Increment de Interleucina-1 beta, Interferon gamma i factor de necrosi tumoral alfa en sèrum i cervell de ratolins infectats amb el virus de Encefalitis Equina Venezolana.
Nereida Valero 1, Ernesto Bonilla 2,3, Luz Marina Espina 1, Mery Maldonado 1, per Elsa Montero 4, Florencio Añez 1, Alegria Levy 1, John Bermudez 1, Eddy Meleán 1 i
Anais Nery 1.
1 Secció de Virologia,
2 Secció de Neuroquímica, Institut d’Investigacions Clíniques Dr. Américo Negrette, Facultat de Medicina, Universitat de Zulia,
3 Institut Veneçolà d’Investigacions Científiques (IVIC-Zulia) i
4 Hospital Dr. Adolfo Pons, Maracaibo, Veneçuela.
Autor de correspondència: Nereida Valero. Secció de Virologia, Institut d’Investigacions Clíniques Dr. Américo Negrette, Apartat postal 23. Facultat de Medicina, Universitat de Zulia. Maracaibo, Veneçuela. Tel. (0261) 3279847, Fax: (0261) 7597247, Cel: (0414) 3624181. Correu electrònic: [email protected].
Resum
Diversos esforços han estat dirigits a fi d’aclarir els principals mecanismes de protecció i recuperació en les infeccions virals agudes i el possible paper de les citocines involucrades en la resposta immunitària primària induïda per una soca epizoótica de virus de Encefalitis Equina Venezolana (EEV). En el present estudi es van determinar les concentracions de citocines TH1 Interleucina-2 (IL-2) i Interferon-gamma (IFN-g), TH2 Interleucina-4 (IL-4), proinflamatòries (IL-1b) i el Factor de Necrosi tumoral -alfa (TNF-a) en sèrum i cervell de ratolins infectats amb el virus de EEV a diferents períodes d’infecció. Es van utilitzar ratolins NMRI albins mascles infectats amb una suspensió (10 DL50) del cep Guajira de virus de EEV, i un grup control (sense infectar). En els dies 1, 3 i 5 post-infecció, es va extreure sang completa de ratolins per a l’obtenció de sèrum i el cervell prèvia perfusió, per a l’obtenció de homogeneïtzats cerebrals. En ambdues mostres es van determinar IL-2, IFN-g, IL-4, IL-1b, i TNF-a per la tècnica d’ELISA. Es va observar un increment significatiu (p < 0,01) en sèrum i homogeneïtzats cerebrals a l’1er, 3er i 5è dia post-infecció en les concentracions d’IL-1b, IFN-g i TNF-a, a l’comparar-los amb el grup control. La quantificació de IL-2 i IL-4, no van llançar diferències estadísticament significatives a l’ésser comparats amb els controls. Aquests resultats suggereixen que la IL-1b, IFN-g i TNF-a, podrien estar involucrades en la resposta immunitària primerenca a virus de EEV durant la infecció primària.
paraules clau: Encefalitis Equina Veneçolana, citocines, sistema nerviós central, sèrum.
Augmenta of Interleukin-1 Beta, Gamma Interferon and Tumor Necrosi Factor Alpha in sèrum and brain of mice infected with the veneçolà Equine Encephalitis virus.
Abstract
Considerable efforts have been directed to clarify the main protective and recovery mechanisms in acute viral Infections and, the possible role of the cytokines involved in the primary immune response induced by an epizootic strain of the veneçolà Equine Encephalitis (VEE) virus. This study examined the levels of TH1 cytokines Interleukin-2 (IL-2) and Interferon-gamma (IFN-g), TH2 cytokines Interleukin-4 (IL-4) and proinflammatory cytokines (IL-1b, TNF-a) in sèrum and brain of mice infected with the VEE virus during different post infection periods. NMRI albí male mice infected with a suspension (10 DL50) of the Guajira strain of the VEE virus, and a control group (without infection) were used. At one, 3 and 5 days post-infection, whole blood and brains were extracted to obtain serà and brain homogenates, respectively. IL-2, IFN-g, IL-4, IL-1b and TNF-a were determined by ELISA. A significant va incrementar in the levels of IL-1b, IFN-g and TNF-a was observed (p < 0.01) in sèrum and brain homogenates at 1, 3 and 5 day post infection, when compared with the control group. The levels of IL-2 and II.- 4 did not show any significant statistical difference when compared to the controls. These results suggest that IL-1b, IFN-g and TNF-a, could be involved in the early immunitary response to VEE virus during the primary infection.
