Évaluation de trois substrats employés dans le test d’immunofluorescence indirect qui mesure des anticorps antimitocondriaux pour le diagnostic de la cirrhose biliaire primaire

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Évaluation de trois substrats employés dans l’immunofluorescence indirecte Test mesurant des anticorps antimitocondriaux pour le diagnostic de la cirrhose biliaire primaire

Poma Huanca, Patricia1 Sosa Tordya, Luis Fernando1
correspondance: Patricia Poma
Av. Saavedra 2224 (bâtiment Selaadis, étage 4). Téléphone: 2612445
[email protected]
1 Institut de service des laboratoires de diagnostic et de la recherche dans la santé (Selaadis) -FCFB-UMSA

Résumé

Primaire La cirrhose biliaire (CBP) est une maladie hépatique inflammatoire chronique de l’étiologie inconnue caractérisée par la destruction de canaux de bile intrahépatique qui déclenche une cirrhose hépatique. Dans la présente étude, trois substrats couramment utilisés ont été évalués pour détecter des anticorps antimitocondriaux (AMA) par une immunofluorescence indirecte (IFI) pour le diagnostic du CBP. Les substrats évalués étaient: la coupe histologique (rein de souris), les cellules HEP-2 (cellules épithéliales dérivées du carcinome laryngéal humain) et des cellules BHK-21 (fibroblastes de reins de hamster doré de Syrie) comparées aux résultats du test de confirmation commercial que Mesures anti-antigènes anti-antigènes anti-mitochondriaux (ELISA, Trinity Biotech).

25 SERA a été sélectionné avec des résultats positifs pour ELISA (Index > 1,10ui / ml ). Les contrôles négatifs étaient des sérums de patients qui n’avaient pas d’antécédents de maladie du foie et ont présenté des résultats négatifs pour AMA (index < à 0,90 ui / ml).

Parmi les trois substrats évalués, la ligne cellulaire BHK-21 basée sur un utilité limitée, avec des valeurs d’efficacité de 56%, une sensibilité de 48%, une spécificité de 64% et un taux de concordance de Kappa de 0,12 (faible) par rapport aux résultats de la norme de test d’or (ELISA-AMA). Pour le substrat HEP-2, une concordance modérée a été trouvée (kappa = 0,6) contre l’or standard, une spécificité a été obtenue = 100%, sensibilité = 60% et 80% d’efficacité des coupes de la souris histologique ont montré une sensibilité, une spécificité et une efficacité de 92%; Ils ont également montré des résultats avec une plus grande conformité avec la méthode ELISA (Kappa = 0,84). Parmi les trois méthodes d’immunofluorescence évaluées, il a été déterminé que celui qui utilise des coupes de la souris histologique est le plus efficace et il pourrait donc s’agir d’un outil utile en tant que méthode de tamis dans le diagnostic de CBP.

Mots-clés

Cirrhose biliaire primaire (CBP), anticorps antimitocondriaux (AMA), immunofluorescence indirecte (IFI).

Résumé

Cirrhose biliaire primaire (PBC) est un inflammatoire chronique Maladie du foie d’étiologie inconnue caractérisée par la destruction des canaux de bile intrahépatique qui déclenchent la cirrhose du foie. Dans la présente étude, nous avons évalué trois substrats couramment utilisés pour les anticorps mitochondriaux (AMA) par immunofluorescence indirecte (IIF) pour le diagnostic de PBC. Les substrats ont été évalués: histologique (rein de souris), cellules HEP-2 (cellules épithéliales dérivées du carcinome humanlyngéal) et BHK-21 (hamster les fibroblastes de reins de hamster dorées syriennes) qui ont été partagent avec les angènes commerciaux de test de confirmation (enzyme immunassay) Anticorps mitochondriaux M2 mesurés (Elisa, Trinity Biotech).

