Aumento da interleucina-1 beta, interferón gamma e factor de nechrosis tumoral alfa no soro e cerebro dos ratos infectados co virus de encefalite equina venezolano.
Nereida Valero 1, Ernesto Bonilla 2,3, Light Marina Espina 1, Mery Maldonado 1,
Elsa Montero 4, Florencio Añez 1, Alegry Levy 1, John Bermudez 1, Eddy Meleán 1 e
Anais Nery 1.
1 sección de viroloxía,
2 Sección de Neuroquímica, Instituto de Investigación Clínica “Dr. Dr. Negrette Américo “, Facultade de Medicina, Universidade de Zulia,
3 Instituto Venezuela de Investigación Científica (IVIC-Zulia) e
4 hospital” Dr. Adolfo Pons “, Maracaibo, Venezuela.
Autor de correspondencia: Nereida Valero. Sección de Virología, Instituto de Investigación Clínica “Dr. Dr. Negrette Américo “, Sección Postal 23. Facultade de Medicina, Universidade de Zulia. Maracaibo Venezuela. Tel. (0261) 3279847, Fax: (0261) 7597247, CEL: (0414) 3624181. E-mail: [email protected].
Resumo
Varios esforzos foron dirixidos para aclarar os mecanismos principais de protección e recuperación en agudos infeccións virais eo posible papel das citoquinas implicadas na resposta inmunitaria primaria inducida por unha estirpe epizoótico do vus da encefalite equina venezolana (EEV). No presente estudo, as concentracións de TH1 interleukin-2 (IL-2) e interleucina-4 (IL-G), proinflamature (IL-1b) e factor de necrose están determinados neste estudo. Tumor -Alfa (TNF-A) En soro e cerebro dos ratos infectados co virus de Eev a diferentes períodos de infección. Os ratos de NMRI Albinos infectados cunha suspensión (10 DL50) da tensión de Guajira do virus de Eev e utilizáronse un grupo de control (sen infectar). Os días 1, 3 e 5 post-infección, o sangue completo foi extraído de ratones para obter o cerebro de perfusión de soro e prior, para obter o homoxeneado do cerebro. En ambas mostras, IL-2, IFN-G, IL-4, IL-1B e TNF-A por Técnica de Elisa foron determinados. Observouse un aumento significativo (P < 0,01) no soro cerebral e homoxeneizado a 1º, 3º e 5º día post-infección nas concentracións de IL-1B, IFN-G e TNF- A, cando se compara co grupo de control. A cuantificación do IL-2 e IL-4 non mostrou diferenzas estatisticamente significativas cando se compara cos controis. Estes resultados suxiren que IL-1B, IFN-G e TNF-A poden estar implicados na resposta inmune precoz ao virus EEV durante a infección primaria.
Palabras clave: Venezuela Equine Encefalite, citoquinas, sistema nervioso central, soro.
aumento da interleucina-1 beta, gamma interferón e factor de necrose tumoral alfa en soro e cerebro dos ratos infectados co virus de encefalite equina venezolano.
Resumo
Os esforzos considerables foron dirixidos para aclarar os principais mecanismos de protección e recuperación en infeccións virales agudas E, o posible papel das citocinas indícase na resposta inmune primaria inducida por unha cepa epizoolóxica do virus Equina Equina (Vee) venezolano (Vee). Este estudo examinou os niveis de citoquinas th1 interlekin-2 (IL-2) e interferón-gamma (IFN-G), th2 citokines interleucina-4 (IL-4) e citoquinas proinflamatorias (IL-1B, TNF-A) en soro E o cerebro dos ratos infectados co vee virus comedor diferentes períodos de infección post. Os ratos masculinos de NMRI albino infectados cunha suspensión (10 DL50) da tensión de Guajira do virus Vee, utilizáronse un grupo de control (sen infección). Nun ano, 3 e 5 días post-infección, o sangue enteiro e os cerebros foron extraídos para obter homoxeneates de sera e cerebro, respectivamente. IL-2, IFN-G, IL-4, IL-1B e TNF-A foron determinados por ELISA. Un incremento significativo nos niveis de IL-1B, IFN-G e TNF-A foi observado (P < 0,01) en soro e homoxeneos cerebrais a 1, 3 e 5 post-infección , cando compartiu co grupo de control. Os niveis de IL-2 e IL-4 non mostraron ningunha diferenza estatística sincronizada cando se compara cos controis. Estes resultados suxiren que IL-1b, IFN-G e TNF-A, poderían estar implicados na resposta inmunitaria precoz ao Vee Virus durante a infección primaria.