Key words : Venezuelan Equine Encephalitis, cytokines, central nervous system, sèrum.
Rebut: 07-07-2006. Acceptat: 27-03-2008.
INTRODUCCIÓ
La immunitat específica en les infeccions virals està intervinguda per una combinació de mecanismes immunitaris humorals i cel·lulars. Els anticossos es produeixen i són efectius en contra dels virus només durant l’estadi extracel·lular de la vida d’aquests microorganismes. Els virus poden ser extracel·lulars a l’inici de el curs de la infecció abans d’entrar a la cèl·lula hoste o en el cas de virus citopàtics una vegada que són alliberats de les cèl·lules infectades lisadas, per la qual cosa al seu estadi intracel·lular aquests virus no són detectats per els anticossos. La seva destrucció està intervinguda per l’activació de mecanismes que desencadenen una resposta cel·lular (limfòcits T) controlant la infecció o la replicació fins a l’aparició d’una resposta humoral (limfòcits B) que afavoreix la síntesi d’anticossos específics a l’agent infectant; no obstant això, són capaços d’evadir els mecanismes immunitaris de defensa, contribuint així a la patogènesi, a l’patir variacions antigèniques, inhibir la presentació antigènica a través de la supressió dels gens de l’Complex Principal de Histocompatibilitat (CMH) classe I i inactivar cèl·lules immunocompetents , entre d’altres (1).
En el sistema nerviós central (SNC), el control de les infeccions virals és una tasca complexa que es compleix a través de mecanismes que controlen i regulen el desenvolupament de processos inflamatoris locals que inclou a la barrera hemato-encefàlica (BHE), amb limitada capacitat per a la presentació d’antígens i la modulació funcional de reaccions immunitàries pels gangliòsids i astròcits. Normalment les cèl·lules dins el SNC no expressen antígens classe I o classe II de l’CMH. Les cèl·lules T activades a la perifèria, entren a l’SNC en forma antigen no-específica com a part de la rutina de vigilància immunològica. Només les cèl·lules T específiques per a un antigen present en el cervell i medul·la espinal, són retingudes dins de l’SNC (2).
Alguns autors han reportat tal infiltració de limfòcits T , com ocorre en la Encefalitis Rasmussen (RE), una síndrome autoimmunitari que sovint segueix a un episodi infecciós, que es manifesta per atacs epilèptics que són refractaris a drogues i requereix de l’eliminació quirúrgica de les regions cerebrals afectades. El quadre histològic d’aquestes regions és dominat per limfòcits T CD8 + infiltrants que són freqüentment posats en contacte directe amb neurones. Els limfòcits T citotòxics infiltrants mostren l’ús parcial de receptors indicatiu d’un procés específic d’antígens i actualment representa el mediador més probable de RE. La similitud histomorfológica a encefalitis vírica van ser especulacions àmpliament discutides. Mitjançant el temps els enterovirus, virus d’Epstein-Barr, herpes simples tipus I i també citomegalovirus han estat detectats en teixits cerebrals afectats. En la fase final la causa infecciosa desapareix com per a totes les altres malalties autoimmunitàries amb una sospita de patogènesi viral (3).
Això ha contribuït a la consideració que el SNC i el sistema immunitari interactuen de manera particular (4); d’allí la importància de conèixer els mecanismes relacionats a la defensa primària i específica de l’hostatger davant d’una infecció viral.
A més, els processos inflamatoris de l’SNC, com ara l’encefalitis, es caracteritzen per presentar un increment local en la concentració de les citocines, particularment de la Interleucina 1-Beta (IL-1b) i el factor de necrosi tumoral-alfa (TNF-a), les quals poden activar cèl·lules endotelials, i d’aquesta manera, promoure la migració de neutròfils a l’interior de el lloc inflamat. La cascada d’esdeveniments s’inicia amb activació de limfòcits T, la qual cosa inclou l’alliberament de potents citocines (IFN-gamma, IL-2, TNF) i la mobilització de macròfags que no solament ataquen el virus sinó també a l’hoste, causant danys severs en teixits i vasos sanguinis (5).
