Lipases i Esterases són biocatalitzadors versàtils i els enzims més utilitzats per a finalitats biotecnològiques. Ophiostoma Piceae produeix un esterol esterasa (OPE) amb alta afinitat en triglicèrids i esterols que són capaços d’hidrolitzar de manera eficient les barreges naturals d’aquests compostos de les extractives de fusta. A causa d’aquestes propietats, s’ha proposat l’ús d’aquest enzim per disminuir el problema de la deposició de llançament en fusta dura i polpa de fusta tova. La seqüència de proteïnes madures de l’OPE s’ha expressat amb èxit en les soques MUT + i Muts Pichia Pastoris, que difereixen en la seva capacitat de metabolitzant metanol com a inductor d’expressió, cosa que comporta nivells més alts d’activitat que els obtinguts en les cultures O. Piceae Erlenmeyer. A més, la producció d’enzim recombinant (OPE *) va ser escalat al bioreactor que operava en processos de lot i alimentació per lots utilitzant les dues soques. En totes les condicions assajades els nivells d’activitat van ser més alts que els obtinguts en el matràs Erlenmeyer, aconseguint la màxima activitat (30 U / ML) amb MUTS STRAIN operant en una estratègia de co-alimentació de Sorbitol durant el cultiu de Fed-lots.
The Kinetic La caracterització de la proteïna recombinant va mostrar un enzim millorat amb una major eficiència catalítica aparent que l’enzim natiu (~ 8-plecs) per a tots els substrats assajats (p-nitrofenol, glicerol i colesterol). Ni el major nivell de n-glicosilació ni la presència de residus de metionina oxidats a la regió d’enquadernació de substrat d’OPE * semblen ser responsables d’aquesta millora. Els estudis de dicroisme circulars van mostrar canvis en els seus espectres, però l’anàlisi de dades (mètode K2D de Dichroweb) va resultar en un contingut idèntic de -hèlix (0,46) i -full (0,23) per a ambdues proteïnes, de manera que no es van revelar canvis en la seva estructura secundària. La principal diferència es va trobar a la seqüència N-terminal d’OPE * que contenia 6-8 residus que l’OPE. Aquests es van derivar del vector utilitzat per a l’expressió de proteïnes juntament amb un processament ineficient del factor d’aparellament prèviament prèvia de Saccharomyces Cerevisiae utilitzat per a la secreció. Això afecta l’estat d’agregació detectat a l’OPE * (inferior a la notificació de l’OPE) millorant la seva eficiència catalítica. S’han estudiat noves aplicacions biotecnològiques per a aquest enzim, ja que: i) és capaç de fer un acetat de polivinil (PVAt), un dels compostos identificats en els stickies formats durant la producció de paper reciclat, el que s’ha confirmat mitjançant l’espectroscòpia de ftir, l’anàlisi de l’espectrometria de masses i Titrimetria. Els resultats aconseguits en les condicions assajades van ser comparables a les que es van comercialitzar específicament per a aquest objectiu Optizyme® 530. II) Sintetitzen els èsters en els mitjans orgànics i s’ha utilitzat en la síntesi dels èsters de fitosterol, com a productes nutracèutics. En aquest cas, s’han estudiat la influència del substrat i de la concentració enzimàtica i l’efecte de diferents dissolvents orgànics i sense aigua en les reaccions. Els resultats van mostrar que els enzims d’O. Piceae semblen tenir una activitat sintètica similar, encara millor en algunes condicions, a l’enzim comercial de C. rugosa utilitzat; Obtenir una producció global d’esters de STERYL de 60-80% en 24 hores depenent de l’excés molar del substrat, fet que ha estat patentat. En relació amb la seva potencial aplicació industrial, l’enzim natiu ha estat immobilitzat amb èxit a través de grups epoxi activats en el nou operador Dilbeads ™. El biocatalitzador immobilitzat va mostrar importants estabilitats en valors de pH i temperatures altes que els enzims solubles i van poder hidrolitzar el cholserily oleat al llarg de diversos dies, quan es va embalar com a bioreactor. Finalment, s’han fet diferents experiments de cristal·lització amb l’enzim natiu. No obstant això, el seu comportament elevat d’agregació no va permetre l’obtenció de cristalls de bona qualitat per a la difracció de raigs X.