Nous avons sélectionné 25 SERA positive pour AMA par ELISA (Index > 1.10 UI / ML). Contrôles négatifs Sera provenait de Patatifs qui n’avaient pas d’antécédents de la maladie du foie et n’avaient des résultats négatifs pour AMA (Index < 0,90 IU / ml).

des trois substrats Testé, la lignée cellulaire basée sur BHK -21 disposait d’une utilité limitée, d’une valeur d’efficacité de 56%, de sensibilité de 48%, de spécificité de 64% et d’indice de concordance de Kappa de 0,12 (faible) Meade sur les résultats de l’or standard Test (ELISA -AMA). Pour HEP-2, une convention modérée (Kappa = 0,6) par rapport à la norme Gold, nous avons obtenu 100% de spécificité, sensibilité = 60% et 80% d’efficacité. Le rein de la souris histologique a montré une sensibilité, une spécificité et une efficacité de 92%, les résultats ont également montré un meilleur accord avec la méthode ELISA (Kappa = 0,84). Parmi les trois méthodes d’immunofluorescence évaluées, il a été déterminé que le rein de la souris histologique est le substrat le plus efficace et pourrait donc être utile comme un test de dépistage de diagnostic de CBP.

mots clés

primaire Cirrhose biliaire (PBC), anticorps anti-mitochondriaux (AMA), immunofluorescence indirecte (IIF).

Introduction

Le CBP ainsi que Ahrensy Payne en 1950, est une maladie hépatique progressivement chronique, caractérisée par une inflammation et une destruction des conduits de bile de bile interlobulaires et septaux médiatisés en lymphocytes qui se termine dans une Insuffisance hépatique. Il est supposé que c’est une maladie auto-immune, car elle est couramment associée à l’acidose tubulaire rénale, au vitiligo, à la thyroïdite de Hashimoto, au syndrome de Sjôgren, au phénomène de Raynaud, au syndrome de Crest, à la polyarthrite rhumatoïde, au lupus de lupus systémique et à la carence dans les suppresseurs de la fonction de lymphocyte (Zumueta & NavarreRe, 2008).

Ses principales manifestations cliniques sont la fatigue, la prurite, la jaunisse, la présence de xanthomes, des xantelasmas et des conséquences de l’absorption de l’intestinale, telles que une carence en vitamines et ostéoporose (CBP1). Le CBP affecte les femmes de plus de 30 à 60 ans, la relation d’implication de l’homme féminin est de 9 à 1. Aussi, il a été déterminé qu’il existe une association génétique avec HLA-DR8. (Idrovo, 2007).

Un marqueur sérologique caractéristique de la maladie est la présence d’AMA, la cible antigénique étant la protéine m2 de la membrane interne de la mitochondria (composante E2 du pyruvate déshydrogénase), d’autres Les protéines antigéniques mitochondriales telles que M4, M8 et M9 sont impliquées dans moins de proportion. Les AMA sont présents chez 90% des patients atteints de CBP et dans 30% des cas peuvent être accompagnés d’un motif fluorescent cytoplasmique et / ou d’un motif périphérique dans le test d’anticorps antinucléaire. (Bruguera & ichiyanagui, 2008). Il les aime sur une plus grande fréquence, peut également être trouvé dans la maladie du foie induite par la drogue, la syphilis, la tuberculose et d’autres maladies auto-immunes hépatiques. (O’Brien, Jordanie, Guindi, Hans & Dienes, 2009).

Le diagnostic sérologique du CBP est basé sur IFI et ELISA. L’IFI utilise des coupes histologiques de substrat de l’estomac ou du rat du foie, du rein ou de la souris et la lignée cellulaire HEP-2. Tests ELISA Utilisez comme substrat d’antigène du complexe pyruvate déshydrogénase obtenu à partir de bovin ou de coeur porcin (Dahnrich, paires, llorenq cavalerie, Wolfgang & probst, 2009).