D’altra banda, la Encefalitis Equina Venezolana (EEV) és una infecció causada per un virus altament neurotròpic pertanyent a l’gènere alfavirus de la família Togaviridae (6, 7). La infecció viral per EEV, és transmesa per mosquits Aedes aegypti, taeniarhynchus (8), per membres de la família Culicidae i per dípters nematòcers de la família mosca negra; els rosegadors, rucs, cavalls, el bestiar boví, ratpenats, possiblement les aus i els gossos, es consideren reservoris de virus de EEV (9).
Estudis de la resposta immunitària a la infecció pel virus de EEV han estat enfocats principalment per a la generació de vacunes o soques atenuades en la producció d’anticossos neutralitzants amb la finalitat d’eliminar el virus en l’hoste. No obstant això, la immunitat mediada per anticossos, no és necessàriament l’únic mecanisme de protecció contra la infecció per aquest virus. Investigacions en les quals, ratolins que van ser tractats amb sobrenedant de cultiu de esplenocitos immunitzats, suggereixen que la protecció contra un atac letal pel virus de EEV pot ser intervinguda per la IL-1 i la IL-2 (10).
Tant el TNF com la IL-1, exhibeixen efectes antivirals directes que en part són mitjans per inducció de TNF-b o linfotoxina (LT), el qual és produït pels limfòcits T i altres cèl·lules, sent un 30% homòleg a l’TNF derivat dels macròfags i compleix moltes de les mateixes funcions. Els efectes biològics de LT són els mateixos que els de l’TNF, consistent amb la seva unió als mateixos receptors. No obstant això, a causa de que la quantitat de LT sintetitzada pels limfòcits T estimulats per antígens és molt menor que les quantitats de TNF produïts pels fagòcits mononuclears estimulats per LPS, la LT no és ben detectada en la circulació. Per tant, la LT és una citocina d’acció local i no un mediador d’injúria sistèmica (1).
La IL-2 és un factor de creixement acte i paracrino que secreten els limfòcits T activats i és essencial per a la proliferació clonal de la cèl·lula T. Les cèl·lules T que són estimulades per la IL-2, mostren un augment en la citotoxicitat i produeixen IFN-g Yby TNF-b, a més de factors de creixement de la cèl·lula b com la IL-4 i IL-6. La IL-2 estimula a les cèl·lules NK que tenen activitat citolítica augmentada (11).
Estudis de la resposta immunitària a la vacuna TC-83 en ratolins van identificar una resposta immunitària mediada pel patró TH1, amb activació local de cèl·lules TCD4 + i CD8 +, sent les cèl·lules T CD4 + el tipus de cèl·lules predominant després de la linfoblastogénesis virus-específica i que l’activació d’aquestes va ser també associada a una elevació de IL-2 (12).
L’IFN-g (Tipus II) posseeix certa activitat antiviral. És secretat per gairebé totes les cèl·lules T CD8 i per algunes T CD4 particularment les de l’subgrup TH1. És l’activador de macròfags més potent que es coneix. L’exposició a IFN-g augmenta considerablement l’activitat antimicrobiana dels macròfags i els indueix a secretar citocines com IL-1, 6, 8 i TNF-a; a més, augmenta l’activitat de les TH1 (11).
En relació a la IL-4, la seva principal font cel·lular són els limfòcits T CD4 + de la subpoblació TH2, així com també les cèl·lules mastoide activades i basòfils. Les seves accions biològiques inclou l’estimulació de reaccions intervingudes per eosinòfils, cèl·lules mastoide, estimulació de les cèl·lules B per a la producció d’IgE i supressió de reaccions dependents dels macròfags. Els anticossos IgE juguen un paper en la defensa intervinguda per eosinòfils contra helmints i infeccions per artròpodes. La IL-4 promou el desenvolupament de cèl·lules TH2 en la defensa de l’hoste sent la responsable de la inducció i expansió d’aquesta subpoblació. Aquesta citocina antagonitza els efectes d’activació de macròfags de l’IFN-g, d’aquesta manera inhibeix la resposta immunitària mediada per cèl·lules (1).
