sistema immune A PEIXOS
FISH immune SYSTEM
Susana E. Olabuenaga *
* Membre de la carrera d’investigador de l’CONICET. Càtedra de Ictiopatologia, Centre Regional Universitari Bariloche, Universitat Nacional d’el Comahue, Quintral 1250, Unitat postal Univiversidad Nacional d’el Comahue, 8400 Bariloche, Rio Negre. Correu electrònic: [email protected]
La funció essencial de sistema immune a tots els vertebrats és la defensa contra les infeccions. Els peixos presenten una resposta immunològica ben desenvolupada i integrada, i en el cas dels Teleósteos, amb algunes similituds pel que fa als vertebrats superiors. Pot ser dividit en dos tipus: innat o inespecífic i adquirit o específic, tots dos compostos per una part humoral i cel·lular. La seva importància pot variar amb l’edat de l’peix i està influenciada per diferents factors. S’esmenten aquí les seves components més rellevants. En els peixos hi ha dos factors que influencien notòriament la resposta immune i la producció d’anticossos, que són els canvis estacionals i la temperatura. Es descriuen els principals òrgans limfoides, l’estafa, el ronyó i la melsa, així com el procés ontogènic limfocitari. Si bé s’ha avançat molt en els últims anys, encara es necessiten estudis d’immunologia bàsica en les diferents espècies que ajudin a caracteritzar les poblacions efectores i els seus mecanismes d’acció.
Paraules clau: Antigen, anticòs, leucòcits, fagocitosi, linfoquinas, inflamació, immunoestimulants.
The defence against Infections is the essential function of the immune system of all vertebrates. Fish present an efficient and developed immunologic response and in the case of Teleosts, with some similarities to the higher vertebrates. It can be divided into two types: innate or non specific and adquired or specific, both with a humoral and cellular compartments. Their relative importance can change according to the age of fish and is always under the influence of different factors. The most relevant components are mentioned here. There are two factors in fishes which strongly influence the immune response and antibody production, seasonal changes and temperature. The main lymphoid organs are described here: the Thymus, the kidney and the spleen, as well as the lymphocyte ontogenic process. Some advances in knowledge were published during the last years, however it is still necessary to develop new studies in basic Immunology in different species to caracterize effector cell populations and their functions.
Keywords: Antigen, Antibody, Leukocytes, Phagocytosis, Lymphokines, Inflammation, Immunostimulants.
La funció essencial de el sistema immune en tots els vertebrats és la defensa contra les infeccions, aquest sistema permet la supervivència de l’individu i mantenir les seves funcions corporals en un mitjà que per naturalesa li és hostil. Els peixos són un grup àmpliament divergent representat aproximadament per 20.000 espècies que ocupen diferents hàbitats. Estudis filogenètics van indicar una divergència entre Protóstomos (anèl·lids, mol·luscs, artròpodes) i Deuteróstomos (equinoderms, tunicats, cordats) que ha tingut lloc al voltant de 500 a 600 milions d’anys enrere i és a partir d’aquest últim grup que s’han desenvolupat els peixos en diferents direccions (Jarvik 1980).
Dins la línia dels vertebrats es troben, en primer lloc, els Elasmobranquios (ratlles, taurons) que presenten immunoglobulines i molècules de l’complex major d’histocompatibilitat i després són seguits pels Teleósteos que a més presenten el sistema complement i la proteïna C reactiva (Marchalonis & Schluter 1994).
La resposta immune dels peixos en general està ben desenvolupada i integrada, i en els Teleósteos és on es troben moltes similituds funcionals amb la resposta observada en els vertebrats superiors; normalment funciona amb eficiència, encara que com qualsevol altre sistema fisiològic, el sistema immune d’un individu es veu afectat quan l’estat de salut és deficient. En termes d’una població, quan les condicions de l’mitjà són adverses, augmenten els riscos d’una infecció i es posa en perill la salut de tot el conjunt d’exemplars. Hi ha una sèrie de factors que influeixen el desenvolupament d’una bona resposta, i en algunes ocasions la deprimeixen significativament.Aquests es classifiquen en: factors intrínsecs o aquells inherents a l’peix com l’edat i l’estat sanitari, i els factors extrínsecs, com la temperatura, els canvis d’estació i els paràmetres abiòtics d’l’aigua. Dins dels factors extrínsecs hi ha una sèrie d’estímuls que actuen sobre un sistema biològic en forma negativa, i que originen després una reacció subseqüent d’ell mateix i que es coneix amb el nom d’estrès, el peix posseeix la capacitat de respondre a aquest, i involucra reaccions fisiològiques i de comportament, que l’ajuden a adaptar-se a una nova situació. En alguns casos, quan l’estrès es perllonga o es fa més sever, pot excedir la seva capacitat d’ajust, i es produeix un col·lapse de el sistema immune i també d’altres sistemes (Ellis 1981a). L’efecte supressiu de l’estrès està mediat per hormones, principalment corticosteroides (Jeney et al. 1992). El cortisol és el principal glucocorticoide que és produït (en l’escorça adrenal) en les cèl·lules interrenales de l’Pronefros en els peixos. La seva secreció és augmentada per l’hormona adrenocorticotrófica (ACTH) que és secretada al seu torn per la glàndula pituïtària i està sota un control positiu de l’factor d’alliberament de corticotrofina (CRF) de l’hipotàlem. La inhibició de el sistema clàssic de retroalimentació sobre la secreció de la CRF passa quan augmenta la concentració de cortisol a la sang. El cortisol és el més comú i biològicament actiu dels corticosteroides en peixos.
Bàsicament, la resposta immune és un mecanisme de defensa cel·lular i humoral induït per un agent estrany, que és l’antigen (Ag), i les cèl·lules responsables de el reconeixement inicial d’un Ag específic en vertebrats superiors pertanyen a les línies cel·lulars T i B. També són necessàries cèl·lules accessòries per al processament i presentació antigènica i mediadors fisiològics anomenats citocines per a la proliferació, interacció i regulació.
El sistema de defensa dels peixos, a l’igual que en els vertebrats superiors, pot ser dividit en dos tipus de mecanismes: Sistema de Defensa innat, natural o inespecífic i sistema immune adquirit o específic. El primer és el que posseeixen tots els éssers vius des del naixement, format per components cel·lulars i humorals, i el segon involucra la producció d’anticossos a través d’un reconeixement específic de l’antigen, i també participen elements cel·lulars. La importància relativa d’ambdós pot variar amb l’edat de l’peix i estan influenciats per diferents factors. En el cas dels Teleósteos, el sistema defensiu està compost de subpoblacions de leucòcits que inclouen els limfòcits B i T, els granulòcits, els trombòcits, els macròfags i les cèl·lules citotòxiques inespecífiques. Per comprendre les reaccions immunes de defensa desenvolupades pels peixos contra els diferents patògens, es requereix un ampli coneixement de la biologia dels limfòcits.
1. SISTEMA DE DEFENSA inespecífic
1a. FACTORS humorals SOLUBLES
L’epiteli intacte i la seva secreció, el mucus, formen la barrera de defensa primària entre el peix i el seu ambient. El mucus conté proteïnes i carbohidrats i té una funció protectora prevenint la colonització en la seva superfície, de paràsits, bacteris i fongs, a través d’una contínua pèrdua i reemplaçament (Ourth, 1980). El mucus, a més de la mucina, conté altres components secretorios, està compost per precipitinas inespecífiques, aglutinines, proteïna C-reactiva (CRP) i lisozima, les quals constitueixen una barrera de defensa química primària (Fletcher 1981). També, internament, el mucus entapissa les parets de l’tracte alimentari, que juntament amb pH extrems i enzims proteolítics, serveixen de defensa contra potencials patògens (Stoskopf 1993). Moltes d’aquestes funcions de reconeixement i de regulació són part de la resposta en la fase aguda d’una infecció i és potser la forma més antiga de reconeixement del que no propi i que s’ha conservat en la línia evolutiva. En els peixos poden representar un sistema de reconeixement primitiu, més que una acció efectora en la destrucció de l’patogen.
Després es troben els components de l’sèrum. Les proteïnes de fase aguda són molècules que apareixen per un període breu durant pics febrils o simplement augmenten la seva concentració durant aquest període en mamífers. Dins de les més importants s’inclouen la proteïna C reactiva (CRP) i la transferrina.