Une caractéristique avantageuse du test IFI est qu’elle permet d’évaluer simultanément plusieurs types de protéines antigéniques dans le même substrat (exemples: SP100, GP210, LB2, LKM1, LC1, SLA, M1 – M9) Qu’est-ce qui en fait un Test très sensible, d’autre part, le test ELISA utilise des antigènes purifiés pour un seul marqueur de laboratoire qui lui donne une caractéristique plus importante. Dans le test ELISA, un échantillon contenant des anticorps à haute affinité à faible concentration peut présenter la même densité optique qu’un échantillon avec des anticorps à faible affinité, mais avec une concentration élevée ne fournit donc pas d’informations quantitatives comme avec la technique IFI, dans laquelle il est possible de déterminer Par une série de dilution, le titre d’anticorps maximum présent dans l’échantillon d’un patient donné (courtois & palera, 2009).

entre 2008 et 2009, dans le Histocompatibilité et laboratoire immunogénétique de l’Institut Seladis, il a été observé qu’il y avait 162 demandes de détermination de l’AMA de 162, 49 ont donné réactif pour AMA. Pour faire un bon diagnostic et une bonne surveillance de ce type de maladie, des méthodes de diagnostic commerciales ou optimisées et une sensibilité élevée et une spécificité de diagnostic sont nécessaires. La connaissance de ces aspects provoque la garantie dans laquelle le diagnostic de laboratoire par une certaine méthode est efficace et fiable. Avant mentionné, trois substrats sont évalués dans les travaux actuels (coupes de rein de la souris histologique, cellules HEP-2 de la ligne et la lignée cellulaire BHK-21 du test IFI pour le diagnostic de CBP que MIDE aime afin de déterminer le substrat le plus sensible. , spécifique, efficace et qui a un meilleur accord avec le test ELISA que MIDE aime.

matériaux et méthodes

Population à l’étude

Les échantillons utilisés dans cette étude provenait de patients qui ont assisté à l’Institut de Seladis en avril 2008 à mai 2009. Les échantillons de panel de sérums positifs provenaient de patients atteints de diagnostic clinique de CBP avec une sérologie négative pour l’hépatite virale et ont donné des résultats d’ELISA (Trinity Biotech) pour une AMA positive (Indice d’échantillon > 1,10 ui / ml). Les échantillons du panneau de sérum négatif étaient des séra de patients apparemment en bonne santé sans historique de la maladie du foie (résultats de la transaminase, de la phosphatase alcaline et de la bilirubine normale, la sérologie du virus de l’hépatite négative et des résultats ELISA pour la maîtresse négative (index < 0.90 ui / ml).Chacun des panneaux sériques a été constitué de 25 échantillons. Tous les patients qui utilisaient la Sera pour construire les panneaux de sérums positifs et négatifs ont donné leur consentement à faire l’échantillon utilisé dans la présente étude.

analyse des données

toutes les données du présent Des études ont été réalisées à l’aide de la base de données Excel 2007, les indicateurs statistiques ont été utilisés pour des validations telles que l’indice Kappa et le test de Mac Nemar (López de Ullibarri & CURA, 2008) .

Préparation des empreintes

Imprimés avec le substrat de cellule BHK-21

Toute cette procédure a été réalisée dans la hotte à débit laminaire (Gelaire) et travaillé avec de nouveaux et matériau stérile.

une aliquote de cellules stockée dans de l’azote liquide et il a été transféré sur un tube de 15 ml de Falcon et 3 ml de RPMI 1640 ont été ajoutés, puis il a été centrifugé à 2500 tr / min pendant 5 min, cette fois-ci a été éliminé par le surnageant et le pellet a été remis en suspension sur 1 ml de RPMI 1640 s Happé (10% de lactobne foetal Bobino (SFB) complétée, des antibiotiques (gentamicine et streptomycine), puis transférés dans une boîte de culture cellulaire de 25 cm2 et incubée pendant une semaine à 37 ° C, 5% en C02 et 90% d’humidité par rapport à l’humidité.