Es coneix relativament poc sobre els mecanismes patogènics de moltes infeccions virals; d’allí que en el present treball es va plantejar estudiar, a diferents estadis postinfecció, la resposta immunitària mediada per algunes citocines TH1, TH2 i proinflamatòries realitzant la quantificació de les mateixes tant en sèrum com en homogeneïtzats cerebrals de ratolins experimentalment infectats amb el virus de EEV .
Material i mètodes
Es van utilitzar dos grups de ratolins NMRI albins mascles, de 1-2 mesos d’edat amb un rang de pes de 25-30 grams, obtinguts de l’Bioterio de l’Institut Veneçolà d’Investigacions Científiques (IVIC); els quals van ser alimentats ad libitum en ambient a temperatura constant de 25 ° C. Cada animal de el grup experimental, va ser infectat intraperitonealmente amb 0,05 ml de suspensió viral que contenia 10 dosis letals 50 (10 DL50) de virus, suspeses en solució borat salina amb albúmina bovina a l’0,4%, estèril (13).
Es va utilitzar la soca Guajira de virus de EEV. L’estoc de virus es va preparar en cèl·lules VERO (cèl·lules de ronyó de mico verd africà), a una multiplicitat d’infecció de 1.0 UFP / cel. El títol d’infectivitat del cep inoculada va ser de 6,8×107 UFP / ml.
A l’1, 3 i 5 dies post-infecció, es va extreure sang completa per punció de el si orbital dels ratolins (n = 5 / grup × 5 assajos) la qual va ser centrifugada a 10.000 g x10 minuts per a l’obtenció de sèrum, dividit en alíquotes i emmagatzemat a 70 ° C per a la determinació de citocines. Posteriorment, els animals van ser sacrificats per dislocació cervical per l’obtenció dels seus cervells, prèvia perfusió. Els homogeneïtzats cerebrals es van preparar en suspensions a l’20% en memòria intermèdia Tris-HCl 50 mM pH 8, d’acord a el pes de la mateixa. Aquestes suspensions van ser centrifugades a 10.000 g × 5 minuts a 4 ° C, de les quals es van obtenir els sobrenadants per a la quantificació de citocines.
La determinació de les proteïnes en els homogeneïtzats cerebrals es va realitzar pel mètode de Lowry (14).
Determinació de IL-1b, IL-4, IL-2, TNF-a i IFN-g
els nivells de citocines es van determinar en sèrum i homogeneïtzats cerebrals en forma quantitativa a través de la tècnica d’ELISA de fase sòlida, d’alta sensibilitat i especificitat (BioSource Internacional, Inc.) expressant els resultats en pg / ml.
Anàlisi estadística
Les dades van ser analitzades aplicant el programa estadístic GraphPad 4.0 utilitzant l’anàlisi de variància ( ANOVA), seguit de el post-test de Bonferroni, considerant significatius als valors de p < 0,05.
RESULTATS
Es va observar un increment significatiu de la IL-1 b (p < 0,001) a el 1r, 3r i 5è dia post-infecció en homogeneïtzats cerebrals d’animals infectats amb EEV (dia 1r pi = 622 ± 83,03 pg / ml; dia 3r pi = 872,4 ± 96,8 pg / ml; dia 5è pi = 720 ± 90,2 pg / ml), a l’ésser comparats amb la resta dels grups (fig. 1).
Fig. 1. Concentracions d’IL-1b en sèrum i homogeneïtzats cerebralesa de ratolins infectats amb el virus de Encefalitis Equina Venezolana.
Els resultats obtinguts per a les concentracions de TNF-a llançar un significatiu augment (p < 0,001) en sèrum (dia 1r pi = 365 ± 66,91 pg / ml; dia 3r pi = 392,7 ± 84,14 pg / ml; dia 5è pi = 408,3 ± 76,95 pg / ml), i homogeneïtzats cerebrals (dia 1r pi = 960,52 ± 52,1 pg / ml; dia 3r pi = 880 ± 49,3 pg / ml; dia 5è pi = 1.334,9 ± 60,1 pg / ml), en el grup de ratolins infectats en tots els períodes pi (fig. 2), observant-se diferències entre la resposta local i la sistèmica.
Fig. 2. Concentracions de TNF-a en sèrum i homogeneïtzats cerebralesa de ratolins infectats amb el virus de Encefalitis Equina Venezolana.
