il sociale ed economico Il costo del colpo (CVA) è continuamente aumentato e fino ad oggi ci sono poche possibilità di ridurre la mortalità o la disabilità derivate da questa patologia. Per questo motivo, la ricerca di nuovi obiettivi terapeutici per la sua applicazione in clinica è una necessità di priorità. Nel presente studio, è stata studiata la risposta autofagica all’ischemia cerebrale e alla sua relazione con lo stress del reticolo. L’obiettivo era quello di approfondire la conoscenza di questi meccanismi, che costituiscono potenziali bersagli terapeutici contro la CVA.
Nel primo capitolo, uno studio comparativo della risposta autofagea tra due strutture cerebrali (la corteccia cerebrale e l’ippocampo cerebrale sono stati eseguiti ) che presenta una vulnerabilità differenziale all’ischemia. Per questo, è stato utilizzato un modello di ischemia ex vivo basato sull’uso di sezioni cerebrali. Questo modello consente il confronto delle risposte di diverse strutture in condizioni sperimentali identiche (in particolare, 30 minuti di ossigeno e privazione del glucosio sono stati utilizzati da 3 ore sotto condizioni normossiche). Per caratterizzare l’attività autofagica, sono stati misurati i livelli di marker di induzione autofagia e supporti specifici dell’autofagia (stimando così il flusso autofagico). I risultati ottenuti hanno permesso di concludere che l’OGD induce una rapida risposta autofagica nella corteccia cerebrale che non è stata osservata nell’ippocampo. Il ruolo neuroprotettivo dell’autofagia nella corteccia cerebrale sembra comportare il controllo dei livelli di polibiquitina e dei livelli di rilascio del glutammato.
Il secondo capitolo confronta la risposta autofagica tra le strutture che utilizzano un modello di ischemia cerebrale globale. Questo modello ha permesso di estendere i risultati descritti nel capitolo precedente a un modello in vivo. Sia la risposta autofagica all’ischemia e il loro rapporto con la risposta alle proteine scarsamente piegate (UPR) indotte da uno stress del reticolo endoplasmatico è stato analizzato. Sia nella corteccia cerebrale che nella struttura dell’ippocampo, è stata osservata l’attività autofagea, che non poteva essere rilevata nella regione del Ca3 dell’ippocampo. La risposta autofagica in CA1 non sembra sufficiente a combattere lo stress del reticolo, che spiega la presenza di secoioti (aggregati di proteine scarsamente piegate) osservate nei neuroni di questa struttura. L’attivazione farmacologica dell’UPR ha aumentato l’attività autofagica, eliminando i seciolari e riducendo il danno ischemico.
Il terzo capitolo analizza la relazione tra Autofagia e il perk tramite Vía in un crop organotipo ippocampo sottoposto a OGD e RL. Questo modello consente di controllare la concentrazione di un farmaco che raggiunge i neuroni e ottenere campioni in modo rapido, che consente di studiare le differenze nelle risposte tra tempi molto brevi. Lo studio ha dimostrato che la fosforilazione di EIF2 (marcatore di attivazione del Perk) ha presentato una risposta rapida e a breve termine. Quando è la fosforilazione, è stato mantenuto lungo il RL, c’era un effetto neuroprotettivo mediato da ATF4 (attivazione del fattore di trascrizione 4). È stato descritto che ATF4 è in grado di produrre una risposta citoprotettiva nota come risposta integrata allo stress (ISR, risposta di stress integrata). L’ISR include l’attivazione dell’autofagia e l’aumento dell’attività antiossidante. A differenza di ciò che è stato osservato in altri modelli di ipossia, nel modello qui utilizzato, l’effetto neuroprotettivo di ATF4 è dovuto a una risposta antiossidante piuttosto che ad un’attivazione di autofagia. Ciò ci ha permesso di concludere che il peso specifico dei diversi componenti dell’ISR dipende dal contesto cella e dal modello sperimentale.
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