La CRP, representa un grup molt primitiu de molècules de reconeixement i estan involucrades en els mecanismes de defensa. En peixos, la seva concentració tendeix a ser uniforme i constant al llarg de tota la vida. S’ha demostrat que aglutina certs bacteris i també presenta especificitat per petites molècules orgàniques com la fosforilcolina (Volanakis et al. 1990).S’ha demostrat la seva interacció amb un nombre de molècules de el sistema immune, com el complement i els receptors Fc dels limfòcits. Té un pes molecular de 118.000 i una mobilitat electroforètica beta. Va ser detectada en peixos per citometria de flux en la superfície de l’25% dels limfòcits de sang perifèrica i en el 4% dels limfòcits de l’Pronefro (Edagawa et al. 1993). Diferents estudis suggereixen que aquí, en contrast al que passa en els mamífers, aquestes proteïnes són constituents normals de l’sèrum i la seva concentració pot estar augmentada després d’una infecció bacteriana. Es produeixen en resposta a l’estrès, manipulació, exposició antigènica, etc. Alguns han conclòs que podria servir com a indicador d’un estrès no determinat o de malalties que tenen lloc durant estadis primerencs de el cicle de vida de l’peix (Fletcher et al. 1977).
La transferrina és una glicoproteïna globular, tipus B1 que no té el grup hemo, però que pot unir-se a el ferro, s’ha trobat en el sèrum de la majoria dels vertebrats. Quan no està totalment saturada presenta propietats antimicrobianes i per tant juga un paper important en la patologia de moltes infeccions bacterianes, limitant la quantitat de ferro endogen disponible per als patògens invasors i per tant, la seva capacitat de reproducció (Buller et al. 1978) . En els peixos i també en altres espècies s’ha trobat que presenta un alt grau de polimorfisme genètic. A l’igual que en els homeoterms hi ha diferents genotips, s’han trobat 5 en l’salmó coho (salmó platejat) i 3 a la truita (O. mykiss) (Suzumoto et al. 1977; Winter et al. 1980). Van Muiswinkel et al. 1985 van demostrar que el tipus de transferrina és heretable. Els diferents fenotips semblen tenir un paper important en el desenvolupament de la resistència a certes malalties i s’ha demostrat que determinats grups mostren major predisposició a una malaltia determinada. L’explicació seria que alguns genotips tenen major afinitat pel ferro que altres.
També es troba com a proteïna de fase aguda l’a-antiproteasa que és un anàleg de la a2-macroglobulina dels mamífers, la qual neutralitza l’activitat proteolítica d’una exotoxina d’Aeromonas salmonicida en el sèrum normal de l’ truita arc de Sant Martí i pot estabilitzar els lisosomes de macròfags (Ellis 1981b).
La lisozima és un enzim mucolítica amb propietats antimicrobianes i ha estat detectada en el sèrum, el mucus i en altres teixits rics en leucòcits, com el ronyó, la melsa i l’intestí, tant en peixos d’aigua de mar com d’aigua dolça (Grinde et al. 1988; Lie et al. 1989). Té la capacitat de degradar mucopolisacàrids de la paret cel·lular de bacteris, particularment les Gram positives, causant la lisi (Ellis 1990). Es troba també en neutròfils, monòcits i en menor quantitat en macròfags. El pH òptim pot variar entre les diferents espècies en resposta a condicions ambientals (Ellis 1990; Murray & Fletcher 1976). En algunes espècies s’han informat variacions de l’nivell de lisozima segons els canvis estacionals o sexuals en les diferents espècies.
S’esmenten a continuació altres substàncies que poden participar en aquest sistema inespecífic de defensa segons Ingram (1980).
La quitinasa, és un enzim que desdobla la N-acetil-D-glucosamina o quitina per hidròlisi dels enllaços 1,4 glucosamina i que té un pes molecular d’aproximadament 30000. La seva activitat ha estat detectada en la melsa, el plasma, la limfa i els teixits linfomieloides, és possible que tingui una funció protectora actuant contra la quitina present en fongs i paràsits d’invertebrats.
Les citoquines són polipèptids o glicoproteïnes que actuen com a moduladors de el sistema immune i en moltes espècies de peixos a l’igual que en els vertebrats superiors ha estat informada l’existència de moltes d’elles com les interleuquines 1 i 2 (IL -1, IL-2), el interferó (IFN), el factor d’activació dels macròfags (MAF) (Verlurg-van-Kemenade et al. 1985; Secombes et al. 1996), la IL-3, la IL 6, el factor de necrosi tumoral alfa (TNF a) i el receptor soluble per a IL-2 en el sèrum d’animals infectats amb virus o paràsits (Ahne 1994).
Els IFNs constitueixen una sèrie de molècules importants com a agents antivirals (Dorson et al. 1975; Graham & Secombes 1990a), són glicoproteïnes produïdes per macròfags, limfòcits, fibroblasts i cèl·lules natural killer (NK) en resposta a una infecció viral, una estimulació immune o una varietat de estimuladors químics. Han estat identificats en moltes espècies de peixos. La seva producció, a l’igual que en mamífers, ha estat demostrada per estimulació tant in vivo com in vitro amb virus (De Serra et al. 1975; Dorson et al. 1992; Rogel-Gaillard et al. 1993) o amb activadors sintètics (Eaton et al. 1990; Tangelsen et al.1991) o amb mitògens (Graham et al. 1990b). La majoria dels estudis suggereixen que l’IFN és espècie específic però no virus específic (Gordon et al. 1981; Johnson et al. 1994). S’ha trobat IFN que s’assembla a l’tipus I dels vertebrats superiors o sigui a l’alfa i a l’beta i també a l’tipus II o gamma (Secombes 1991); en els últims anys s’han seqüenciat gens d’altres citocines en peixos, que inclouen el factor de transformació de l’creixement beta (TGF b), la IL-1 b, el factor de crecimento de fibroblasts (FGF) i algunes quimoquinas i per estudis de hibridació s’han trobat els gens de citoquines com l’IFN i l’eritropoetina (Secombes et al. 1999).
Aquests estudis representen un avenç important, confirmen les dades biològiques trobades inicialment i permetran ampliar les investigacions realitzades fins al moment, l’existència d’aquestes citoquines indicaria un origen molt d’hora en l’evolució i que a més aquest sistema de comunicació intercel·lular s’ha conservat al llarg de milions d’anys.
Les aglutinines són presents en el sèrum i actuen contra una varietat de microorganismes i glòbuls vermells heteròlegs. Com molts tipus de microorganismes comparteixen especificitats serològiques amb glòbuls vermells de vertebrats, poden ser “protectores”, aglutinant bacteris o virus i promovent la seva fagocitosi (Roberson 1990).
El sistema de l’complement (C) juga un paper important en la immunitat humoral i també en la cel·lular contra diferents patògens i en el procés inflamatori (Ingram 1990; Yano 1992). Està constituït per a l’almenys unes vint proteïnes plasmàtiques sintetitzades principalment com a precursors inactius (pro-enzims) que funcionen com enzims o com proteïnes que es van unint quan són activades per la introducció i / o presència de certes substàncies en el plasma de sang normal. Moltes d’aquestes proteïnes són sintetitzades al fetge i en l’epiteli intestinal, mentre que altres s’originen en els macròfags (Tyzard 1992). L’estimulació de sistema complement desencadena reaccions bioquímiques, que són acompanyades per la generació de nombrosos mediadors biològicament actius en la inflamació. Actuen seqüencialment en la lisi d’una cèl·lula blanc, participant en la mort i eliminació d’antígens cel·lulars, usualment bacteris i també en l’activació de moltes respostes inespecífiques de defensa associades amb la inflamació. Pot ser activat a través de dues vies, la clàssica o dependent d’anticòs i l’alternativa o de la properdina o independent d’anticòs. S’ha descrit la presència de sistema complement en el mucus de la pell, actuant així com a primera barrera de defensa, mitjançant l’activació d’alguna de les dues vies (Lambris 1993; Sakai 1992a). El sistema de l’C en mamífers consisteix en aproximadament 12 components, anomenats a partir d’el C1 a l’C9 i els factors B, D i la properdina i altres factors que regulen la seva activitat. L’activació de la via clàssica s’inicia per la interacció entre el component C1 i el complex antigen-anticòs i la de la via alterna a través del component C3 activat per diferents substàncies com lipopolisacàrids, zymosan i altres. Aquest sistema existeix en peixos teleostis, en forma comparable a què hi ha en mamífers. A la data s’ha demostrat la presència de les dues vies en diferents espècies, com la truita arc de Sant Martí (O. mykiss), la carpa (Cyprinus carpio), la tilàpia (Tilapia nilotica) i la bagra (peix gat americà) (Nonaka et a l’ . 1981; Matsuyama et al. 1988a, b; Lobb & Hayman 1989).
1b. MEDIAT PER CÈL·LULES
Quant a la part cel·lular inespecífica, es troben les cèl·lules NK o cèl·lules citotòxiques inespecífiques i les cèl·lules fagocítiques.