Une fois que la plaque de confluence était enfermée pendant 10 min à 37 ° C pour toutes les cellules adhérées à la base de la boîte de culture, le temps de cellules décolle de 15 ml de tube Falcon a été placé et centrifugé à 1500 tr / min. pendant 5 min. Le surnageant a été retiré, la pellette a été remise en suspension dans 1 ml de RPMI1640 complétée et la concentration de cellules a été ajustée à 2,5×106 cellules / ml. Dans des diapositives à 12 puits (Biomédical MP, États-Unis), des empreintes ont été préparées en plaçant 8 ul des cellules ajustées à chaque puits. Les empreintes ont été centrifugées à 1000 tr / min pendant 3 min et les empreintes d’empreintes ont été enveloppées d’un paraphilm (3M), car la conservation d’entre elles a été transportée à 4 ° C pendant 30 min, puis préservée à -20 ° C jusqu’à l’utilisation.

Imprimés avec le substrat Histologique Souris Coupes de rein

Les reins de 25 souris (albinos suisses) de 28 semaines ont été extraites avec un poids moyen de 20 g +/- 2 g, qu’ils ont été donnés par le bioterio de la faculté des sciences pharmaceutiques et de la biochimie. Les reins ont été lavés avec un tampon salin de phosphates (PBS) constitué de phosphate de sodium 112,5 mmol / L, de phosphate de potassium 30mmol / L, de chlorure de sodium 1,15 mol / l, azeu de sodium 0,95 g / l pH 7.5 Ensuite, les reins ont été placés dans une boîte de Pétri contenant de la carboxyméthylcellulose de sodium (Sigma Aldrich) et se gèlaient à -20 ° C jusqu’au moment d’utilisation. Pour effectuer les coupes de cristaux, des tacos ont été préparés avec les reins emballés en carboxyméthylcellulose de carboxyméthyle à 4%. Les coupes ont été effectuées pour geler à l’aide d’un cristatique (Leyca) à -27 ° C, quatre coupes de rein ont été placées pour chaque feuille de diapositive. Les coupes fabriquées ont eu un diamètre moyen de 5 mm et une épaisseur de 5 mm.

Préparation du conjugué fluorescent

pour déterminer le titre optimal du conjugué fluorescent (IgG anti-gammaglobuline et IgM marqués avec la fluorescéine ticoocyanate) dilutions (1/100, 1/150, 1/200 et 1/300) ont été préparées avec DIL | U.Ye du conjugué (50 ul d’Evans bleu 0,4% dans 3,5 ml de PBS).

titrage du conjugué fluorescent pour « IFI qui utilise comme une coupe histologique de substrat de cellules de la souris et de la ligne BHK-21.

pour le titrage du conjugué fluorescent a été utilisé positif et négatif Contrôles pour l’amour de la maison commerciale Organtec, Allemagne.

Les empreintes d’impression avec l’acétone PA (-20 ° C) ont été fixées pendant 8 min, hydratées de 10 minutes dans un pot koplin contenant du PBS (10x) pH 7.2 . Les dilutions (1 / 10.1 / 20 et 1/40) de la part de contrôle positif et négatif ont été effectuées. Ensuite, 40 ul de dilutions de sera ont été semées 30 minutes ont été incubées à la température ambiante (T ° A) et dans une chambre humide pour éviter le séchage des coupes histologiques ou des cellules fixées. Les empreintes ont été lavées par 10 min de PBS et une agitation continue. Les empreintes ont été séchées avec du papier absorbant et ont été placées à nouveau dans une chambre humide. 25 UL a été placé de dilutions à évaluer à partir du conjugué fluorescent (1 / 100,1 / 150, 1/200 et 1/300). Il a été incubé dans l’obscurité pendant 30 min à ° A. Après cette heure, le processus de lavage et de séchage décrit ci-dessus a été effectué. La solution de montage (12% de mowiol, glycérol, 30% de glycérol, TRIS 20 mmol / L, une azée de sodium de 0,95 g / L) a été ajoutée et une couverture a été placée sur chaque diapositive pour éviter le séchage des empreintes. Enfin, les plaques de microscope UV avec augmentation 40x ont été lues.

immunofluorescence indirecte (IFI)

Le test IFI avec les cellules HEP-2, a été effectué selon les instructions du fabricant du kit. Commercial (le site de liaison, au Royaume-Uni).Brièvement: les dilutions de 1/40 et 80 et 1/160 ont été effectuées sur les panneaux de sérums de Sera et de contrôle.