Les concentracions d’IFN-g en ratolins infectats amb el virus de EEV, tant en sèrum (dia 1r pi = 2.930,0 ± 212,6 pg / ml; dia 3r pi = 1.931,0 ± 233,2 pg / ml; dia 5è pi = 2.422,0 ± 347,9 pg / ml) com en homogeneïtzats cerebrals (dia 1r pi = 2.924,0 ± 190,9 pg / ml; dia 3r pi = 2.050,0 ± 320,2 pg / ml; dia 5è pi = 2.706,0 ± 496,5 pg / ml) van mostrar un increment significatiu (p < 0,001) a l’comparar-les amb els seus respectius controls. Aquesta diferència es manté en tots els períodes estudiats, evidenciant que no hi va haver diferència en la producció local d’aquesta citocina pel que fa a la concentració sistèmica (fig. 3).
Fig. 3. Concentracions de Interferon-g en sèrum i homogeneïtzats cerebralesa de ratolins infectats amb el virus de Encefalitis Equina Venezolana.
En relació a la IL-2 es van observar diferències ( p < 0,05) a l’comparar el grup de homogeneïtzats cerebrals d’animals no infectats pel que fa a el sèrum d’animals tant infectats com no infectats amb el virus de EEV a l’1, 3 i 5 dia pi (1er dia pi = 80,70 ± 15,54 pg / ml; 3er dia pi = 57,954 ± 10,89 pg / ml; 5è dia pi = 54,33 ± 6,88 pg / ml). De la mateixa manera, es van observar diferències significatives (p < 0,05) de homogeneïtzats cerebrals d’animals infectats amb EEV (1er dia pi = 52,43 ± 11,46 pg / ml; 3er dia pi = 73,03 ± 28,86 pg / ml; 5è dia pi = 57,66 ± 26,36 pg / ml) en relació a l’sèrum no infectat i el sèrum d’animals infectats amb EEV en tots els períodes estudiats ( Fig. 4).
Fig. 4. Concentracions d’IL-2 en sèrum i homogeneïtzats cerebralesa de ratolins infectats amb el virus de Encefalitis Equina Venezolana.
La IL-4 no va llançar diferències estadísticament significatives durant els dies estudiats (Fig.5).
Fig. 5.Concentracions en sèrum i homogeneïtzats cerebralesa d’IL-4 en ratolins infectats amb el virus de Encefalitis Equina Venezolana.
DISCUSSIÓ
Els resultats de la present investigació evidencien que la infecció pel virus de EEV desencadena un procés inflamatori en el SNC de ratolins infectats amb aquest agent viral caracteritzat per l’augment de la producció de citocines proinflamatòries com la IL-1b i TNF -a, tant en sèrum com en homogeneïtzats cerebrals. Així com també es va demostrar síntesi incrementada de l’IFN-g associada a aquesta infecció, troballa que concorda amb el reportat per Greider i col. (15) en ratolins infectats amb el virus de EEV, en els quals van observar que l’expressió genètica d’aquesta citocina, es troba augmentada en relació al seu control.
Malgrat que els arbovirus, són la causa més comuna coneguda de encefalitis, el paper exacte de la BHE és escassament conegut; però, l’increment de la seva permeabilitat, apareix com un component vital de la patologia encefalítica viral (16)
Els esdeveniments fisiopatològics que ocorren amb la ruptura de la BHE, probablement són comuns a moltes formes d’encefalitis viral. Això suggereix que canvis similars poden ocórrer en humans infectats amb virus de encefalitis de les famílies de Flavivirus i togavirus, com ara Virus de West Nile o Virus de EEV (16).
En l’última dècada, Paul i col. (17), s’han referit l’elevada regulació natural de la resposta immunitària en el SNC com a privilegi immunitari, el qual es refereix a un control actiu de la resposta immunitària en el cervell. En el context de l’parènquima cerebral, les cèl·lules presentadores d’antigen; així com també altres cèl·lules de la glia i les neurones per si mateixes, modulen les respostes de les cèl·lules T, orientat cap a una funció neuroprotectiva i en menor grau cap a una funció destructiva. A més, les neurones són considerades que posseeixen les seves pròpies estratègies per limitar la replicació i propagació de virus citopàtics. Aquestes estratègies afavoreixen l’eliminació no citolítica dels virus o promouen l’establiment d’una infecció persistent no citolítica. L’IFN-g és considerat com un important contribuent de l’eliminació de manera no citolítico, tot i que encara falta per determinar com actua (17). Hausmann i col. (18), també han demostrat, en models experimentals, que l’IFN-g juga un paper important en la resistència de l’hoste contra infeccions de l’SNC produïdes pel virus Borna. A més, suggereixen que l’IFN-g podria funcionar com un factor neuroprotector que probablement limitaria la pèrdua de neurones en el curs de la resposta immunitària antiviral en el cervell.