Las Lipasas y Esterasas Son Biocatalizadores Versátiles i el Tipo Más Utilitzat d’Enzimas Para multes biotecnològiques. El Hongo Ophiostoma Piceae produeix un Esterol Esterasa (OPE) amb Alta Afinitat Sobre Triglicéridos i Etesteres d’Esterol Siendo Capaz de Hidrolizar Eficazmente Mezclas Naturals d’estos Compuestos A Partir d’Extractos de Madera. Debido a Estas Propiedades, SE POPUESTO EL USO D’ESTA ENZIMA PARA DISMINUIR EL PROBLA DE LA DEPOSICIÓ DE PITCH EN LA FABRICACIÓ DE PAQUES DE MADERA PROCESSOS DE CONIFERAS I DONDOSES. La Secuencia de la Proteína madura de la Ope Se ha expresado con éxito en cepas mut + i butlletins de Pichia Pastoris, que difieren en su capacitat de metabolitzar Metanol Como Inductor de la Expresión, Dando Como resultado Más Altos de Actividad Que los obtenidos en cultiu en erlenmeyer de o. piceae.A més, la producció de l’enzim recombinant (OPE *) es va escalar a bioreactor operant en discontinuoy discontinu-alimentat utilitzant les dues soques. En totes les condicions assajades els nivells d’activitat van ser més grans que els obtinguts prèviament en matràs Erlenmeyer, aconseguint l’activitat màxima (30 U / ml) amb la soca Muts operant en una estratègia amb sorbitol com co-substrat durant cultiu en discontinu alimentat. La caracterització cinètica de la proteïna recombinant va mostrar un enzim millorada amb una eficàcia catalítica aparent més elevada que l’enzim nativa (~ 8 vegades) per a tots els substrats assajats (èsters de p-nitrofenol, glicerol i colesterol). Ni el major nivell de N-glicosilació ni la presència de residus de metionina oxidats a la regió d’unió a el substrat d’OPE * semblen ser responsables d’aquesta millora. Estudis de dicroisme circular van mostrar canvis en les seves espectres, però l’anàlisi de les dades (mètode K2d de DichroWeb) va donar com a resultat un contingut idèntic a hèlixs α (0,46) i làmines β (0,23) per a les dues proteïnes indicant l’absència de canvis en la seva estructura secundària. Ara bé, la principal diferència en elles es va trobar en la seqüència N-terminal de l’OPE * que contenia 6-8 residus més que OPE. Aquests residus procedien de el vector utilitzat per a l’expressió de la proteïna i de el processament ineficient el factor α de Saccharomyces cerevisiae utilitzat per a la secreció. Això afecta l’estat d’agregació detectat en OPE * (inferior a la descrita en OPE) el que millora la seva eficiència catalítica.
Donat el seu potencial, s’han estudiat noves aplicacions biotecnològiques per aquest enzim: i) desacetilación d’acetat de polivinil ( PVAc), un dels compostos identificats en els stickies formats durant la producció de paper reciclat. La capacitat de l’enzim per realitzar tal reacció ha estat confirmada mitjançant espectroscòpia de FTIR, anàlisi d’espectrometria de masses i titulació; de manera que, els resultats obtinguts, en les condicions d’assaig, mostren una activitat semblant a la de l’enzim Optizyme® 530 comercialitzada per a aquest fi. ii) Síntesi d’èsters en mitjans orgànics, concretament d’èsters de fitoesterol, com a productes nutracèutics. En aquest cas, la influència de la concentració d’enzim i substrat i l’efecte de diferents dissolvents orgànics costat de la presència i absència d’aigua a les reaccions han estat estudiats. Els resultats obtinguts han permès patentar l’ús de l’enzim per a tal fi a l’ésser semblants als assolits amb l’enzim comercial de C. rugosa emprada en la comparació i fins i tot una mica millors en algunes circumstàncies. Es va observar un total de producció d’èsters d’esterol de l’60% en 24 hores quan es va usar un petit excés de substrat augmentant a l’80% amb excessos grans. Pensant en el seu possible ús industrial, l’enzim nativa ha estat immobilitzada amb èxit a través de grups epoxi activats en un nou suport anomenat Dilbeads ™. El biocatalizador immobilitzat resultar ser significativament més estable a valors alts de pH i temperatura que l’enzim soluble i conservar la capacitat d’hidrolitzar oleat de colesterilo durant diversos dies quan va ser empaquetat a manera de bioreactor. Finalment, s’han realitzat diferents experiments de cristal·lització amb l’enzim nativa. No obstant això, l’alta tendència que mostra a formar agregats impedir l’obtenció de cristalls de bona qualitat per als estudis de difracció de raigs X.