Efecte de la inoculació amb bacteris rizosféricas i Trichoderma en blat (Triticum aestivum L.)

ARTICLE D’INVESTIGACIÓ

Efecte de la inoculació amb bacteris rizosféricas i Trichoderma en blat (Triticum aestivum L.)

Effect of the inoculation with rhizospheric bacteri and Trichoderma in wheat (Triticum aestivum L.)

C. J. Bécquer1, G. Lazarovits2, Laura Nielsen2, Maribel Quintana1, Modupe Adesina2, Laura Quigley2, I. Lalin2 i C. Ibbotson2

1 Estació Experimental de Sancti Spíritus, Apt. 2255, ZP 1, CP 62200 , Sancti Spíritus, Cuba. Correu electrònic: [email protected] de 2 Southern Crop Protection and Food Research Centre, London, Ontario, Canadà (Agriculture and Agri-Food Canada)

RESUM

Es va realitzar un experiment en hivernacle per avaluar en blat l’efecte de la inoculació amb les rizobacterias Sinorhizobium meliloti, Azospirillum zeae i Azospirillum canadense, i amb el fong Trichoderma harzianum. El disseny experimental va ser completament aleatoritzat, amb quatre rèpliques i cinc plantes per tractament. Es va utilitzar un tractament fertilitzat amb NH4NO3 (150 ppm / kg de sòl), un control absolut i 13 tractaments inoculats. Es va avaluar el pes sec aeri, el pes sec radical, la longitud d’la tija, la germinació i el contingut de clorofil·la foliar. L’aplicació de Trichoderma per separat va tenir un efecte positiu en la longitud de la tija (5,58 cm); però la seva presència directa en algunes combinacions amb els bacteris rizosféricas no va ser positiva ni va mostrar resultats uniformes en les variables en el moment de la sembra, o posterior a aquesta. No obstant això, es va destacar el tractament Trichoderma + NRG34-DS2 5d en el pes sec radical (0,45 g / planta) i en el pes sec aeri (0,58 g / planta); així com el tractament A2-N7, en el contingut de clorofil·la (40,35 spads / planta) i la longitud de la tija (5,50 cm). Es conclou que l’aplicació simple de Trichoderma no va exercir un efecte positiu en la majoria de les variables ni els tractaments van influir positivament en la germinació. Es recomana avaluar Trichoderma + NRG34-DS2 5d i A2-N7 en experiments de camp.

Paraules clau: Azospirillum, fongs, plantes, Sinorhizobium.

ABSTRACT

A trial was conducted in greenhouse to evaluate in wheat the effect of the inoculation with the rhizobacteria Sinorhizobium meliloti, Azospirillum zeae and Azospirillum canadense, and with the fungus Trichoderma harzianum. The experimental design was completely randomized, with four replications and five plants per treatment. A treatment fertilized with NH4NO3 (150 ppm / kg of soil), an absolute control and 13 inoculated treatments, were used. The aerial dry weight, root dry weight, stem length, germination and content of leaf chlorophyll were evaluated. The separate application of Trichoderma had a positive effect on stem length (5,58 cm), but its presence in some combinations with rhizospheric bacteri was not positive and at the moment of sowing, or afterwards did not show uniform results in the variables. Nevertheless, the treatment Trichoderma + NRG34-DS2 5d stood out in the root dry weight (0,45 g / plant) and the aerial dry weight (0,58 g / plant); as well as the treatment A2-N7, in the chlorophyll content (40,35 SPADS / plant) and stem length (5,50 cm). It is concluded that the simple application of Trichoderma did not exert a positive effect on most variables, and none of the treatments Positively influenced germination. It is recommended to evaluate Trichoderma + NRG34-DS2 5d and A2-N7 in field experiments.

Key words: Azospirillum, fungi, plants, Sinorhizobium.

INTRODUCCIÓ

La preocupació actual pels efectes col·laterals dels agroquímics ha motivat un interès creixent per aprendre més sobre la cooperació entre les poblacions microbianes de la rizosfera i la forma en què aquestes poguessin ser aplicades en l’agricultura (Barea et al., 2004).