Les cèl·lules NK juguen un paper similar al dels vertebrats superiors, és a dir exerceixen una citotoxicitat inespecífica de diferents cèl·lules blanc sense un previ reconeixement. S’ha postulat que aquestes cèl·lules poden ser les progenitores en la línia evolutiva de les NK dels mamífers (Evans et al. 1984). En els peixos teleostis s’han trobat cèl·lules NK en el ronyó cefàlic o pronefros, la melsa, la sang perifèrica i l’estafa, i efectuen la lisi de cèl·lules blanc humanes, de ratolí i d’aquests mateixos peixos; s’ha descrit la seva presència en diferents espècies (Greenlee et al. 1991; Greus et al. 1985), la citólisis requereix el contacte cèl·lula a cèl·lula, són cèl·lules no adherents i resistents a la irradiació. Representen menys de l’1% dels leucòcits de sang perifèrica. En elasmobranquis la cèl·lula efectora seria un monòcit / macròfag i en els peixos ossis, cèl·lules limfoides agranulares (Moody et al. 1985).
Quant a les cèl·lules fagocítiques, primer es pot dir que la fagocitosi és un mecanisme cel·lular d’ingestió i digestió de material estrany particulat, i és probablement la reacció de defensa més àmpliament distribuïda tant en vertebrats com en invertebrats , i segon que en teleostis han estat descrites diferents cèl·lules amb capacitat fagocítica (Mac Arthur & Fletcher 1985; Finn 1970). Les més comunes en els peixos a l’igual que en els mamífers són els granulòcits i els fagòcits mononuclears o agranulocitos, dels quals aquests últims són els més importants. Dins d’aquests dos grups es troben al seu torn diferents categories: a) els granulòcits, inclouen els neutròfils, els eosinòfils i els basòfils i b) els monòcits-macrógagos (Ellis 1977; Rowley et al. 1988). a) granulòcits: la majoria d’aquests són mòbils i fagocíticamente actius, el seu citoplasma conté grànuls lisosomals, vacúols, mitocondris i altres orgànuls. Es troben en diferents proporcions en la sang, depenent de les espècies, però les més comunes són els neutròfils i els eosinòfils, mentre que els basòfils no estan presents en la majoria de les espècies. Els neutròfils, constitueixen 4.5 a 18% dels leucòcits de la sang, amb un rang ampli entre les diferents espècies. Se’ls truca també polimorfonuclears o leucòcits específics. El citoplasma conté nombrosos grànuls, són pobrament fagocíticos, en el sentit que ingereixen poc material estrany, però posseeixen la majoria dels enzims presents en els mamífers i per tant el seu rol primari seria la lisi extracel·lular per secreció d’aquests enzims i altres substàncies antimicrobianes . Poden produir severs danys tissulars per alliberament dels radicals lliures de l’oxigen (Tyzard 1992). Els eosinòfils contenen grànuls citoplásmicos que es tenyeixen amb els colorants àcids. En la majoria dels peixos teleostis són escassos o absents en la circulació. Alguns estan presents en el peritoneu i teixits. En els elasmobranquis es troben diferents graus de eosinofília amb diferències de mida i estructura. En algunes espècies són abundants a l’intestí, la qual cosa indicaria alguna funció en la immunitat contra bacteris. Els basòfils contenen grànuls en el citoplasma que es tenyeixen amb els colorants bàsics i la seva presència és escassa i rara en la sang perifèrica de la majoria de les espècies estudiades.
b) Monòcits-macròfags: Els monòcits són mòbils, fagocíticos i normalment més grans que altres leucòcits. Tenen un citoplasma vacuolado i basofílico. S’han trobat en sang i ronyó i la seva presència ha estat demostrada només en algunes espècies. Els macròfags són cèl·lules fagocíticamente actives derivades dels monòcits que es troben en teixits i en les cavitats peritoneal i pericàrdica, de major grandària que els anteriors, i per aquesta raó poden fagocitar partícules més grans. En teleostis els macròfags són especialment abundants a la melsa i en el teixit linfomieloideo renal i pot haver-hi en altres teixits, per exemple la mucosa olfactòria.
En aquest procés d’ingestió l’antigen és capturat inicialment pels macròfags presents en les brànquies i els teixits connectius de la pell i intestí, en l’individu adult els principals llocs fagocíticos són els òrgans linfoideos, el ronyó, la melsa i l’epicardi; al ronyó el material és inicialment fagocitat per la trama cel·lular reticuloendotelial dins el parènquima hemopoètic, mentre que a la melsa, l’antigen és atrapat extracelularmente a les fibres reticulars a la paret el·lipsoide (Fergusson 1989). Els macròfags contenint material fagocitat s’agreguen en àrees linfoideas moltes vegades en presència de melanomacrófagos, que són cèl·lules fagocítiques que han transformat en melanina el material fagocitat.
Els fagòcits són afectats per transmissors nerviosos adrenèrgics i colinèrgics, que augmenten la seva habilitat per produir les espècies reactives de l’oxigen, que participen en el procés fagocític (Lambris 1993), produint-se un augment d’anió superòxid, peròxid d’ hidrogen i radicals hidroxil (Greus et al. 1985).
2. Sistema immune ESPECÍFIC
2a. IMMUNITAT HUMORAL
Està representada pels anticossos (Ac) o immunoglobulines (Igs) que són glicoproteïnes, en el sèrum 40-50% de la proteïna total correspon a les Igs. En els ciclòstoms, els anticossos que es troben són macroglobulinas de 23.8S i en llamprees, trobem 3 tipus d’anticossos, de 14S, 9S i 7S (Tizard 1992), aquesta última molècula amb cadenes lleugeres i pesades, però sense ponts disulfur intercatenarios.
L’única Ig present en els peixos ossis i cartilaginosos és de la classe “IgM like”, en teleostis es presenta en forma de tetràmer amb dues cadenes lleugeres i dues pesades amb un pes molecular aproximat de 700 i un coeficient de sedimentació de 17 S, també hi ha formes monomèriques en el sèrum (Castell et al. 1993; Killie et al. 1991; Koumans-van Diepen et al. 1994; Miller et al. 1985). Han estat descrits pèptids homòlegs a la cadena J en peixos (Tyzard 1992), en els elasmobranquis es presenta en forma pentamérica (19S) i d’aproximadament 900 kDa i també monomèrica (7S) i d’aproximadament 160 kDa (Fange 1992).
Els gens de les Igs estan organitzats essencialment de la mateixa manera que en els vertebrats (Marchalonis 1989). Les parets dels vasos sanguinis són permeables a les Igs de el sèrum i per això les hi troba en la majoria dels fluids tissulars, en el plasma, la limfa i el mucus epitelial (Stoskopf 1993). En els peixos ossis es troba la IgM dimèrica en el mucus i se suposa que és sinteritzada localment.
Les cèl·lules productores d’anticòs deriven de limfòcits B, els quals per interacció amb l’antigen es transformen en cèl·lules plasmàtiques. En el procés de presentació antigènica col·laboren els macròfags. Les cèl·lules plasmàtiques han estat detectades en diferents grups de peixos, incloent els ciclòstoms, encara que en aquests es considera que tenen propietats intermèdies entre les Igs dels vertebrats i les lectines dels invertebrats (Fange 1992). Tenen un citoplasma basòfil, comunament no granular i les hi troba en el teixit connectiu, melsa, ronyó i rarament en la sang. S’originen de cèl·lules B activades pel Ag i són considerades com les principals productores de Igs (Fange 1992).
La naturalesa de l’Ag ha tingut influència en la resposta dels Acs i és de fonamental importància en la investigació immunològica i també en la producció de vacunes. És essencial que la molècula sigui reconeguda com a estranya per estimular el sistema immune, ia més per ser processat ha restriccions físiques i químiques. Els antígens més efectius són aquells d’alt pes molecular, amb una estabilitat estructural i que siguin molècules químicament complexes i no inerts. En general, els complexos virals i bacterians i els antígens tipus eritròcit sembla que són immunògens efectius en la majoria de les espècies de teleostis, mentre que les proteïnes solubles són poc inmunogénicas (Tizard 1992).
En les diferents espècies de poiquiloterms ha dos factors que influencien notòriament la producció d’anticossos i la resposta immune, ells són els canvis estacionals i la temperatura. En els peixos tant la resposta humoral com la cel·lular depenen d’aquests factors.
Quant a la temperatura, Ellis (1988) defineix que el rang òptim per al seu desenvolupament està relacionat amb les condicions de l’entorn natural per a les diferents espècies. En general, com més alta és la temperatura dins el rang fisiològic normal, més curta és la fase d’inducció i més alta és la magnitud de la resposta immune; a baixes temperatures la fase d’inducció es perllonga amb una reducció en el títol d’anticossos o, si no hi ha una absència completa de la resposta.