Les elevades i sostingudes concentracions d’IFN-g en sèrum i homogeneïtzats cerebrals observades en el present estudi suggereixen la preservació de la integritat neuronal dels models múrids infectats amb el virus de EEV, inhibint la disseminació de virus en el SNC per eliminació o clearence i sustentant la hipòtesi que l’IFN-g juga un paper crític en la protecció contra aquesta infecció.
En relació a això, Parra i col. (19) van demostrar el paper potencial de l’IFN-g com a mediador per controlar la replicació viral en oligodendroglias de ratolins deficients de secreció d’aquesta citocina i infectats amb el virus d’hepatitis, soca JHM (JHMV). Aquests ratolins van exhibir simptomatologia clínica i mortalitat incrementada associades a la persistència de virus, demostrant incapacitat per controlar la replicació viral.
Altres autors han estudiat el paper de l’IFN-g, tal com ho demostren Rodríguez i col. (20), els qui van avaluar el paper de l’IFN-g en la protecció neuronal per infecció de l’SNC posterior a dany induït per virus en ratolins IFN-g – / – i IFN-g + / + amb haplotip H-2b de l’complex principal d’histocompatibilitat (HMC) i infectats intracerebralment amb el virus Theiler d’encefalitis murida. Els ratolins IFN-g – / – desenvolupen persistència viral en cèl·lules glials de la matèria blanca i van exhibir desmielinització associada a medul·la espinal, la qual cosa va provocar mort i deficiències neurològiques severes als 16 dies d’infecció a l’comparar-los amb els controls, evidenciant que l’IFN -g exerceix un efecte neuroprotector.
De la mateixa manera, la producció de TNF-a ha estat associada s efectes tant beneficiosos com perjudicials.En relació a això, s’ha informat per alguns autors com beneficiós pel fet que el pas de TNF-a sèric a través de la barrera de la medul·la espinal, després d’una injúria a la mísma, permet un perfil de citocines òptim, específic de temps i regió, bloquejant efectes deleteris, mentre reforça els efectes beneficiosos, que podrien facilitar la seva restabliment funcional (21).
No obstant això, per a altres autors, podria arribar a ser perjudicial tal com ho descriu Schoneboom i col. (22), els quals van obtenir nivells elevats de TNF-a en cultius d’astròcits infectats amb el virus de EEV. En un altre estudi, realitzat per aquests investigadors (23), es va evidenciar un increment en la producció de múltiples gens proinflamatoris entre ells el TNF-a, per la qual cosa suggereixen que la resposta inflamatòria induïda per aquest, podria contribuir a la neurodegeneració en la infecció per EEV.
En el present estudi es va observar una elevació en les concentracions sèriques de TNF-a, els quals es van incrementar a mesura que transcorrien els dies post-infecció; en els homogeneïtzats cerebrals aquestes concentracions es van trobar encara més elevades, la qual cosa indicaria un dany potencialment més gran en el SNC provocant probablement dany neurològic per citotoxicitat cel·lular, alteració en la permeabilitat vascular i en conseqüència una elevació en la taxa de mortalitat dels ratolins infectats.
La IL-1b és una citocina proinflamatòria que actua com a mediador en una gran quantitat de patologies de l’SNC. És interessant ressaltar que durant la infecció experimental pel virus de EEV, la IL-1b és capaç d’induir activitat antiviral a través de l’activació i potenciació de les cèl·lules assassines naturals (NK) (24). En aquest estudi, l’elevada producció sèrica i cerebral en ratolins infectats pel virus de EEV semblés respondre a l’activitat antiviral d’aquesta citocina. Alguns autors (25) reporten en el sèrum de ratolins infectats amb el virus de EEV i tractats amb melatonina (MLT), augment d’IL-1b, i suggereixen que juga un paper rellevant en la resolució de la infecció. De la mateixa manera, Bonilla i col. (26) han suggerit que un descens en els nivells de TNF-a, amb un augment en els de IL-1b estimulats per la MLT al cervell de ratolins infectats amb el virus de EEV, poden explicar entre altres aspectes, l’increment en la supervivència dels animals infectats tractats amb MLT.
