lipases e Le esteras sono biocatalisti versatili e il tipo più usato di enzimi per scopi biotecnologici. Ophiostoma Picheae produce un’esteterasi sterolo (OPE) con alta affinità su trigliceridi e esteri steroli in grado di idrolizzare miscele in modo efficiente di questi composti dagli estrattivi di legno. A causa di queste proprietà, l’uso di questo enzima è stato proposto di diminuire il problema della deposizione del passo in legno di legno duro e legno tenero. La sequenza di proteine mature dell’OPE è stata espressa con successo a Mut + e Muts Pichia Pastoris, che differiscono nella loro capacità di metabolizzare il metanolo come induttore di espressione, con conseguente livelli più elevati di attività rispetto a quelli ottenuti nelle culture di O. Piceae Erlenmeyer. Inoltre, la produzione di enzimi ricombinanti (OPE *) è stata ridimensionata al bioreattore che opera nei processi batch e batch feed utilizzando entrambi i ceppi. In tutte le condizioni, i livelli di attività erano più alti di quelli ottenuti nel pallone da Erlenmeyer, raggiungendo la massima attività (30 U / ml) con sforzo di Muts operando in una strategia di co-alimentazione di sorbitolo durante la coltivazione del batch daed.
il cinetico La caratterizzazione della proteina ricombinante ha mostrato un enzima migliorato con maggiore efficienza catalitica apparente rispetto all’enzima nativo (~ 8 volte) per tutti i substrati dosati (p-nitrofenolo, glicerolo e esteri di colesterolo). Né il più grande livello di n-glicosilazione né la presenza di residui di metionina ossidata nella regione substrato-vincolante dell’OPE * sembrano essere responsabili di questo miglioramento. Gli studi di dicropuismo circolare hanno mostrato cambiamenti nei loro spettri ma l’analisi dei dati (metodo K2D da Dichroweb) ha comportato un contenuto identico di -Helix (0,46) e -foglio (0,23) per entrambe le proteine, quindi non sono state rivelate cambiamenti nella loro struttura secondaria. La differenza principale è stata trovata nella sequenza N-terminale di OPE * che conteneva 6-8 residui di OPE. Questi sono stati derivati dal vettore utilizzato per l’espressione proteica accoppiata con un’elaborazione inefficiente del pre-proposto del fattore di accoppiamento -accoppiamento da Saccharomyces Cerevisiae utilizzato per la secrezione. Ciò influenzano lo stato di aggregazione rilevato in OPE * (inferiore a quello riportato in OPE) che migliora la sua efficienza catalitica. Le nuove applicazioni biotecnologiche per questo enzima sono state studiate da: i) È in grado di deacetilare polivinil acetato (PVAC), uno dei composti identificati negli stickies formati durante la produzione di carta riciclata, ciò che è stato confermato utilizzando la spettroscopia FTIR, l’analisi della spettrometria di massa e tittrimetria. I risultati raggiunti nell’ambito delle condizioni previste erano paragonabili a quelli ottenuti con lo specificamente commercializzato per questo scopo Optizyme® 530. II) sintetizza gli esteri nei media organici ed è stato utilizzato nella sintesi degli esteri di fitosterolo, come prodotti nutraceutici. In questo caso, l’influenza del substrato e della concentrazione di enzimi e l’effetto di diversi solventi organici con e senza acqua nelle reazioni sono stati studiati. I risultati hanno mostrato che gli enzimi di O. Piceae sembrano avere un’attività sintetica simile, ancora meglio in alcune condizioni, all’enzima commerciale da C. rugosa utilizzata; Ottenere una produzione complessiva di esteri STERYL del 60-80% entro 24 ore a seconda dell’eccesso molare del substrato, il fatto che è stato brevettato. In relazione con la sua potenziale applicazione industriale, l’enzima nativo è stato immobilizzato con successo attraverso gruppi epossidici attivati nel nuovo supporto di Dilbeads ™. Il biocatalizzato immobilizzato ha mostrato significative stabilità migliori a valori elevati del pH e temperature rispetto agli enzimi solubili e sono stati in grado di idrolizzare il colesteryl oleato per diversi giorni quando è stato imballato come bioreattore. Infine, sono stati fatti diversi esperimenti di cristallizzazione con enzima nativo. Tuttavia, il suo alto comportamento di aggregazione non ha permesso di ottenere cristalli di buona qualità per la diffrazione a raggi x.