Avtalion (1981) va indicar que sempre que la temperatura d’immunització i el període posterior es mantingui per sobre el nivell crític, la producció d’anticossos durant la resposta primària i secundària serà absolutament normal, constant i independent de la temperatura de l’entorn. D’altra banda, la temperatura afecta el creixement de la cria i les baixes temperatures prolongaran el període requerit pel peix per aconseguir l’estat de desenvolupament crític en el qual es fa immunològicament competent. Pel que fa als canvis estacionals, s’ha demostrat en la truita arc de Sant Martí (O. mykiss), que la producció d’anticossos, així com la seva estabilitat davant dels canvis de temperatura, la mobilitat electroforètica i els coeficients de sedimentació depenien de les estacions , alguns autors han informat que en els poiquiloterms ha una resposta pobra durant el període hivernal en comparació amb l’estiu, tot i que la temperatura romangui constant (Ellis 1981a).
L’edat a la qual té lloc un muntatge adequat i madur de la resposta humoral varia segons les diferents espècies i depèn també de les condicions ambientals. En general una resposta completa ocorre entre els 2 a 10 mesos, després de la incubació. S’han trobat anticossos circulants en peixos de 15-21 dies i 0,15-0,3 g de pes, però això no és el més general, en la pràctica ocorre recentment en exemplars de major pes i grandària (Ellis 1988b).
S’ha demostrat, a l’igual que el descrit per a mamífers, la resposta clàssica primària i secundària de producció d’anticossos.La fase d’inducció és habitualment més llarga i amb títols que augmenten en forma més lenta (Ellis 1989). Els neurotransmissors poden influenciar significativament la inducció in vitro de cèl·lules secretores d’anticossos en cultius de leucòcits a la melsa de truita. Els agonistes b adrenèrgics suprimeixen la resposta d’anticossos contra antígens T independents mentre que els a-2 adrenèrgics i colinèrgics l’augmenten (Flory 1990).
Com en els mamífers, passa tolerància en els peixos i això pot tenir lloc abans que es facin immunològicament competents. Estudis en O. mykiss i C. carpio realitzats per Ellis (1988b) han demostrat que les cèl·lules citotòxiques i la producció d’anticossos contra antígens T independents, es desenvolupen 4 setmanes post-eclosió. L’habilitat per establir una memòria immunològica i produir anticossos contra antígens T dependents, es desenvolupa 8 setmanes post-eclosió (Tatner 1986). Si s’injecten amb un Ag T dependent abans d’aquest temps es produeix la tolerància immunològica.
Els Acs monoclonals han permès definir l’heterogeneïtat molecular de les cadenes pesades i lleugeres de les Igs en moltes espècies com carpa, bagra, truita arc de Sant Martí (Rombout et al. 1993; Ainsworth et al. 1990; Sánchez & Domínguez 1991) i moltes altres, i han ajudat a entendre la cinètica de la resposta humoral primària i secundària després de l’desafiament antigènic.
2b. IMMUNITAT MESURA PER CÈL·LULES
En els peixos cartilaginosos i ossis trobem dins d’el grup dels glòbuls blancs, les cèl·lules no granulocíticas que participen en els mecanismes d’immunitat cel·lular. En aquest grup s’inclouen els limfòcits, cèl·lules immunocompetents que constitueixen la base de les reaccions immunes. Els limfòcits en el sentit morfològic són cèl·lules relativament petites amb un nucli rodó a oval, la seva grandària oscil·la entre 4.5 a 8 micres, són cèl·lules no fagocítiques i constitueixen el 50-80% de l’total dels leucòcits. La majoria dels limfòcits són produïts en el pronefros i en l’estafa. Com va ser esmentat més amunt hi ha dos tipus, els limfòcits B i T. La població de limfòcits T i les seves diferents clons són els responsables de la immunitat mediada per cèl·lules. Aquest aspecte de la resposta immune té un ampli rang i al seu torn recluta altres tipus cel·lulars com són els macròfags, permetent un eficient muntatge de la resposta. En una estimulació antigènica primària aquests clons es diferencien en diferents tipus cel·lulars amb funcions específiques. Aquests inclouen, les cèl·lules citotòxiques o “killer”, capaços de lisar cèl·lules estranyes per contacte físic directe entre la cèl·lula T i la cèl·lula blanc; les cèl·lules supressores que regulen la producció d’anticossos i de linfoquinas proporcionant un tancament a l’procés i les cèl·lules col·laboradores o “helper”, que ajuden a les cèl·lules productores d’anticossos i també alliberen davant l’estimulació antigènica factors solubles o linfoquinas que augmenten la capacitat de defensa.
En l’actualitat, es disposa d’una bateria d’anticossos monoclonals que ha permès demostrar que hi ha aquests dos tipus de cèl·lules limfocitàries (les cèl·lules B i les cèl·lules T) en diverses espècies de peixos (De Luca et a l’ . 1983). No obstant això, la majoria d’aquests anticossos estan dirigits contra immunoglobulines i cèl·lules B (portadores d’Igs en la seva superfície) i només uns pocs reconeixen les cèl·lules T perifèriques (Scapigliati et al. 1999). El desenvolupament d’aquests i de nous Acs permetrà una millor caracterització fenotípica dels limfòcits i els seus diferents subpoblacions cel·lulars, però hi ha poques dades sobre l’origen ontogènic i la diferenciació de cèl·lules limfoides (Castell et al. 1993). A causa de la manca d’anticossos monoclonals anti T específics, les respostes han estat controlades indirectament i només es presumeix la seva participació, per exemple, en la proliferació induïda per mitògens com la fitohemaglutinina A (PHA), la concanavalina A (ConA) i el lipopolisacàrid (LPS) (Sizemore et al. 1984), la resposta en reaccions de cultiu mixt (Miller et al. 1985), la funció com a cèl·lules col·laboradores en la producció d’Acs contra Ags dependents de cèl·lules T (Miller et al. 1987; Clem et al. 1985), el rebuig a tumors i al·loempelts (Manning 1994) i la secreció de linfoquinas (Secombes et al. 1996). La preparació d’aquests Acs ha definit la distribució en el cos d’aquestes cèl·lules i la seva heterogeneïtat i ha augmentat la recerca en l’àrea d’immunologia i d’immunodeficiència patologia.
En els ciclòstoms tenen només dues poblacions de leucòcits a la sang, un tipus monòcit i una altra tipus limfòcit, el 70% d’aquests tenen Igs en la seva superfície, s’originen en el ronyó anterior i no posseeixen cèl·lules plasmàtiques .
3.ÒRGANS limfoides
Els principals òrgans limfoides en peixos teleostis són l’estafa, el ronyó i la melsa (Ellis 1988; Fergusson 1989).
L’estafa és un òrgan parell, bilateral, situat sota l’epiteli faringi, dors lateral i allotjat a la part superior interna de les càmeres branquials. El principal component cel·lular és el timòcit, és a dir limfòcits en maduració. Com en altres vertebrats, l’hi considera com un òrgan limfoide primari on es produeix el pool de limfòcits verges que després migren per ajuntar-se amb els limfòcits perifèrics en la circulació i altres òrgans limfoides. No participa en la producció d’anticossos o en la captura d’antígeno.También poden estar presents cèl·lules epitelioides o cèl·lules tipus macròfag o macròfag pròpiament tal cèl·lules granulars eosinofíliques (Fergusson 1989). Com en els mamífers, la involució d’aquest òrgan s’observa en exemplars de major edat. En salmònids joves, l’estafa està totalment diferenciat i separat de l’medi extern per una capa de cèl·lules epitelials simples, i que per exemple a la truita arc de Sant Martí (O. mykiss) posseeixen porus de 20 micres de diàmetre, en els exemplars més vells aquests porus es tanquen i s’engrosseix l’epiteli. La seva localització superficial suggereix una certa vulnerabilitat a severes infeccions micòtiques i bacterianes.
El ronyó cefàlic o pronefros és el principal òrgan hematopoètic dels peixos i el principal lloc de diferenciació d’eritròcits, granulòcits, limfòcits B i monòcits. És el principal òrgan productor d’anticossos (Ellis 1989). És un òrgan de filtració contenint macròfags que fagociten els diferents antígens, conté components linfomieloides, renals i endocrins suplementats per la sang de les artèries i de la vena porta cabal. Serveix com un anàleg de la medul·la òssia, dels ganglis i en part de la glàndula adrenal dels vertebrats superiors (Fange 1992). El mesonefros o ronyó pròpiament tal compleix amb funcions d’equilibri hidrosalí.