En els nostres resultats, s’evidencia que la IL-4 no va llançar variacions importants en la seva concentració, per la qual cosa se suggereix que la infecció pel virus de EEV no estimula una resposta immunitària dependent de el patró TH2 a través de la IL-4. No obstant això, cal considerar la possibilitat que durant aquest estudi la replicació viral hagi estat augmentada, prou com per permetre que s’activessin els mecanismes immunitaris necessaris per a l’expressió d’aquestes citocines. D’altra banda, en estudis posteriors, s’han d’avaluar altres citocines pertanyents a aquests patrons a fi de determinar si certament aquest virus és capaç d’inhibir la producció de les citocines que intervenen en la resposta TH2.
Els resultats obtinguts en el nostre estudi, demostren que la infecció causada pel virus de EEV, activa la producció d’IL-1b, IFN-g i TNF-a en els homogeneïtzats cerebrals, possiblement per producció d’aquestes citocines en el teixit cerebral, la qual cosa probablement contribueix a una elevació sèrica d’aquestes citocines, suggerint que les mateixes podrien estar involucrades en la resposta immunitària primerenca a virus de EEV durant la infecció primària. Es fa necessari, realitzar estudis posteriors que ajudin a aclarir si l’increment de producció d’IL-1b i TNF-a i IFN-g, és el producte de producció local en el SNC o que el trencament de la BHE permet el pas de les citocines abans esmentades i això contribueixi o no a la patogènesi de la infecció per EEV.
AGRAÏMENT
a el Consell de Desenvolupament Científic i Humanístic de la Universitat de Zulia (COMTES Projecte Nº CC-0141-05) i a el Fons Nacional de Ciència, Tecnologia i Innovació (FONACIT Projecte Nº 1998003550), pel finançament atorgat.
REFERÈNCIES
1. Abbas A, Lichtman AJ. Cellular and Molecular Immunology, 5ta Edition (USA): Elsevier Science; 2003, pàg 266-270, 356.
2. Griffin D. cytokines in the brain during viral infection: Clues to HIV-associated dementia. J Clin Invest 1997; 100: 2948-2951.
3. Merkler D, Horvath I, Bruck W, Zinkernagel RM. Viral déjà vu elicits organ-specific immune disease independent of reactivity to self. J Clin Invest 2006; 116: 1254-1263.
4. Fabris f, sgarabotto d, zanon e, francavilla f, zaggia f, cadtirbbi p, girolami A. L’efecte d’un sol curs d’Alpha-2b- Interferó en pacients amb trombocitopènia immune i immune idiopàtica crònica del VIH. Autoimmunity 1993; 14: 175-179.
5. Agamanolis D. Infeccions del sistema nerviós. Neuropatologia. Disponible a http://www.neuropathologyweb.org/chapter5/chapter5dViruses.html
6. Organització Paramericana de la Salud. Sistema d’Informació i Vigilància Epidemiológica de l’Encefalitis Venezolana en la Regió de les Amèriques. Rev Panam Salud Pública 1999; 6 (2): 128-138.
7. Mathews J, roehrig J. Especificitat de la resposta immune de la cèl·lula murina T-ajudanta a diversos alfàpprirus. J Gen Virol 1989; 70: 2877-2886.
8. Cupp e, Scherer W, Lok J, Brenner R, Dziem G, Ordoñez J. Estudis entomològics en un enzoot Vee Vírus enfocats a Guatemala. Am J Trop Med Hyg 1986; 35: 851-859.
9. Homan E, Zuluaga F, Yuill T, Lorbacher H. Estudis sobre la transmissió del virus VEE per una Simulidae colombiana (Diptera). Am J Trop Med Hyg 1985; 34: 799-804.
10. Lukaszewski r, Brooks T. Alpha Pegylated Interpheron és un tractament eficaç per a virus de l’encefalitis de l’equí de Virulent Veneçolans i té efectes profunds sobre la resposta de l’amfitrió a la infecció. J virol. 2000, 74: 5006-5015.