palabras clave : Encefalite equina venezolana, citoquinas, sistema nervioso central, soro.
recibido: 07-07-2006. Aceptado: 27-03-2008.
Introdución
A inmunidade específica nas infeccións virales está mediada por unha combinación de mecanismos inmunes humorales e teléfonos móbiles .. Os anticorpos son producidos e efectivos contra virus só durante a etapa extracelular da vida destes microorganismos. Os virus poden ser extracelulares ao comezo do curso da infección antes de entrar na célula hóspede ou no caso de virus citopáticos unha vez que sexan liberados das células infectadas lisadas, polo que no seu estadio intracelular estes virus non son detectados polos anticorpos. A súa destrución está mediada pola activación de mecanismos que desencadean unha resposta celular (linfocitos T) que controlan a infección ou a replicación ata a aparición dunha resposta humoral (linfocitos B) que favoreza a síntese de anticorpos específicos do axente infectado; Con todo, son capaces de evitar os mecanismos inmunitario de defensa, contribuíndo así á patoxenese, cando sofren variacións antigénicas, inhibindo a presentación antigénica través da supresión dos xenes da histocompatibilidade principal I e imunocompetentes inactivate células complexo (CMH) de clase, entre outros (1).
No sistema nervioso central (SNC), o control das infeccións virales é un traballo complexo que se cumpre a través de mecanismos que controlan e regulan o desenvolvemento dos procesos inflamatorios locais que inclúen o Barreira de hemato-encefálica (BHE), con capacidade limitada para a presentación de antíxenos ea modulación funcional das reaccións inmunitarias por gangliosídeos e astrocitos. Normalmente as células dentro do CNS non expresan antígenos de clase I ou clase II do CMH. As células T activadas na periferia, introduzan a SNC en formulario antíxeno non específico como parte da rutina de vixilancia inmunolóxica. Só as células T específicas para un antíxeno presente no cerebro e da medula espiñal son retenidos dentro do SNC (2).
Algúns autores informaron tal infiltración de linfocitos T, como Na encefalite rasmussen (RE), unha síndrome autoinmune que frecuentemente segue un episodio infeccioso, que se manifesta por ataques epilépticos que son refractarios ás drogas e require a eliminación quirúrgica das rexións cerebrais afectadas. A táboa histolóxica das devanditas rexións está dominada por CD8 + infiltrando os linfocitos T que frecuentemente se colocan en contacto directo con neuronas. Infiltrando os linfocitos de citotóxicos T amosar o uso parcial dos receptores indicativos dun proceso de antíxeno específico e actualmente representa o máis probable. A similitud histomorfolóxica coa encefalite viral foi amplamente discutida a especulación. Co paso do tempo os enterovirus, os virus Epstein-Barr, os herpes sinxelos e tamén o citomegalovirus foron detectados en tecidos cerebrais afectados. Na fase final, a causa infecciosa desaparece como para todas as outras enfermidades autoinmunes cunha sospeita de patoxénese viral (3).
Isto contribuíu á consideración de que o SNC eo sistema inmunitario interactúan dun xeito particular (4); De aí a importancia de coñecer os mecanismos relacionados coa defensa primaria e específica do servidor antes dunha infección viral.