La melsa conté menor nombre de cèl·lules hemopoètiques i limfoides en comparació amb el ronyó i està compost principalment per sang allotjada en cavitats. Està format per el·lipsoides, parets capil·lars compostes per una trama de fibres reticulars i macròfags. Les fibres s’especialitzen en atrapar complexos immunes i antígens particulats (Vallejo et al. 1992), mentre que els macròfags són altament fagocíticos (Ellis 1980). Un tret particular d’la melsa dels teleostis és la presència de macròfags contenint pigments de color fosc, principalment melanina i que s’anomenen melanoma- macròfags. Aquests s’agrupen i formen agregats anomenats centres melanomacrofágicos (CMM). El seu nombre i grandària augmenta en peixos crònicament malalts, quan el catabolisme ha estat excessiu (Fergusson 1989). Serveixen com a dipòsit dels productes finals de l’metabolisme (ex. Els fosfolípids) i també d’antígens i material particulat (Herraez et al. 1986), la seva funció exacta no es coneix, però a més de l’esmentat, se sap que la melanina té la habilitat d’atrapar els radicals lliures d’oxidació i això protegiria els teixits contra aquests productes alliberats per les cèl·lules fagocítiques com són els neutròfils. Se’ls troba també en el ronyó i fetge i ocasionalment en les gònades i la tiroide (Fergusson 1989).
Quant a la ontogènia de el sistema immune s’han realitzat nombrosos estudis per definir-la i en base a això es poden deduir les següents consideracions. Una descripció histològica completa de el desenvolupament ontogènic dels òrgans limfoides en peixos informar que en diverses espècies la primera aparició de limfòcits ocorreria en l’estafa (Grace & Manning 1980; Botham & Manning 1981; Doggett & Harris 1987), tot i que no obstant això, altres autors van trobar una detecció més primerenca en el ronyó (Grace et al. 1981; Ellis 1977 ; O’Neill 1989). De totes maneres, encara que apareguessin cèl·lules precursores en el ronyó abans de la diferenciació limfocitària en l’estafa, els limfòcits madurs són presents primer a l’estafa i després seqüencialment apareixen en el ronyó i en la melsa (Zapata et al. 1990), per la qual qual es considera que l’estafa és el primer òrgan limfoide on es desenvolupen els limfòcits.
Es va comparar el temps d’aparició dels limfòcits en la circulació sanguínia i els òrgans linfoídeos en diferents espècies (Ellis 1988). Després de la diferenciació d’un gran nombre de cèl·lules en l’estafa, apareixen limfòcits en la sang i ronyó a el mateix temps, el ronyó es fa després ric en cèl·lules limfoides. El temps de diferenciació de limfòcits varia amb les espècies i està probablement relacionat amb la taxa de creixement i desenvolupament general (Ellis 1988). És clar que els limfòcits petits madurs apareixen just abans o després de l’eclosió.Durant les primeres setmanes després de produïda l’eclosió, la velocitat de creixement dels òrgans linfoídeos és més gran que la de la resta de el cos, però posteriorment comença a disminuir amb l’edat. Molts timòcits migren als òrgans perifèrics durant els primers 2-3 mesos d’aquest període i s’observen signes d’involució voltant dels 9 mesos (Ellis 1988). El desenvolupament dels òrgans limfoides es correlaciona millor amb el pes de l’peix que amb l’edat i per tant, sembla ser una funció de la velocitat de creixement.
Com es va esmentar anteriorment, en els exemplars adults, els limfòcits perifèrics porten en la seva superfície certs Ags relacionats amb la funció cel·lular i la seva presència es pot usar com a marcador per diferenciar cèl·lules immadures de madures. Amb l’ús d’anticossos monoclonals es va poder estudiar l’aparició d’aquests marcadors en les cèl·lules limfoides (Secombes 1983), es va determinar així que, encara que els limfòcits apareixen d’hora en el desenvolupament, la seva maduració funcional pren un període de temps més llarg abans que siguin capaços de muntar una resposta immune (Ellis 1988).
4. RESPOSTA INFLAMATÒRIA
La resposta inflamatòria és la característica protectora de el teixit en resposta a un determinat dany i és comú a tots els vertebrats, incloent els peixos (Finn & Nielsen 1971). La inflamació és inespecífica i pot ser iniciada per diferents factors incloent paràsits, bacteris o virus i altres agents com la radiació i toxines químiques. Els esdeveniments que caracteritzen la resposta inflamatòria són: 1) vasodilatació amb un augment en el flux sanguini i la permeabilitat vascular, 2) exsudació de l’plasma, i 3) migració de leucòcits als teixits (Ellis 1989).
Els neutròfils són les primeres cèl·lules que migren als teixits i se’ls pot observar amb freqüència en les lesions inflamatòries (Wolke 1975; Tyzard 1992). El seu paper en aquestes lesions no és molt rellevant, però exerceixen una activitat extracel·lular alliberant enzims i radicals lliures que causen severs danys tissulars.
Els macròfags mononuclears tenen un important paper fagocític, ingerint tant material inert com antigènic. Els limfòcits estan menys associats amb lesions inflamatòries excepte que estigui involucrada una resposta immune mediada per cèl·lules. Si el procés inflamatori no és efectiu per neutralitzar la causa de el dany o si el dany tissular continua, pot ocórrer un encapsulament o enquistament a l’àrea, que s’acompanya per dipòsits de fibres de col·lagen, calci i pigmentació (Fergusson 1989).
5. Immunoestimulants
Els immunoestimulants són una sèrie d’agents, naturals i artificials, que són utilitzats per controlar les malalties dels peixos i són mencionats aquí ja que actuen directament sobre les cèl·lules de el sistema immune estimulant la seva acció efectora. Inclouen agents químics sintètics com el levamisol (Kajita et al. 1990; Siwiki et al. 1990); substàncies biològiques com derivats bacterians, com el LPS (Mac Arthur et al. 1985; Neumann et al. 1995), el beta glucans (Jorgessen et al. 1993; Thompson et al. 1995) etc., o polisacàrids, com la quitina ( Sakai et al. 1992) i oligosacàrids (Yoshida et al. 1993); extractes provinents d’animals o plantes (Davis & Hayasaka 1984; Jang et al. 1995); factors nutricionals, com les vitamines C i E (Thompson et al. 1993; Wise et al. 1993); hormones, com la prolactina i l’hormona de creixement (Sakai et al. 1996; Kajita et al. 1992) i citocines com l’IFN i la IL-2 (Tamai et al. 1993; Tamai et al. 1992). Aquests són només alguns exemples representatius de la llista actualment disponible. Fonamentalment actuen facilitant la funció de les cèl·lules fagocítiques, augmentant la seva activitat bactericida, estimulant l’activitat de les cèl·lules natural killer, de el sistema complement, de la lisozima i de la resposta d’anticossos. L’activació d’aquestes funcions immunològiques està associada amb un augment de la protecció contra malalties infeccioses. Aquests agents són només efectius en algunes malalties ia més la seva acció varia amb els períodes de temps, la dosi, els mètodes d’administració i la condició fisiològica de l’peix (Sakai 1999).
En termes generals s’ha descrit que els peixos desenvolupen una bona resposta immunològica, encara que com ja hem esmentat, la mateixa està sota la influència de diferents factors en especial els de l’entorn, que modifiquen fortament el seu desenvolupament. El sistema respon i controla els agents infecciosos que prenen contacte amb l’hoste i és per això que el coneixement de la mateixa és bàsic per al desenvolupament de programes de control de les malalties.S’ha avançat molt en els últims anys, tot i que encara es necessita realitzar estudis d’immunologia bàsica en les diferents espècies. Per això és important ser molt caut quan es comparen les observacions realitzades en algunes espècies de peixos amb les efectuades en mamífers, i de la mateixa manera dins d’una espècie a una altra de peix. A excepció dels peixos teleostis, la informació trobada en els diferents grups és encara escassa, i per tant resulta insuficient a l’hora d’emetre conclusions.
L’estudi de les malalties dels peixos s’ha incrementat notablement en els últims 40 anys, rebent cada vegada més atenció, i això ha estat principalment pel gran desenvolupament de l’aqüicultura. El cultiu de peixos és una gran indústria, sent molt variades les espècies que es cultiven i la producció en el món sencer augmenta cada any. Aquest augment afecta en forma adversa la salut dels peixos, incrementant la susceptibilitat a diferents infeccions. Es requereix una informació actualitzada i mètodes ràpids i sensibles de diagnòstic per detectar en forma eficaç les diferents afeccions. En aquest sentit, els diagnòstics basats en reaccions immunològiques tenen la particularitat de detectar casos subclínics en poblacions de peixos aparentment sans, permetent així la prevenció de la transmissió i difusió de les malalties. També l’obtenció de vacunes durant l’última dècada es va basar principalment en l’avanç de l’àrea de la immunologia, i les mateixes han estat eficaços en el control d’algunes malalties. Finalment, els immunoestimulants augmenten la resistència a les malalties infeccioses, activant els mecanismes de defensa.
