizionale. Avrebbero presto mostrino il lavoro mostrando effetti normativi della repressione catabolica a livello di traduzione; Io stesso, lontano dall’Istituto, sono stato in grado di fornire dati a tale riguardo.
Con il passare del tempo, Monod stava guadagnando terreno. Questo è stato esacerbato dal suo incomprensibile bisogno di corteggiare che alcuni incoraggiati. Molti sembravano purtroppo il loro passaggio di tè al whisky circondato da un tribunale dipendente, poiché a nostro avviso non aveva bisogno che sia valutato. La sua intransigenza nell’accettare risultati diversi, soprattutto quando le sue giranti non hanno partecipato a “la Corte”, lo portò a commettere l’ingiustizia. È così che non ha capito o accettato i risultati della “trascrittasi inversasi” nei batteri, che descrivevano Mirko Beljanski già nel 1967 nel suo servizio prima che H. Temin lo fece in virus, il che gli ha conseguito il premio Nobel insieme a D. Balimore e R. Dulbecco nel 1975. Invece, una grande discriminazione è stata impegnata con Mirko sia in termini scientifici che per quanto riguarda le risorse fornite dall’Istituto. Proprio in quel momento, durante i miei esperimenti sulla repressione catabolica, ho suggerito che altri meccanismi diversi dal repressore potrebbero intervenire nella regolazione del Lac. Quindi pensavo che una trascrittasi inversa possa svolgere un ruolo in quel tipo di regolazione. Ho misurato quell’enzima in condizioni o meno della repressione catabolica e ha osservato differenze significative che potrebbero giustificare un tipo di regolazione da parte da un’altra rotta. Nonostante gli avvertimenti di David (Le patrono n’aimera Pas ça!), quando mi sono imbattuto in Monde per analizzare i progressi del mio lavoro, ha provato prima a convincermi dei dati inaffidabili (e dell ‘”enzima di Mirko”) e, dopo la mia resistenza e insistenza su un’analisi più scientifica, lo ero Diviato ad abbandonare quella linea.
Verso gli anni ’70, Jacob è stato dedicato allo studio di organismi eucariotici (topi) e trasferiti nel nuovo edificio mondiale Jacques, dall’altra parte della strada. È stata un’intera avventura per attraversare la strada del Dr. Roux dove il Pasteur Cript e la Biblioteca centrale, testimoni di un’altra epoca. In quel luogo, nel nuovo anno, gli Amministratori hanno offerto al personale i loro desideri della felicità. Anche alla data della morte di Pasteur, c’era una commemorazione con tutto il personale che poi andavamo attraverso la cripta per dare alle condoglianze alle autorità! Due occasioni importanti per attraversare la strada!
Monod, d’altra parte, ha lasciato il laboratorio per la direzione dell’Istituto Pasteur in cui riorganizzò sia le risorse che la distribuzione dei gruppi: i progetti di ricerca sarebbero stati effettuati a Parigi; Le applicazioni e la produzione in Garches, un intero scalpore, presso il Pasteur Institute! In una conversazione ho avuto con F. Jacob nel 2010, rivediamo la nostra visione della scienza attuale: anche giustificato verso “Applications”. Per entrambi è stato un piacere ricordare quale fosse il periodo entusiasmante che dovevamo vivere, cosa ha denominato la “febbre della biologia molecolare”. Solo 2 periodi della sua vita erano così eccitanti, l’altra era la sua esperienza nel Nord Africa durante il combattimento e come medico durante la seconda guerra mondiale.
Oggi, 50 anni dopo quelle esperienze e molti chilometri attraverso Continuo a valutare quanto sia importante incontrarsi lì in quel momento e con quell’ambiente così eccezionale, ciò che ha acceso la fiamma stimolante (Le Feu Sacré) che mi permette di continuare sempre ulteriormente, nonostante gli ostacoli con cui ci siamo imbattuti nel giorno in giorno .
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Note:
OPERON
Per una determinata funzione (metabolismo del lattosio) sono richieste una serie di enzimi (ß-galactosidasi, ß-galatosyl permessi, transacetilasi). Il I geni corrispondenti sono strutturalmente associati e coordinalmente rispondono a un team di regolatori (proteine e sequenza dell’operatore) che formano un operone.Le interazioni ambientali consentiranno (regolamento positivo) o nessuna trascrizione (regolazione negativa) della trascrizione del giunto (unità trascrizionale) e quindi produrre le proteine necessarie per la funzione. Nel caso del regolamento negativo (come lac) l’induttore (lattosio e / o alolattosio) intercetta l’associazione del repressore al DNA (operatore) e consente la trascrizione del set. La presenza di glucosio, fonte di carbonio preferita, interferisce la capacità di induzione del lattosio che esercita la repressione catabolica. Solo quando il glucosio è esausto, i geni LAC sono espressi; Sotto queste condizioni le curve di crescita mostrano 2 tappe con diversi tassi di crescita separati da un plateau (diaruxia).
PROFAGE E LISOGENIA
Alcuni virus dei batteri (batteriofagi o fago) possono essere rimanenti ” Mudum ‘all’interno del tuo ospite sotto forma di un profano e si dice che il tuo ospite sia lisato per quel fagio. Ciò implica che i batteri siano immuni a virus simili; Tuttavia, in determinate condizioni (stress) il profano può essere svegliato e sdraiato all’ospite.
coniugazione
era evidente nei batteri, prima a Escherichia coli, cosa ha permesso a parlare del sessualità dei batteri. Alcuni ceppi hanno la capacità di trasferire con alta efficienza il suo genoma (HFR, alta frequenza di ricombinazione) ad altri batteri dell’accogliente in una sequenza temporale relativa alla posizione dei geni sul cromosoma. È dovuto alla presenza di una fabbrica F integrata nel suo genoma assente nell’accettore (F-). In alcuni casi, siamo stati in grado di essere isolati ceppi del fattore F sotto forma di plasmide rispetto a quando sbatti il genoma batterico, alcuni dei geni (f’o f premium) sono stati isolati. Ciò consente di costruire diploidi parziali per quei geni (merodiploidi). Quando il DNA in arrivo è il corriere da un profano, e il batterio ricevente è suscettibile a quel Phage, al momento il profano entra nel ceppo ricevente, provoca la lisi (induzione cigotica). Ciò è dovuto all’assenza di repressore del ciclo litico nel ricevitore.
alosteria
Le proteine alostérierie sono multimetrici in cui il legame di una molecola di effettori (substrato o inibitore) a Uno dei suoi monomeri (protomero) provoca un cambiamento conformazionale che modifica l’affinità (km, ki) e / o la velocità della reazione (VMAX) dall’effettore.
Triplicasi inversa
Sono enzimi che da RNA, sintetizza il DNA. I virus il cui genoma è RNA, richiede questo enzima di rimanere e associare al genoma dell’ospite.
carmen sánchez de rivas , (Barcellona, 1939): laurea per la chimica e la fisiologia, PhD in Biochimica (Université de Paris VI). Ha sviluppato la sua carriera scientifica tra la Francia (Istituto Pasteur e Università di Orsay) e Argentina (Università di Buenos Aires). Attualmente partecipa a un gruppo di ricerca sui batteri grammi positivi, ai loro fagi e stress. È un ricercatore ad-Honoreem del Conicet (Consiglio nazionale della scienza e della tecnologia) dell’Argentina.
Edizione eseguita da César Tomé López da materiali forniti dalla rete CIC