Ademais, os procesos inflamatorios do SNC, como a encefalite, caracterízanse por presentar un aumento local na concentración de citoquinas, especialmente a partir de interleucina 1-beta ( IL-1b) e factor de necrose tumoral-alfra (TNF-A), que pode activar as células endoteliais e deste xeito, promover a migración de neutrófilos dentro do sitio inflamado. A fervenza de eventos comeza coa activación do linfocito T, que inclúe a liberación de citoquinas poderosas (IFN-GAMMA, IL-2, TNF) e mobilización de macrófagos que non só atacan o virus senón tamén ao servidor, causando graves danos nos tecidos e vasos sanguíneos (5).
Por outra banda, a encefalite equina venezolana (EEV) é unha infección causada por un virus altamente neurotrópico que pertence ao xénero Alfavirus da familia Togaviridae (6, 7) .. A infección viral por Eev é transmitida por Aedes Aegypti Mosquitos, Taenianchus (8), por membros da familia Culicidae e por Nematocherapy dígaraeas da familia Simulidae; Os roedores, burros, cabalos, gando, morcegos, posiblemente paxaros e cans, son considerados encoros do virus EEV (9).
Estudos da resposta inmune á infección por virus EEV centráronse principalmente para a xeración de vacinas ou cepas atenuadas na produción de neutralizar anticorpos co propósito de eliminar o virus no servidor. Non obstante, a inmunidade mediada por anticorpos, non é necesariamente o único mecanismo de protección contra a infección por este virus. Investigacións nas que os ratos que foron tratados con Splenocyte inmunizado Supernatant suxiren que a protección contra un ataque letal polo virus EEV pode ser mediado por IL-1 e IL-2 (10).
TO TNF e IL-1 exhiben efectos antivirais directos que son parcialmente mediados por TNF-B ou linfotoxina (LT), que é producido por linfocitos T e outras células, Sendo un 30% homólogo a TNF derivado de macrófagos e cumpre moitas das mesmas funcións. Os efectos biolóxicos da LT son os mesmos que os de TNF, compostos pola súa unión aos mesmos destinatarios. Non obstante, porque a cantidade de LT sintetizada polos linfocitos T estimulada por antíxenos é moito menor que as cantidades de TNF producidas polos fagocitos mononucleares estimulados por LPS, o LT non está ben detectado en circulación. Polo tanto, LT é unha citoquina de acción local e non un mediador insulto sistémico (1).
IL-2 é un factor de crecemento automático e paracrino que segregan os linfocitos activados e é esencial para a proliferación clonal da célula T. T que son estimuladas Por IL-2, mostran un aumento da citotoxicidade e producen IFN-G YBY TNF-B, así como factores de crecemento celular b como IL-4 e IL-6. IL-2 estimula as células NK que aumentaron a actividade citolítica (11).
Os estudos da resposta inmune á vacina TC-83 en ratones identificaron unha resposta inmune mediada polo patrón TH1, con activación local de celas TCD4 + e CD8 +, Coas células T CD4 o tipo de células que prevalecen despois da linfobladoxénsoxenesis específica do virus e que a activación destes tamén estaba asociada a unha elevación de IL-2 (12).
IFN-G (tipo II) ten algunha actividade antiviral. É secretada por case todas as células T CD8 e por algúns CD4 ts particularmente os do subgrupo TH1. É o activador de macrófagos máis poderoso que se coñece. A exposición a IFN-G aumenta considerablemente a actividade antimicrobiana dos macrófagos e induce a secretar citoquinas como IL-1, 6, 8 e TNF-A; Ademais, aumenta a actividade de TH1 (11).
En relación á IL-4, a súa principal fonte de cela son os linfocitos CD4 + T da subpoblación TH2, así como as células de mastoides activadas e os basófilos. As súas accións biolóxicas inclúen a estimulación das reaccións mediadas por eosinófilos, células mastoides, estimulación das células B para a produción de IgE e a supresión das reaccións dependentes dos macrófagos. Os anticorpos IgE xogan un papel en defensa mediado por eosinófilos contra os helminths e as infeccións de artrópodos. IL-4 promove o desenvolvemento das células TH2 na defensa do servidor sendo o responsable da inducción e expansión desta subpoblación. Esta citocina antagoniza os efectos da activación dos macrófagos de IFN-G, deste xeito inhibe a resposta inmune mediada pola célula (1).