Per tot l’exposat, resulta evident que malgrat els grans avenços realitzats en els últims anys, es necessita continuar amb estudis morfològics i fisiològics combinats de les poblacions efectores, que permetin resoldre alguns interrogants sobre els mecanismes funcionals bàsics i que ajudaran a comprendre per què s’estableixen els diferents agents infecciosos i com aquests indueixen la patogènia.
AGRAÏMENTS
Aquest treball de revisió va ser realitzat amb fons de el subsidi B037 atorgat per la Universitat Nacional d’el Comahue. Agraeixo als meus col·legues de laboratori de Ictiopatologia de el Centre Regional Universitari Bariloche pel seu suport i per haver-me brindat amb generositat part de l’material bibliogràfic aquí utilitzat. Agraeixo molt especialment a l’Llic. Oscar Serra per la seva ajuda en la preparació d’aquest treball i el seu suport permanent i la Dra. Maria Marta de I. de Bracco per haver-me encoratjat perquè escrivís aquesta revisió.
Data de recepció: 2000.02.23 a Data d’acceptació: 2000.04.30
Ahne, W. 1994. Evidence for the early appearance of interleukins and tumor necrosis factor in the phylogenesis of vertebrates. Immunol. Today. 15 (3): 137.
Ainsworth, A.J., C. Dexiang & T. Greenway. 1990. Characterization of monoclonal antibodies to channel catfish, peix gat americà, leukocytes.Vet. Immunol. Immunopathol. 26: 81-92.
Avtalion, R.R. 1981. Environmental control of the immune response in fish. Critical Reviews in Environmental Control. 11: 163-188.
Botham, J.W. & M.J. Manning. 1981. The Histogènesi of the lymphoid organs in the carp Cyprinus carpio L. and the ontogenetic development of allograft reactivity J. Fish Biol. 19, 403-14.
Buller, J.J., J.H. Rogers & E. Griffths. 1978. Role of iron in bacterial Infections. Curr. Top. Microbiol. Immunol. 80: 1-35.
Castell, A., C. Sánchez, J. Domínguez, S.L. Kaatari & A.J. Villena. 1993. Ontogeny of IgM and IgM-bearing cells in rainbow trout. Dev. Comp. Immunol. 17: 419-424.
Clem, L.W., R.C. Sizemore, C.F. Ellsaesser & N.W. Miller. 1985. Monocytes es ACCESSORY cells in fish immune respomse. Dev. Comp. Immunol. 9: 803-809.
Davis, J.F. & S.S. Hayasaka. 1984. The enhancement of resistance of the American eel, Anguilla rostrata Li Sueur, to a pathogenic bacterium Aeromonas hydrophila, by an extract of the tunicate Ecteinascidia turbinata. J. Fish Dis. 7: 311-316.
De Luca, D., M. Wilson & G.W. Warr. 1983. Lymphocyte Heterogeneity in the trout, Salm gairdnerii, defined with monoclonal antibodies to IgM. Eur. J. Immunol. 13: 546-551.
De Serra, J. & G.J. Riu. 1975. Partial purification and characterization of RTG-2 fish cell interferon. Infect. Imm. 11: 815-822.
Doggett, T.A. & J.E. Harris. 1987. The Ontogeny of gut-associated lymphoid tissue in Oreochromis mossambicus. J. Fish Biol. 31: 23-27.
Dorson, M., A. BARDE & P. de Kinkelin. 1975. Virus Egtved Induced Rainbow truita interferó sèrum: algunes propietats fisiochemicals. Ann. Microbiol. Inst. Pasteur. 126: 485-489.
dorson, M., P. de kinkelin & C. Torchy. 1992. Síntesi interferó en truita arc de Sant Martí Fry després de la infecció amb virus de necrosi pancreàtica infecciosa. Immunol de marisc de peixos. 2: 311-313.
Eaton, W.D. 1990. Activitat antiviral en quatre espècies de salmonids després de l’exposició a la poliinosínica: àcid citidílic. Dis. Aigua. Org. 9: 193-198.
Edagawa, T., M. Murata, M. Hattori, M. Onuma & H. Kodama. 1993. Superfície cel·lular C-Reactiva proteïna de limfòcits de truites Rainbow. Dev. Comp. Immunol. 17: 119-127.
Ellis, a.e. 1977. Els leucòcits de peixos: una revisió. J. FISH. Biol. 11: 435-491.
Ellis, a.e. 1980. Atremporant antigen a la melsa i ronyó de la plaça, Pleuronecta Platessa. J. Fish Dis. 3: 413-26.
Ellis, A.e. 1981a. Estrès i la modulació dels mecanismes de defensa en els peixos. In: Pickering, A.D. (ed.). Estrès & peix, premsa ACAD, Londres. 147-169.
Ellis, a.e. 1981b. Mecanismes de defensa no específics en peixos i el seu paper en els processos de malalties. Dev. Biol. Quedar-se dret. 49: 337-352.
Ellis, a.e. 1988a. Ontogenia del sistema immunitari a Teleost Fish. A: Ellis, a.e. (ed.). Vacunació de peixos, Acad. Premeu Londres. 20-31.
Ellis, a.e. 1988b. Optimització de factors per a la vacunació de peixos. A: Ellis, a.e. (ed.). Vacunació de peixos, Acad. Premeu Londres. 32-46.
Ellis, A.e. 1989. La immunologia de les teleests. A: Roberts, R.J. (Ed.). Patologia de peixos. 135-152.
Ellis, a.e. 1990. Assaigs de lisozima. A: robats, J.S., T.C. Fletcher, d.p. Anderson, B.S. ROBERSON & W.b. Van Muiswinkel (eds.). Tècniques de peix Immunol. SOS PUBLIC N. J. EUA. 101-103.
Evans, D.E., S.S. Graves, D. Cobb & D.L.L. Dawe. 1984. Cèl·lules citotòxiques nonspecífiques en peixos (Ictalurus punctatus) II. Paràmetres de lisi i especificitat de cèl·lules objectiu. Dev. Comp. Immunol. 8: 303-312.
Fange, R. 1992. Peixos de glòbuls. A: Hoar, W.S., D.J. Randall & A.P. FARRELL (EDS.). Fish Fisiologia Acad. Premsa, Inc EUA. XII Parte B: 1-50.
Fergusson, H.W. 1989. Patologia sistèmica del peix. Un text i atles de respostes de teixits comparatius en malalties de teleests. Iowa State Univ Press / Ames. 64-103.
Finn, J.P. 1970. Els mecanismes de protecció en malalties de peixos. Veterinaris. Toro. Weybridge. 40: 873-886.
finlandès, j.p. & n.O. Nielsen. 1971. Resposta inflamatòria en truita arc de Sant Martí. J. Fish Biol. 3: 463-478.
fletcher, t.c., A. white & b.a. Baldo. 1977. Precipitina similar a la proteïna i lisozima de la proteïna C-reactiva C-reactiva i lisozima a la temporada de reproducció Comp. Bioquem. Fisiol. 57: 353-357.
fletcher, t.c. 1981. Molècules no anticossades i mecanismes de defensa dels peixos. In: Pickering, A.D. (ed.). Estrès i peix, premsa de l’Acad. 171-183.
Flory, c.m. 1990. Filogenia de la neuroimmunoregulació: Efectes dels agents adrenèrgics i colinèrgics a la resposta d’anticossos in vitro de la truita arc de Sant Martí, Oncorhynchus Mykiss. Dev. Comp. Immunol. 14: 283-294.
Gordon, J. & M.A. MINKS. 1981. El interferó renaixentista: aspectes moleculars de la inducció i l’acció. Microbiol. Rev. 45: 244-51.
Graham, S. & C.J. Secombes. 1990a. Els limfòcits de peixos segreguen IFN gamma? J. Fish Biol. 36: 563-573.
Graham, S. & C.J. Secombes. 1990b. Requisits cel·lulars per a la secreció de limfocines per Rainbow Trout, Salmo Gairdnerii, Leucòcits. Dev. Comp. Immunol. 5: 75-83.
Grace, m.f. & M.J.J., Manning. 1980. Histogènesi dels òrgans limfoides a Rainbow trout Salmo Gairdnerii Rich 1836. Dev. Comp. Immunol. 4: 255-264.