30 minutes ont été incubés à T ° A. Les plaques correspondantes ont été lavées pendant 10 min et séchées, conjuguées et incubées dans les ténèbres pendant 30 minutes, puis les empreintes ont été lavées et séchées à nouveau et les moyens de montage ont été placés. Plaques de microscope UV avec augmentation 40x.

pour la réalisation des tests IFI avec des cellules BHK-21 et des coupes histologiques a été suivie du protocole décrit dans le titrage conjugué, à l’exception qui a été utilisée le titre optimal du conjugué pour chaque substrat. Avec tous les substrats évalués, un contrôle positif et négatif (Orgentec) a été utilisé simultanément. Le contrôle positif de l’AMA devrait produire un motif cytoplasmique de couleur pomme verte avec intensité (++) de 1/40 dilution. Le contrôle négatif ne doit pas émettre une fluorescence à 1/10 dilution dans des cellules rénales ou 1/40 dans des lignées cellulaires. (Site de liaison, 2011).

Pour interprétation des résultats du test IFI, des échantillons négatifs ont été pris en compte lorsqu’il y avait une absence de fluorescence de pomme verte dans le cytoplasme. Un échantillon a été considéré comme positif si la coloration du cytoplasme était supérieure au contrôle négatif. (Fig. 1).

Aux fins de l’étude, le kit ELISA qui mesure des anticorps contre la marque M2 mitochondrial La marque biotech antigène a été considérée comme une norme d’or, qui signale une sensibilité de 91% et la spécificité de 100% (JONES & METCALF, 2008).

résultats

Lorsque l’analyse précédente des patients atteints du service de laboratoire a été déterminée que Parmi tous les tests demandés pour la détection de maladies auto-immunes lors de deux arrangements (2008 et 2009), la détermination de l’AMA (ELISA) a été demandée de 7% des cas, avec 69 demandes de 2008 et 93 en 2009, ayant un total de 162 cas présomptifs de cirrhose biliaire primaire dans les deux arrangements. Sur les 162 échantillons 49 ont été réactifs pour AMA. Il a été observé que la plupart des patients diagnostiqués comme des réactifs d’amour étaient des femmes (80%). Sera de 20 femmes et 5 hommes ont été envisagés dans le panneau Sera positif. L’âge moyen des patients dont les échantillons ont été inclus dans la présente étude était de 46 ans, avec des valeurs extrêmes de 22 et 77 ans.

dilutions ont été effectuées: 1/10, 1/20 et 1/40 des contrôles positifs et négatifs. Le titre optimal a été évalué auquel le conjugué pourrait être utilisé. Les dilutions ont été évaluées 1/100, 1/150, 1/200 et 1/300. Cette expérience a été effectuée en triplicate et il a été observé que la dilution 1/150 a été obtenue, véritable résultat positif (VP) et véritables résultats négatifs (VN) de Sera de contrôle commercial,

évaluation des résultats du test de diagnostic dans les trois substrats évalués

En évaluant la sensibilité, la spécificité, les valeurs prédictives positives et négatives et l’efficacité des trois substrats évalués, il a été observé que la ligne de cellule BHK-21 est le substrat le moins efficace, le substrat de cellule HEP-2 a été observé. moins de spécificité, une sensibilité inférieure et donc moins d’efficacité que les coupes histologiques du substrat. Les résultats montrent clairement que les coupes histologiques du substrat sont la méthode la plus efficace de diagnostic par IFI pour CBP.