é coñecido relativamente pouco sobre os mecanismos patóxenos de moitas infeccións virales; Así, no presente traballo, que considerada a estudar, a distintas fases, a resposta inmune mediada por algunhas citocinas Th1, Th2 e pro-inflamatorias que executan a cuantificación dos mesmos, tanto no soro e homogenato de cerebro de ratos experimentalmente infectados co virus de EEV.
Material e métodos
Dous grupos de ratones de NMRI Albinos Masculino, 1-2 meses foron utilizados idade Cun rango de peso de 25-30 gramos, obtidos do bioterio do Instituto Venezolano de Investigación Científica (IVIC); que foron alimentados “ad libitum” nun ambiente de temperatura constante de 25 ° C. Cada animal no grupo experimental, foi infectado intraperitoneamente con 0,05 ml de suspensión viral que contén 10 doses letais 50 (10 DL50) do virus, suspendida en solución salina de Borado con 0,4%, estéril (13) álbumin bovina.
utilizouse a cepa de Guajira do virus EEV. O stock do virus foi preparado en células de vero (células renales de mono verde africano), a unha multiplicidade de infección de 1.0 UFP / CEL. O título da infecciosidade da tensión inoculada foi de 6,8×107 UFP / ml.
a 1, 3 e 5 días post-infección, o sangue completo foi extraído por Bunning do sinus orbital dos ratos (n = 5 / grupo × 5 ensaios) o que estaba centrifugado a 10.000 g x10 minutos para obter o soro de leite, dividido en alíc diss e almacenadas a -70 ° C para a determinación das citoquinas. Posteriormente, os animais foron sacrificados pola dislocación cervical para obter os seus cerebros, despois da perfusión. O cerebro homoxeneizado foi preparado en 20% de suspensións en 50 mm Tris-HCL Buffer PH 8, segundo o peso dela. Estas suspensións foron centrífugas a 10.000 g × 5 minutos a 4 ° C, dos cales supernatantes obtivéronse para a cuantificación das citoquinas.
A determinación das proteínas nos homogenenos cerebrais foi realizada polo método Lowry (14).
IL-1B, IL-4, IL-2, TNF-A e IFN-G
Os niveis de citocina foron determinados no soro cerebral e homoxeneizado cuantitativamente a través da sólida técnica de Elisa, alta sensibilidade e especificidade (Biosource International, Inc.) Expresando os resultados en PG / ML.
Análise estatística
Analizáronse os datos aplicando o programa estatístico gráfico 4.0 usando a análise de varianza ( ANOVA), seguido da proba post-proba de Bonferroni, considerando significativo para os valores de P < 0.05.
Resultados
observouse un aumento significativo no IL-1 B (P < 0,001) A 1, 3 ª e 5ª infección post-infección en homoxeneado cerebral de animais infectados con EEV (día 1 PC = 622 ± 83.03 PG / ML; Día 3 PI = 872.4 ± 96.8 PG / ML; 5th pi = 720 ± 90.2 pg / ml), cando se compara co resto dos grupos (fig. 1).
Fig. 1. As concentracións de IL-1B no soro cerebral e homoxeneado dos ratos infectados co virus de encefalite equina venezolano.
Os resultados obtidos para TNF-a concentracións arroxan un aumento significativo (P < 0.001) en soro (día 1 = 365 ± 66.91 pg / ml; día 3 pi = 392.7 ± 84,14 pg / ml; día 5 PI = 408.3 ± 76.95 pg / ml), e cerebro homoxeneizado (día 1, 960.52 ± 52.1 pg / ml; día 3º = 880 ± 49.3 Pg / ml; día 5º PI = 1334.9 ± 60.1 PG / ML), no grupo de ratos infectados en todos os períodos PI (Fig. 2), observando diferenzas entre a resposta local e sistémica.