Las Lipasas y esteras figlio biocatalizadores versátiles y el tipo más utilizado de enzimas para multes biotecnológicos. El Hongo Ophiostoma Piceae Produce un ESTEROL ESTESA (OPE) Con Alta Afinidad Sobre Triglicéridos y ésteres de esterol Siendo Capaz de hidrolizar eficazmente mezclas naturales de estos compuestos a partir de exc extractos de madera. Debido a Estas Prifeyades, SE ha Propuesto El Uso de Esta Enzima Para smustIR El problema de la deposita de campo en la fabricación de pasta de madera procedute de coníferas y frondosas. La Secuencia de la Proteína Madura de la Ome Se Ha Expresado con Éxito en Cepas Mut + y Muts de Pichia Pastoris, Que Difieren it su su Capacidad de metabolizar Metanol Como Inductor de la expresión, Dando Como Risurado niveles más altos de actividad que los obtenidos en cultitos en erlenmeyer de o. piceae.Inoltre, la produzione dell’enzima ricombinante (OPE *) è stata ridimensionata al bioreattore che funziona in alimentata discontinua utilizzando entrambi i ceppi. In tutte le condizioni testate, i livelli di attività erano maggiori di quelli precedentemente ottenuti nella boccetta Erlenmeyer, raggiungendo la massima attività (30 U / ml) con lo sforzo di Muts operando in una strategia con sorbitolo come co-substrato durante la cultura discontinua. La caratterizzazione cinetica della proteina ricombinante ha mostrato un enzima migliorato con un’efficienza catalitica più elevata rispetto all’enzima nativo (~ 8 volte) per tutti i substrati testati (esteri di p-nitrofenolo, glicerolo e colesterolo). Né il più alto livello di n-glicosilazione né la presenza di residui di metionina ossidata nella regione di rilegatura al substrato OPE * sembrano essere responsabili di questo miglioramento. Gli studi di dicroismo circolare hanno mostrato cambiamenti nei loro spettri, ma l’analisi dei dati (metodo K2D di Dichroweb) ha comportato un contenuto identico in eliche α (0,46) e fogli β (0.23) per entrambe le proteine che indicano l’assenza di cambiamenti nella sua struttura secondaria. Tuttavia, la principale differenza in essi è stata trovata nella sequenza N-terminale dell’OPE * contenente 6-8 residui piuttosto che ope. Questi residui provenivano dal vettore utilizzato per l’espressione della proteina e l’inefficiente elaborazione del fattore α del saccharomyces cerevisiae utilizzato per la secrezione. Ciò influenza lo stato di aggregazione rilevato in OPE * (inferiore a quello descritto in OPE) che migliora la sua efficienza catalitica.
Dato il suo potenziale, le nuove applicazioni biotecnologiche sono state studiate per questo enzima: i) desaotato di polivinile acetato (PVAC), Uno dei composti identificati negli stickies formati durante la produzione di carta riciclata. La capacità dell’enzima di svolgere tale reazione è stata confermata dalla spettroscopia FTIR, dall’analisi della spettrometria di massa e dalla titolazione; Quindi, i risultati ottenuti, ai sensi delle condizioni di prova, mostrano un’attività simile a quella dell’enzima OptizyyMe® 530 commercializzato per questo scopo. II) Sintesi di esteri nei media organici, in particolare gli esteri di PhytoreSerterolo, come i prodotti nutraceutici. In questo caso, l’influenza della concentrazione di enzima e substrato e l’effetto di diversi solventi organici insieme con la presenza e l’assenza di acqua nelle reazioni sono stati studiati. I risultati ottenuti hanno permesso di brevettare l’occupazione dell’enzima per questo scopo essere simili a quelli raggiunti con l’enzima commerciale di C. rugosa impiegati in confronto e ancora meglio in alcune circostanze. Una produzione totale di esterol esteri del 60% in 24 ore è stata osservata quando una piccola sostanza è stata utilizzata aumentando l’80% con gli eccessi anziani. Pensando al suo possibile uso industriale, l’enzima nativo è stato immobilizzato con successo attraverso gruppi epossidici attivati in un nuovo supporto chiamato Dilbeads ™. Il biocatalizzato immobilizzato si è rivelato significativamente più stabile a valori e temperature di alto pH e temperatura rispetto all’enzima solubile e ha mantenuto la capacità di idrolizzare il colesterillo oleato per diversi giorni quando è stato confezionato come un bioreattore. Infine, sono stati effettuati diversi esperimenti di cristallizzazione con l’enzima nativo. Tuttavia, l’alta tendenza che mostra per formare aggregati ha impedito l’ottenimento di cristalli di buona qualità per gli studi di diffrazione dei raggi X.