11. Estimacions D, Terr A, Praslow T. Inmunología Básica y Clínica. 8Va edición: El Manual Moderno S.A. de C.V; 1996, p 133-155.
12. Jones l, bennett a, moss s, gould e, phillpotts R. L’activitat cel·lular de R. citotòxica no és detectable a Veneçuela, els ratolins infectats per virus. Recerca de virus 2003; 91: 255-259.
13. Lennette E. Principis generals subjacents diagnòstic de laboratori d’infeccions virals i rickettsials. EN: Lennette E i Schmidt N. Procediments diagnòstics per a infeccions virals i rickettsials. Nova York: American Public Health Association, Inc.; 1969. P 1-65.
14. Sapan C, Lundblad R, Preu N. Revisió. Tècniques d’assaig de proteïnes colorimètriques. Biotechnol Appl BioChem 1999; 29: 1-14
15. greider f, davis b, zhou x, chen sh, finkelman f, gause W. Cinètica d’expressió citocina i regulació de la protecció següent Infecció amb virus de l’encefalitis de l’encefalitis veneçolana de clons molecularment clonats. Virologia 1997; 233: 302-312.
16. Olsen A, Morey JD, Smee DF, SIDWELL RW. Correlació entre desglossament de la barrera de la sang i el resultat de la malaltia de l’encefalitis viral en ratolins. Investigació antiviral 2007; Volumen, no … 104-112.
17. Paul S, Ricour C, Sommereyns C, Sorgeloos F, Michiels T. T. Tipus de resposta interferó en el sistema nerviós central. Bioquemie 2007; 89: 770-778.
18. Hausmann J, Pagentecher A, Baur K, Richter K, Rziha HJ, Staeheli P. CELLS T CELLS NECESSITA GAMMA INTERFERON A CLEAR BORNA MALALTIA Virus del cervell i prevenir els danys neuronals mediats pel sistema immune. J Virol 2005; 79: 13509-13518.
19. Parra B, Hinton D, Martin N, Bergmann C, Lin M, Yang C, Stohlman S. IFN-G és necessari per a la liquidació viral del nerviós central Sistema Oligodendroglia. J Inmmunol 1999; 162: 1641-1647.
20. Rodríguez m, Zoecklein l, Howe c, Pavelko K, Gamez J, Nakane S, Paphe L. Gamma Interferon és fonamental per a la neteja i protecció viral neuronal una tensió susceptible del ratolí després de la infecció per virus de l’encefalomielitis de l’encefalomielitis de primerenca intracranial. J Virol 2003; 77: 12252-12265.
21. PAN W, ZHANG L, LIAO J, CSERNUS B, Kastin A. Augment selectiu de la permeació de TNFA a través de la barrera de la medul·la espinal de sang després de SCI. Journal of Neuroimmunology 2003; 134: 11-117.
22. Schoneboom b, fultz m, moliner t, mckinney l, greider f. astròcits com a objectius per a la infecció de virus de l’encefalitis veneçolana. J Neurovirol 1999; 5: 342-354.
23. Schoneboom b, Lee j, greider F. Expressió primerenca de la IFN-Alpha / Beta i Inos al cervell de l’equí de virus de l’encefalitis veneçolana. J Interferon Cytokine Res 2000; 20: 205-215.
24. Huprikar j, dal canto mc, rabinowitz sg. Protecció contra la infecció per virus de l’encefalitis (VEE) de la protecció contra les cèl·lules de melsa immune. J Neurol Sci 1990; 97: 143-153.
25. Valero n, Bonilla e, Pons h, Chacín-Bonilla l, Añez F, Espina Lm, Medina-Leendertz S, García-Tamayo J. Melatonin indueix Canvis en citocines sèrums en ratolins infectats amb el virus de l’encefalomielitis equina veneçolana. Trans R SoC Trop Med Hyg 2002; 96: 348-351.
26.Bonilla E, Valero N, Chacín-Bonilla L, Pons H, Larreal Y, Medina S, Espina L. Melatonina augmenta la interleucina-1b i disminueix el factor de necrosi tumoral alfa al cervell dels ratolins infectats amb virus d’encefalomielitis equina veneçolana. Neurochem Res 2003; 28: 687-692.