Fig. 2. As concentracións de TNF-A en soro cerebral e homoxeneado dos ratos infectados co virus de encefalite equina venezolano.
concentracións de IFN-G en ratones infectados co virus EEV , tanto en soro (día 1, 2930,0 ± 212,6 pg / ml; día 3 pi = 1931.0 ± 233.2 pg / ml; día 5 pi = 2422.0 ± 347.9 Pg / ml) Como no cerebro homoxeneado (día 1 = 2924.0 ± 190.9 pg / ml; día 3º = 2050.0 ± 320.2 PG / ML; día 5º PI = 2706.0 ± 496.5 PG / ML) mostrou un aumento significativo (P < 0.001) cando se compara cos seus respectivos controis. Esta diferenza mantense en todos os períodos estudados, evidando que non había ningunha diferenza na produción local desta citocina con respecto á concentración sistémica (fig. 3).
Fig. 3. As concentracións de interferón-g no soro cerebral e homoxeneado dos ratos infectados co virus de encefalite equina venezolano.
en relación con IL-2, observáronse diferenzas (p < 0.05) Ao comparar o grupo homoxeneado de cerebro animal non infectado con respecto a un soro animal infectado e non infectado co virus EEV a 1, 3 e 5 días PI (1º día PI = 80.70 ± 15.54 pg / ml; 3º día PI = 57,954 ± 10.89 Pg / ml; 5º día PI = 54,33 ± 6,88 PG / ML). Do mesmo xeito, observáronse significativas diferenzas (P < 0,05) de cerebro homoxeneizado de animais infectados con EEV (1º Día PI = 52.43 ± 11.46 PG / ML; 3ª Día PI = 73.03 ± 28.86 PG / ml; 5º día PI = 57,66 ± 26.36 Pg / ml) En relación ao soro non infectado e soro de animais infectados con EEV en todos os períodos estudados (Fig. 4).
Fig. 4. As concentracións de IL-2 en soro e cerebro homoxeneado dos ratos infectados co virus de encefalite equina venezolano.
IL-4 non mostrou diferenzas estadísticamente significativas durante os días Estudado (fig.5).
Fig. 5.Soro e concentracións cerebrais homogenizadas de IL-4 en ratones infectados co virus de encefalite equina venezolano.
Discusión
Os resultados da investigación actual mostran que a infección por virus EEV desencadea un proceso inflamatorio no SNC de ratos infectados con este axente viral caracterizado por unha maior produción de citoquinas proinflamatorias como IL-1B e TNF -A, tanto en serum como cerebro homoxeneizado. Así como a crecente síntese de IFN-G tamén se demostrou asociada a esta infección, atopándoo consistente co que se informa por Greeral et al. (15) En ratones infectados co virus EEV, no que observaron que a expresión xenética desta citocina, aumenta en relación ao seu control.
Aínda que os arbovirus son a causa máis común de encefalite, o papel exacto do BHE é escasamente coñecido; Non obstante, o aumento da permeabilidade aparece como un compoñente vital da patoloxía encefalítica viral (16)
eventos fisiopatolóxicos que ocorren coa ruptura do BHE, probablemente son comúns moitas formas de encefalite viral. Isto suxire que os cambios similares poden ocorrer nos seres humanos infectados con virus de encefalite de Flavivirus e familias de Togavirus, como o virus do Nilo Occidental ou o virus EEV (16).
Na última década, Paul et al. (17), referiron a alta regulación natural da resposta inmune no SNC como “privilexio inmune”, que se refire a un control activo da resposta inmune no cerebro. No contexto do parénquima cerebral, as células presentador de antíxenos; Así como outras células de Glia e neuronas por si mesmos, modulan as respostas das células T, orientadas cara a unha función neuroprotectora e en menor medida para unha función destrutiva. Ademais, considéranse neuronas que posúen as súas propias estratexias para limitar a replicación e difusión dos virus citopáticos. Estas estratexias favorecen a eliminación non citolítica de virus ou promoven o establecemento dunha infección non citolítica persistente. IFN-G é considerado como un importante contribuínte á eliminación de xeito non citolítico, aínda que aínda é necesario determinar como actos (17). Hausmann et al. (18), tamén se mostraron, en modelos experimentais, que IFN-G desempeña un papel importante na forza do servidor contra as infeccións de CNS producidas polo virus cerebral. Ademais, suxiren que IFN-G podería funcionar como un factor neuroprotector que probablemente limitaría a perda de neuronas no transcurso da resposta inmune antiviral no cerebro.