Grace, m.f., j.w. Botham & M.J.J., Manning. 1981. ontogenia de la funció d’òrgan limfoide en peixos. A: Solomon, J.B. (ed.). Aspectes de la immunologia del desenvolupament i comparativa, Pergamon, Oxford, 1: 467-68.
Graves, S.S., D. Evans & D.l. Dawe. 1985. Activitat antiprotozoana de cèl·lules citotòxiques nonspecífiques del canal de silur. J. Immunol. 13: 478-85.
Greenlee, A.R., R.A. Marró & S.S. Ristow. 1991. Les cèl·lules citotòxiques nopecífiques de Rainbow Trout (Oncorhynchus Mykiss) maten objectius YAC-1 per mecanismes necròtics i apoptòtics. Dev. Comp. Immunol. 15: 153-164.
Grinde, B., O. Lie, T. Poppe & R. salte. 1988. Espècies i lisozims d’espècies i variacions individuals en peixos d’interès per a l’aqüicultura. Aqüicultura. 18: 299-304.
herrraez, m.p. & A.G. ZAPATA. 1986. Estructura i funció dels centres melanomacròfags del peix daurat Carassius Auratus.Veterinaris. Immunol. Immunopatol. 12: 117-26.
Ingram, g.a. 1980. Substàncies implicades en la resistència natural del peix a la infecció. J. FISH. Biol. 16: 23-60.
Ingram, g.a. 1990. Prova de fixació de complements. A: robats, J.S., T.C. Fletcher, d.p. Anderson, B.S. ROBERSON & W.b. Van Muiswinkel (eds.). Tècniques de peix Immunol. Publicacions SOS N.J. USA. 1: 25-44.
Jang, S.I., M.J. Marsden, Y.G. Kim, M.S. Choi & C.J. Secombes. 1995. L’efecte del glicyrrhizin a Rainbow Trout, Oncorhynchus Mykiss (Walbaum), respostes de leucocíte. J. Fish Dis. 18: 307-315.
Jarvik, E. 1980. Estructura bàsica i evolució dels vertebrats. Premsa Acad, Londres.
Jeney, Z., G. Jeney & A.G. MAULE. 1992. Mesures de cortisol en peixos. A: robats, J.S., T.C. Fletcher, d.p. Anderson, S.L. Kaatari & A.F. Rowley (EDS). Tècniques de peix Immunol, Publicacions SOS, N.J. USA. 2: 157-166.
Johnson, A.m., F.w. Bayer, B.E. Szentle & M.A. JARPE. 1994. Com interferons lluita contra la malaltia?. Ciència. Sóc. 270: 68-75.
Jorgesen, J.B., H. LUNDE & B. Robertsen. 1993. Resposta peritoneal i cel·lular de cèl·lules renals a l’intraperitonealy injectat Glucan en salmó atlàntic, SALMO Salar. L. J. FISH DISS. 16: 313-325.
kajita, y., M. Sakai, S. Atsuta & M. Kobayashi. 1990. Els efectes immunomoduladors de Levamisole a Rainbow Trout O. Mykiss. Pathol de peix. 25: 93-98.
Kajita, Y., M. SAKAI, M. KOBAYASHI & H. Kawauchi. 1992. Millora de l’activitat citotòxica no específica de leucòcits en truita arc de Sant Martí oncorhynchus mykiss injectat amb hormona de creixement. Immunol de marisc de peixos. 2: 155-157.
killie, j.e., S. espelid & T. jorgessen. 1991. La resposta humoral en salmó atlàntic (SALMO Salar L.) contra el transportista HAPTEN NIP-KLH; L’efecte de la densitat determinant (NIP) i el perfil d’isotip d’anticossos anti-nips. Immunol de marisc de peixos. 1: 33-46.
KOUMANS-VAN DIEPEN, J.C.E., M.H.m. Van de Lisdonk, A.J.L. Taverne-Thiele, B.M. VERBURG-VAN KEMENADE & J.H.W.M. Rombout. 1994. Caracterització de leucòcits vinculants d’immunoglobulina a la carpa (Cyprinus Carpio L.) dev. Comp. Immunol. 18: 45-56.
Lambris, J.D. 1993. La química, la biologia i la filogenia del complement C3 avui. Perfils complementàries. Karger Basilea. I: 16-45.
Lie, O., O. Evensen, A. Sorensen & E. Frogsadal. 1989. Estudi sobre l’activitat de lisozima en algunes espècies de peixos. Malalties d’organismes aquàtics. 6: 1-5.
lobb, c.j. & J.R. Hayman. 1989. Activació de complement per diferents isotips de cadena pesada immunoglobulina del canal de silur (Ictalurus punctatus). Mol. Immunol. 26: 457-465.
Mac Arthur, J.I. & T.C. Fletcher. 1985. Phagocitosi en peixos a: Manning, M.J. (ed.). Immunologia de peixos. Premsa Acad NY / Londres. 29-46.
Mac Arthur, J.I., A.W. Thompson & T.C. Fletcher. 1985. Aspectes de la migració de leucòcits a la plaça Pleuronectaes Platessa L. J. Fish Biol. 27: 667-676.
Manning, M.J. 1994. Peixos a: Turner, R.J. (Ed.). Immunologia: un enfocament comparatiu. Wiley, Chichester, 69-100.
Marchalonis, J.J. & S.F. Schluter. 1989. Evolució de dominis variables i constants i unint-se segments de reordenació immunoglobulines. FASEB J. 3: 2469-2472.
Marchalonis, J.J. & S.F. Schluter. 1994. Desenvolupament d’un sistema immunitari. A: Beck, G., G.s. Habicht, E.L. Cooper & J.J. Marchalonis (eds.). Anals de la Nova York d’Acad. de SCI. 712: 1-12.
Matsuyama, H., K. Tanaka, M. Nakao & T. YANO. 1988a. Caracterització de la ruta de complement alternativa de la carpa. Dev. Comp. Immunol. 12: 403-408.
Matsuyama, H., M. Nakao & T. YANO. 1988b. Compatibilitats d’anticossos i complement entre diferents espècies de peixos. Nippon Suisan Gakkaishi 54: 1993-1996.
Miller, N.W., R.C. Sizemore & l.w.clem. 1985. Phylogenia de l’heterogeneïtat de limfòcits: els requisits cel·lulars per a les respostes d’anticossos in vitro del canal de leucòcits del silur. J. Immunol. 134: 2884-2888.
Miller, N.W., J.E. Van Ginkel, F. Ellsaesser & L.W. Clem. 1987. Filogenia de l’heterogeneïtat de limfòcits: identificació i separació de subpoblacions funcionalment diferents de canals de marisc de limfòcits amb anticossos monoclonals. Dev. Comp. Immunol. 11: 739-748.
Moody, C.E., D.V. SERREZE & P.W. Reno. 1985. Activitat citotòxica nonspecífica de Leucòcits de Teleture. Dev. Comp. Immunol. 9: 51-64.
Murray, c.k. & T.C. Fletcher. 1976.La localització immunohis- toquímica de la lisozima a la plaça (Pleuronecta Platessa L.) teixits. J. Biologia de peixos 9: 329-334.
Neumann, n.f., M. Fagan & M. Belosevic. 1995. Macròfag Activat (s) Factor (s) secretat per Mitogen estimulada Sinergies de peix de peix daurat amb lipopolisacàrid bacterià per induir la producció d’òxid nítric en macròfags de Teleost. Dev. Comp. Immunol. 19: 475-482.
Nonaka, M., N. Yamaguchi, S. Natsuume-Sakai & M. takahashi. 1981. El sistema complement de la truita arc de Sant Martí (Salmo Gairdneri) .i. Identificació del sistema sèric lític homòleg al complement de mamífers. J. Immunol. 126: 1489-1494.
O’Neill, J. 1989. ontogenia dels òrgans limfoides en un telettista antàrtic, Harpagifer Antarcticus (notothenioidei: perciformes). Dev. Comp. Immunol. 13: 25-33.
Ourth, D.D. 1980. Igm secretora, lisozima i limfòcits a la pell mucosa del canal de silur, Ictalurus punctatus. Dev. Comp. Immunol. 4: 65-74.
Roberson, B. Agglutinació bacteriana. In: Tècniques en peix Immunol. 1990. robat, J.S., T.C. Fletcher, d.p. Anderson, B.S. ROBERSON & W.b. Van Muiswinkel (eds.). Publicacions SOS, N. Y., EUA. 81-86.
Rogel-Gaillard, C., S. Chilmonczyk & P. de Kinkelin. 1993. Inducció in vitro de l’activitat similar a l’interferó procedent de leucòcits de truites de Rainbow estimulats per virus Egtved. Immunol de marisc de peixos. 3: 383-394.