Détermination de Concordances de différents substrats utilisés pour AMA IFI Résultats trouvés par ELISA

Les tests de concordance utilisés étaient les suivants: Index Kappa et MC Test Nemar pour deux tests connexes (appariés). Les résultats des différents tests de concordance (P < 0.05) pour les différents substrats par rapport à la méthode ELISA qui mesure des anticorps antigènes anti-m2 m2 (norme d’or). La valeur critique attendue de l’essai MC Nemar était de 3,84 (p < 0,05).

Les coupes histologiques ont montré un indice Kappa de 0, 84 que selon la balance de l’indice correspond à une très bonne concordance avec les résultats obtenus par la méthode ELISA. Le test MC Nemar a présenté le résultat de 0,25.

La cellule LineBHK-21 présentait un indice de kappa de 0,12 (concordance déficiente) avec les résultats obtenus par la méthode ELISA. Le test de douche MC Nemar a montré une valeur de 1.13.

La ligne de cellule HEP-2 présentait un indice Kappa de 0,6 (concordance modérée) par rapport aux résultats obtenus par la méthode ELISA. La valeur de Mc Nemar était 12.1.

Comme les coupes histologiques ont été la méthode IFI plus efficace pour le diagnostic de CBP Par IFI, les résultats ont été comparés à une méthode commerciale IFI pour AMA.L’indice de Kappa a été trouvé était de 0,66 (très bonne concordance). Le test MC Nemar a présenté une valeur de 1,33.

Discussion

Lorsque vous analysez des cas positifs pour CBP dans notre laboratoire, nous déterminons que 80% des cas affectent les femmes, étant la relation entre les femmes / Homme 4: 1 Ces résultats sont similaires à ceux rapportés par: Abarca, Peña Herrera & Garpes (2006) où ils déterminent l’étiologie, la survie, les complications et la mortalité dans la cirrhose hépatique en matière d’efficacité de l’Équateur Ratio femme / homme de 2,4: 1; Aussi CEDEÑO & Medina (2008) Déterminez que 90% des femmes sont touchées par cette maladie. Sur les 25 échantillons positifs utilisés dans cette étude 20 proviennent de femmes. Valera, Smok & Poniachik (2007) Dans l’étude réalisée à l’hôpital clinique de l’Université du Chili et à la clinique Las Condes de Chile chez 115 patients, a montré que 110 étaient des femmes Ce qui était équivalent à 96% en trouvant un ratio d’implication de la femme / homme de 9: 1, on sait que les facteurs hormonaux sont l’un des facteurs prédisposant des maladies auto-immunes. (Rojas, 2007, p.324).

Dans la présente étude, nous déterminons que l’âge auquel les cas de CBP sont présentés est de 45 ans. Dávalal, Román & Bustios (2007) dans une étude de l’hépatite auto-immune dans laquelle ils comprenaient le CBP plus leurs formes cliniques et leurs facteurs liés à la réponse au traitement au traitement d’une affectation d’une affectation de 48 à 59 ans, une éventuelle explication à ce phénomène est qu’à cet âge, le thymus a largement perdu sa capacité à détruire les lymphocytes T auto-réactituants par sélection négative, ce qui constitue un facteur prédisposant à la maladie auto-immune.

Un bon diagnostic clinique et un bon laboratoire pour cela et un autre type de maladies auto-immunes est essentiel, principalement en raison du caractère invalidateur chez le patient ou du fait qu’ils peuvent mettre en danger la vie du patient dans d’autres cas. Dans ce dernier aspect, Jones & METCALF (2008) a déterminé que les patients atteints de CBP dans la maladie de l’étape III / IVDE ont une mortalité plus élevée (43,6%) que la population normale. Par conséquent, dans le cas d’un diagnostic de laboratoire de CBP, un test d’efficacité plus élevé doit être disponible. Dans notre expérience, nous avons observé que l’utilisation de substrats si, les lignées cellulaires (BHK-21, HEP-2) ou les coupes de cristaux de tissus (hépatique ou rein de souris) peuvent être démontrées au niveau du cytoplasme cellulaire qui est directement liée au type immunologique des maladies hépatiques, Infections virales ou autres auto-immuns supplémentaires que j’ai Natures, etc. (Almeida et al., 2008).