concentracións de alto e sostido de IFN-G no soro cerebral e homoxeneado observado no presente estudo suxiren a preservación da integridade neuronal dos modelos mutrados infectados co virus de EEV, Inhibindo a difusión do virus no SNC por eliminación ou depuración e apoio a hipótese de que IFN-G desempeña un papel crítico na protección contra esta infección.
en relación a isto, Parra et al. (19) demostrou o papel potencial de IFN-G como mediador para controlar a replicación viral nas oligodendroglias de secreción de ratones deficientes da devandita citoquina e infectada con virus de hepatite, Strain JHM (JHMV). Estes ratos exhibiron unha maior sintomatoloxía clínica e mortalidade asociada á persistencia do virus, demostrando a incapacidade de controlar a replicación viral.
Outros autores estudaron o papel de IFN-G, como demostrado por Rodríguez et al. (20). ) e infectado intracerebrely co virus Theiler de encefalite cara. IFN-G – / – Os ratos desenvolven persistencia viral nas células gliales da materia branca e exhiben a desmielinización asociada á medula espiñal, que causou a morte e as deficiencias neurolóxicas graves a 16 días de infección cando se compara cos controis, evidando que o IFN -G exerce a un Efecto neuroprotector.
do mesmo xeito, a produción de TNF-A foi asociada a efectos beneficiosos e nocivos.En relación a isto, algúns autores foron informados como beneficiosos porque o paso de TNF-to Séum a través da barreira da medula espinal, despois dun insulto na Misma, permite un perfil de citocina óptima, específico do tempo e rexión, bloqueando Efectos periódicos, ao reforzar os efectos beneficiosos, o que podería facilitar o seu restablecemento funcional (21).
Con todo, para outros autores, podería ser prexudicial segundo o descrito por Schoneeboom et al. (22), que obtivo altos niveis de TNF-a en cultivos de astrocitos infectados co virus EEV. Noutro estudo, realizado por estes investigadores (23), un aumento na produción de múltiples xenes proinflamatorios entre eles foi evidenciado, polo que suxiren que a resposta inflamatoria inducida por ela, podería contribuír á neurodegeneración en infección por EEV.
No presente estudo, observouse unha elevación nas concentracións de soro de TNF-A, que aumentou a medida que pasaron os días post-infección; No cerebro homoxeneizado estas concentracións foron aínda maiores, o que indicaría un dano potencialmente maior no SNC probablemente causando danos neurolóxicos por citotoxicidade celular, alteración en permeabilidade vascular e, en consecuencia, unha elevación na taxa de mortalidade dos ratones infectados.
IL-1B é unha citoquina proinflamatoria que actúa como mediador nunha gran cantidade de patoloxías SNC. É interesante notar que durante a infección experimental polo virus EEV, IL-1B é capaz de inducir a actividade antiviral a través da activación e mellora das células asasinas naturais (NK) (24). Neste estudo, o alto soro e a produción cerebral en ratones infectados polo virus EEV parecen responder á actividade antiviral desta citoquina. Algúns autores (25) informan no soro de ratos infectados co virus de Eev e tratados con melatonina (MLT), aumento de IL-1B e suxiren que desempeña un papel relevante na resolución da infección. Do mesmo xeito, Bonilla et al. (26) suxeriron que unha diminución do TNF-a niveis, cun aumento do IL-1B estimulado por MLT no cerebro dos ratos infectados con EEV virus, pode explicar entre outros aspectos, o aumento da supervivencia dos animais infectados tratados con MLT.
nos nosos resultados, é evidente que IL-4 non arroxou variacións significativas na súa concentración, polo que se suxire que a infección por virus EEV non estimula un inmune A resposta depende da norma TH2 a través da IL-4. Non obstante, é necesario considerar a posibilidade de que a replicación viral sexa aumentada durante este estudo, o suficiente para permitir que os mecanismos inmunes necesarios sexan activados para a expresión das ditas citoquinas. Doutra banda, en estudos posteriores, hai que avaliar outras citoquinas que pertencen a estes patróns para determinar se este virus é certamente capaz de inhibir a produción das citocinas que intervén na resposta TH2.