Rombout, J.H.W.M., N. Taverne, M. Van-De-Kamp & A.J.J. TAVERNE-THIELE.1993. Diferències en mucositat i sèrum Immunoglobulina de la carpa (Cyprinus Carpio L.). Dev. Comp. Immunol. 17: 309-317.
Rowley, A.F., T.C. Hunt, M. Pàgina & G. mainwaring. 1988. Peixos. A: glòbuls vertebrats. Rowley, A.F. & N.A. RATCLIFFE (EDS.). Cambridge Univ Press, Cambridge. 19-127.
sakai, d.k. 1992a. Repertori de complement en el mecanisme de la defensa immunològica dels peixos. Anual. Rev. Fish. Dis. 223-247.
Sakai, M., H. Kamiya, S. Ishii, S. Atsuta & M. KOBAYASHI. 1992b. Els efectes immunostimulants de Chitin a Rainbow Trout, Oncorhynchus Mykiss. A: Shariff, M., R.P. Subaseighe & J.R. Arthur (EDS.). Malalties a l’aqüicultura asiàtica. Secció de salut de peix, societat pesquera asiàtica, Manila, Filipines, 1: 413-417.
Sakai, M., M. Kobayashi & H. Kawauchi. 1996. Activació in vitro de cèl·lules fagocítiques de peixos per GH, Prolactin i Somatolactin. J. Endocrinol. 151: 113-118.
Sakai, M. 1999. Estat de recerca actual dels immunostimulants de peixos. Aqüicultura 172: 63-92.
Sánchez, C. & J. Domínguez. 1991. Truita de les poblacions d’immunoglobulina que difereixen en cadenes lleugeres revelades per anticossos monoclonals. Mol. Immunol. 28, 1271-1277.
Scapigliati, G., N. Romano & L. Abelli. 1999. Anticossos monoclonals en immunologia de peixos: identificació, ontogenia i activitat de limfòcits T- i B. Aqüicultura 172: 3-28.
secombes, c.j., j.J.m. Van Groningen, W.B. Van Muiswinkel & E. Egberts. 1983. ontogenia del sistema immunitari a la carpa (Cyprinus Carpio L.). L’aparició de determinants antigènics sobre les cèl·lules limfoides detectades per anticossos monoclonals de ratolí anti-carpa. Dev. Comp. Immunol. 7: 455-464.
secombes, c.j. 1991. La filogènia de les citocines. A: el manual de citocina. Premsa Acad, Londres. Ch. 19: 387-411.
secombes, c.j. 1993. L’efecte de l’estrès en les respostes immunes del salmó atlàntic (Salmo Salar L.) Fisiol de peix. Bioquem. 12: 513-520.
secombes, c.j., l.j. hardie & G. Daniels. 1996. Citocines en peixos: una data actualitzada. Immunol de marisc de peixos. 6: 291-304.
secombes, c.j., J. zou, K. laing, g.d. daniels & C. cunningham. 1999. Gens de citocina en peixos. Aqüicultura 172: 93-102.
Siwiki, a.k., d.p. Anderson & o.w. Dixon. 1990. Immunostimulació in vitro de la truita de Rainbow (Oncorhynchus Mykiss Mykiss) Cèl·lules de melsa amb levamisole. Dev. Comp. Immunol. 14: 231-237.
Sizemore, R.G., n.w. Miller, M.A. Cuchens, C.J. LOBB & L.W. Clem. 1984. Phylogenia de l’heterogeneïtat de limfòcits: els requisits cel·lulars per a les respostes mitogèniques in vitro del canal de llajis de leucòcits J. Immunol. 133: 2920-2924.
stoskopf, m.k. 1993. Immunologia. A: W.B. Saunders Company (ed.). Medicina de peixos. Harcourt Brace Jovanovich Inc., Filadèlfia, EUA.153.
suzumoto, b.k., c.b. schreck & D. mcintyre. 1977. Resistència relativa de tres genotips de transferir de coho salmó (O. Kisutch) i les seves respostes hematològiques a la malaltia renal bacteriana. J. FISH RES. La taula pot. 34: 1-8.
Tamai, T., N. Sato, S. Kimura, S. shirata & H. Murakami. 1992.Clonació i expressió de plim de peix interleucina 2 gen. A: Murakami, H. et al. (Eds.). Tecnologia de cèl·lules animals: aspectes bàsics i aplicats, Kluwer, Països Baixos, 509-514.
Tamai, T., S. Shirata, T. Noguchi, N. Sato, S. Kimura & H. Murakami. 1993. Clonació i expressió del peix pla (Paralichthys Olivaceus) Interferó CDNA. Bioquem. Biophys. Acident. 1174: 182-186.
Tangelsen, L.A., G.D. TROBRIDGE & J.C. LEONG. 1991. Caracterització d’una activitat antiviral d’interferó inducible en salmonids. A: procediments del segon simposi internacional sobre virus de vertebrats inferiors. Oregon State Univ. 219-226.
Tatner, M.F. 1986. L’ontogenia de la immunitat humoral a Rainbow Trut, Salmo Gairdnerii. Veterinaris. Immunol. Immunopathol.12: 93-105.
Thompson, I., A. White, T.C. Fletcher, d.f. Houlihan & C.J. Secombes. 1993. L’efecte de l’estrès sobre les respostes immunes del salmó atlàntic (Salmo Salar L.) Dietes alimentades que contenen diferents quantitats de vitamina C. Aqüicultura 114: 1-18.
thompson, k.d., A. cachos & V. Inglis. 1995. Immunomodulant efectes dels glucans i oxitetraciclina a Rainbow Trout, Oncorhynchus Mykiss, en sèrum Lisozyme i protecció. A: Shariff, M., R.P. Subaseighe & J.R. Arthur (EDS.). Malalties a Asain Aquacultiu. Secció de salut de peix, societat pesquera asiàtica, Manila, Filipines, 11: 433-439.
Tizard, I. 1992. La filogènia del sistema immunitari. A: Immunologia veterinària Una introducció. W.B. Saunders Company (ed.). Harcourt Brace Jovanovich, Inc. EUA. 457-469.
vallejo, a.n., n.w. Miller & L.W. Cem. 1992. Processament d’antigen i presentació a les respostes immunes de Teleost. Ann. Rev. Fish. Dis. 2: 73-89.
van muiswinkel, w.b., d.p. Anderson, c.h.j. Lamers, E. Egberts, J.J.A. VAN LONN & J.P. IJSSEL. 1985. Immunologia de peixos i salut de peixos. Immunologia de peixos. Premeu l’Acad a Londres.
Verburg-van-kemenade, b.m.l., f.a.a.weyts, R. Debets & G. Flik. 1995. Els macròfags carpa i els granulòcits neutrofílics segreguen un factor d’interleucina 1 semblant. Dev. Com. Immunol. 19: 59-70.
Volanakis, E., X. yuanyuan & k.J. Macon. 1990. A: molècules de defensa. Marchalonis, J.J. & C.L. Reinisch (eds.). Wiley-liss. Nova York. 161-175.
hivern, g.w., c.b. csheck & J.d. McIntyre. 1980. Resistència de diferents estocs i transferir genotips de coho salmó, Oncorhynchus Kisutch, i truita Steelhead, Salmo Gairdnerii, a la malaltia renal bacteriana i la vibriositat de la pesca. 77: 795-802.
savi, d.J., J.R. TOMASSO, T.E. Schwedler, V.S. Blazer & DO. Gatlin III. 1993. Efecte de la vitamina E sobre les respostes immunes del canal de silur a Edwardsiella Ictaluri. J. Aquat. Animi. Salut 5: 183-188.
WOLKE, R.E. 1975. Patologia de malalties bacterianes i fúngiques que afecten els peixos. A: Patologia dels peixos. Ribelin, W.e. & G. migaki (eds.). La Premsa de la Universitat de Wisconsin. 33-37.
Yano, T. 1992. Assaigs de l’activitat de complement hemolític. In: Tècniques en peix Immunol. Robat, J.S., T.C. Fletcher, d.p. Anderson, S.L. Kaatari & A.F. Rowley (EDS). Publicacions SOS EUA. 2: 131-141.
Yoshida, T., M. Sakai, T. Kitao, Sm. Khlil, S. Araki, R. Saitoh, T. ineno & V. Inglis. 1993. Efectes immunomoduladors dels productes fermentats de l’ou de pollastre, EF203, a la truita arc de Sant Martí, Oncorhynchus Mykiss. Aqüicultura 109: 207-214.
Zapata, A., A. chiba & A. Varas. 1990. Cèl·lules i teixits del sistema immunitari de peixos. A: Iwama, Q. & T. nakanisiet (eds.). El sistema immunitari de peix: organisme, patogen i medi ambient. Premsa Acad, San Diego. 1-62.