des trois substrats évalués Nous déterminons que ceux basés sur des lignées cellulaires ont une utilité limitée, en particulier celles utilisées par la ligne cellulaire BHK-21 ayant une efficacité de 56% , Sensibilité de 48% et spécificité de 64%. Bien que ce substrat soit jugé bon pour déterminer les anticorps antinucléaires. (SOSA & Sánchez, 2007) n’est pas pour le diagnostic de CBP car il a une faible concordance avec le test d’or standard évalué (ELISA-AMA). Il n’y a pas de rapports sur la bibliographie sur la présence ou l’absence de ces antigènes mitochondriaux sur la chaîne cellulaire BHK-21.

Une constatation intéressante était de trouver cela avec la ligne cellulaire HEP-2 malgré une concordance modérée (selon l’indice de Kappa) Versus ELISA Test, il a montré une spécificité de 100%, il vaut la peine que si ce substrat a été utilisé, aucune fluorescence n’a été observée au niveau du cytoplasme cellulaire, on pourrait dire que le patient ne présente pas La maladie mais toujours, il est nécessaire d’utiliser un test plus efficace pour confirmer les informations susmentionnées. En ce qui concerne la sensibilité de ce substrat, aucune différence significative n’est observée avec des cellules BHK-21.

Les coupes cryostatiques du rein de la souris ont été les plus efficaces avec une sensibilité et une spécificité de 92% respectivement de 92% respectivement. Ils ont également montré des résultats plus larges avec la méthode ELISA-AMA (Kappa 0.84). En général, il est connu que la sensibilité et la spécificité des méthodes IFI pour AMA sont de 95% (Valera, Smok & Ponia-chik, 2007). Ces résultats nous montrent que la méthode IFI optimisée dans l’histocompatibilité et le laboratoire immunogénétique de l’Institut Seladis est aussi bonne que des méthodes similaires proposées par différentes maisons commerciales.Bien qu’il existe des différences au niveau de sensibilité et la spécificité avec la méthode ELISA (méthode définitive de diagnostic du CBP), le seul ou peut-être l’avantage le plus important de la méthode IFI par rapport à la méthode ELISA est qu’il n’est pas seulement limité à détecter la L’antigène mitochondrial M-2, mais peut donner des résultats positifs contre les antigènes M1 à M9. Orientation du médecin de cette manière du diagnostic de maladies hépatiques auto-immunes, de type I, II, III ou d’autres cas auto-immuns non foie et même des infections virales. (Meléndez & Dujarrique, 2008). Un autre avantage n’est pas moins important, c’est que la méthode optimisée rend le test aux patients plus accessibles, car le coût du réactif par test est BS. 13 contre BS. 45 du kit d’immunofluorescence et BS. 31.50 du kit d’ELISA La méthode optimisée montre également des inconvénients, la première est la consommation de temps (sacrifiez la souris, l’extraction et la conservation des ri-anones, les dilutions série des échantillons de contrôle, les lavages, la lecture dans le microscope de fluorescence). Pour l’expérience de ses propres, nous constatons qu’il est investi une heure à une heure et demie de plus en plus de traitement des échantillons par IFI que par ELISA. Il est également important de souligner que les professionnels sont nécessaires pour faire la lecture et l’interprétation des motifs fluorescents. Une autre constatation importante constatée était que différents modèles cytoplasmiques fluorescents pourraient être mis en évidence dans un certain substrat. Avec les résultats obtenus à partir de cette étude, il a été possible de déterminer celui des trois substrats évalués, les coupes de la souris histologique sont le substrat le plus efficace et c’est le substrat qui a une meilleure concordance avec les résultats du test ELISA pour le diagnostic de CBP. D’autre part, il a été déterminé qu’il existe une très bonne concordance avec les résultats IFI d’un kit commercial de caractéristiques similaires. Le test de diagnostic utilisé nous a permis de valider le test IFI qui utilise des coupes histologiques comme écran de test pour le diagnostic du CBP.

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