Os resultados obtidos no noso estudo, mostran que a infección causada polo virus EEV, activa a produción de IL-1B, IFN-G e TNF-A no O cerebro homoxenizado, posiblemente pola produción destas citoquinas no tecido cerebral, que probablemente contribúe a unha elevación sérica das devanditas citoquinas, o que suxire que poden estar involucradas na resposta inmune precoz ao virus EEV durante a infección primaria. Faise necesario, realice estudos posteriores que axudan a aclarar o aumento da produción de IL-1b e TNF-A e IFN-G, é o produto da produción local no SNC ou que a ruptura do BHE permite o paso de As citocinas mencionadas anteriormente e isto contribúe á patoxenesia da infección por EEV.
grazas
ao Consello de Desenvolvemento Científico e Humanístico da Universidade de Zulia (Condes Project No. CC-0141-05) eo Fondo Nacional de Ciencia, Tecnoloxía e Innovación (proxecto FONACIT Nº 1998003550), polo financiamento concedido.
Referencias
1. Abbas a, Lichtman AJ. Inmunoloxía celular e molecular, 5ª edición (EUA): Elsevier Science; 2003, P 266-270, 356.
2. Griffin D. Citokines no cerebro durante a infección viral: reloxos á demencia asociada ao VIH. J Clin Invest 1997; 100: 2948-2951.
3. Merkler D, Horvath e, Bruck W, Zinkernagel Rm. “Viral Déjà Vu” provoca a enfermidade inmune específica do órgano independente da reactividade a si mesmo. J Clin Invest 2006; 116: 1254-1263.
4. Fabris F, Sgarabotto D, Zanon E, Francavilla F, Zaggia F, Cadrobbi P, Girolami A. O efecto dun só curso de Alpha-2b- Interferon en pacientes con trombocitopenia inmunolóxica idiopática relacionada coa VIH e crónica. Autoinmunity 1993; 14: 175-179.
5. Agamanolis D. Infeccións do sistema nervioso. Neuropatoloxía. Dispoñible desde http://www.neuropathologyweb.org/chapter5/chapter5dViruses.html
6. Organización paramericana de la salud. Sistema de Información e Vigilancia Epidemiológica da Encefalitis Venezolana en La Región das Américas. Rev Panam Salud Pública 1999; 6 (2): 128-138.
7. Mathews J, Roehrig J. Specificity of the Murine T-Helper Cell Immune Response a varios AlphaVirus. J Gen Virol 1989; 70: 2877-2886.
8. Cupp e, Scherer W, Lok J, Brenner R, Dziem G, Ordoñez J. Estudos entomológicos a un encotroz Vee Vírus foco en Guatemala. AM J Trop Med Hyg 1986; 35: 851-859.
9. Homan E, Zuluaga F, Yuill T, Lorbacher H. Estudos sobre a transmisión de Vee Virus por un colombiano Simulidae (Diptera). AM J Trop Med HYG 1985; 34: 799-804.
10. Lukaszewski R, Brooks T. Pegylated Alpha Interpheron é un tratamento eficaz para virus virulento de encefalite equina equina e ten efectos profundos sobre a resposta do hóspede á infección. J Virol. 2000, 74: 5006-5015.
11. Stites D, TERR A, Praslow T. Inmunología BÁSICA Y CLÍNICA. 8Va Edición: El Manual Moderno S.A. de C.V; 1996, P 133-155.
12. Jones L, Bennett A, Moss S, Gould e, Phillpotts R. Cytotoxic T-Cell Actividade non é detectable en Venezuela Equina Encefalitis Ratos infectados por virus. Investigación de virus 2003; 91: 255-259.
13. Lennette E. Principios Xerais subxacentes Diagnóstico de laboratorio de infeccións virales e rickettsiales. En: Lennette E e Schmidt N. Procedementos de diagnóstico para infeccións virales e rickettsiales. Nova York: American Public Health Association, Inc.; 1969. P 1-65.
14. Sapan C, Lundblad R, Price N. Review. Técnicas de ensaio de proteínas colorimétricas. Biotechnol Appl Biochem 1999; 29: 1-14
15. Greir F, Davis B, Zhou X, Chen Sh, Finkelman F, Gause W. Cinética de expresión de citoquinas e regulación de protección Seguinte Infección con virus de Encefalite Equalite Venezuela Venezuela Molecularmente Clonado. Viroloxía 1997; 233: 302-312.
16. Olsen a, Morrey JD, Smee DF, Sidwell RW. Correlación entre a ruptura da barreira do sangue-cerebro e o resultado da enfermidade da encefalite viral en ratones. Investigación antiviral 2007; Volumen, non..104-112.
17. Paul S, Ricour C, Sommereyns C, Sorgeloos F, Michiels T. Tipo I Interferon Response no sistema nervioso central. Bioquímia 2007; 89: 770-778.
18. Hausmann J, Pagentecher A, Baur K, Richter K, Rziha HJ, Staeheli P. CD8 T As células T requiren Gamma Interferon para limpar o virus da enfermidade de Borra do cerebro e prevén danos neuronais mediados polo sistema inmune. J Virol 2005; 79: 13509-13518.
19. Parra B, Hinton D, Martin N, Bergmann C, Lin M, Yang C, Stohlman S. IFN-G é necesario para a autorización viral do nervioso central Oligodendroglia do sistema. J Inmmunol 1999; 162: 1641-1647.
20. Rodríguez M, Zoecklein L, Howe C, Pavelko K, Gamez J, Nakane S, Papke L. Gamma Interferon é crítico para a autorización e protección viral neuronal en Unha cepa de rato susceptible tras a infección do virus de Encefalomielite Incefalomielitis de Theilomielitis temporais intracranial. J Virol 2003; 77: 12252-12265.
21. Pan W, Zhang L, Liao J, CSERNUS B, KASTIN A. ARMILICIO SELECTIVO EN TNFA PERMATECA A través da barreira da medula espiñal de sangue despois da SCI. Diario de Neuroimmunoloxía 2003; 134: 11-117.
22. SCHONEBOOM B, FULTZ M, MILLER T, McKinney L, GREIRE F. Astrocitos como obxectivos para a infección por venezolano equina de encefalite. J Neurovirol 1999; 5: 342-354.
23. SchoneBoom B, Lee J, Greider F. Early Expresión de IFN-Alpha / Beta e Inos no cerebro dos ratos Venezuela Equina Encefalite infectado por virus. J Interferon Cytokine Res 2000; 20: 205-215.
24. Huprikar J, Dal Canto MC, Rabinowitz SG. Protección contra a infección por virus venezuela venezolana letal (Vee) por supernatante sen células obtidas a partir de células de bazo inmunes. J Neurol SCI 1990; 97: 143-153.
25. Valero N, Bonilla E, Pons H, Chacín-Bonilla L, Añez F, Espina LM, Medina-Leendertz S, García-Tamayo J. Melatonin inducir Cambios en citoquinas séricas en ratones infectados co virus de encefalomielite equina venezolano. Trans R SOC TROP MED HYG 2002; 96: 348-351.
26.Bonilla E Valero N , Chacin Bonilla -G , H Pons , Larreal Y, Medina S, Espina L. melatonina aumenta a interleucina -1B e diminúe Factor de Necrosis Tumoral alfa no cerebro dos ratos infectados co virus da Encefalomielite equina venezolana . Neurochem res 2003; 28: 687-692.