Els rizobios es consideren, generalment, com a socis microbians simbiòtics de les lleguminoses, a través de la formació de nòduls fixadors de nitrogen (Antoun i Prévost, 2005). No obstant això, aquests bacteris poden produir fitohormones i solubilitzar fosfats orgànics i inorgànics, que tenen un paper important en el creixement vegetal (Antoun et al., 1998).

Les espècies pertanyents a el gènere Azospirillum també es consideren promotores de el creixement vegetal (Zahir et al., 2004). Aquests bacteris, a més de la seva activitat dinitrofijadora, tenen una producció significativa de fitohormones, les quals afecten la morfologia radical i, per tant, milloren la presa de nutrients de terra.

Així mateix, el fong filamentós Trichoderma spp., Que exerceix un antagonisme eficaç amb fitopatògens (Howell, 1998), indueix mecanismes de defensa i estimula el creixement vegetal (Harman et al., 2004).

Hi ha informes previs sobre els avantatges de la coinoculación de plantes amb bacteris rizosféricas i Trichoderma (Bécquer et al., 2004; Rudresh et al., 2005; Saber et al., 2009; Shaban i El-Bramawy , 2011). No obstant això, encara queden moltes interrogants per resoldre, com, per exemple, la manera en què aquestes combinacions es poden aplicar en dependència de el tipus de planta, el sòl i les condicions ambientals, i quines espècies microbianes són les més adequades en aquestes combinacions. Per això, l’objectiu d’aquest experiment va ser avaluar l’efecte de la inoculació combinada de Sinorhizobium, Azospirillum i Trichoderma en blat, en condicions controlades i en diferents moments, per la seva futura aplicació en la pràctica agrícola.

MATERIALS I MÈTODES

Procedència de les soques de Azospirillum i Sinorhizobium. Es van utilitzar les soques comercials N7 i DS2, pertanyents a Azospirillum zeae i Azospirillum canadense, respectivament donades per Agriculture and Agri-Food Canada (London, Ontario, Canadà); així com els ceps comercials A2 i NRG34, pertanyents a Sinorhizobium meliloti donades per Agriculture and Agri-Food Canada (Crops Research and Development Centre, Quebec, Canadà).

Procedència de la soca de Trichoderma. Es va utilitzar la soca comercial TH-382 (Trichoderma harzianum), donada per Agriculture and Agri-Food Canada (Southern Crop Protection and Food Research Centre, Ontario, Canadà).

Varietat de blat utilitzada i procedència. Es va avaluar la varietat de blat (Triticum aestivum L.) Pioneer 25R47, donada per A & L Canada Laboratories (Ontario, Canadà), i recomanada per aquesta institució per al tipus de sòl que es va utilitzar en l’experiment (Lazarovits, G., com. pers.).

Procediment experimental

Creixement i aplicació de les soques bacterianes. Els ceps van créixer en medi sòlid llevat-manitol (Vincent, 1970) i ressuspendre en medi líquid llevat-manitol, fins a aconseguir un títol de 107-108 UFC / ml. El inòcul bacterià es va aplicar en el moment de la sembra (1,0 ml / llavor) o posteriorment (1,0 ml / planta) a aquesta, amb dilució prèvia de 01:10 en una solució salina estèril de 0,85% de NaCl. Als cinc dies de la sembra es va aplicar una segona inoculació, amb la mateixa concentració cel·lular (Lupwayi et al., 2004).

Creixement i aplicació del cep fúngica. El inòcul fúngic es va preparar en forma de suspensió conidial, a l’barrejar un cultiu que tenia 10 dies de sembrat en PDA (papa dextrosa agar) amb aigua destil·lada i Tween-80 (0,01%), per la qual cosa es va raspar la superfície de l’ mitjà amb un agitador de vidre estèril. El títol final de la suspensió va ser de 106-107 conidis / ml (Wolffhechell i Jensen, 1992). Les suspensions conidiales es van inocular a les plantes d’acord amb el tractament utilitzat, de manera simple, o en combinació amb els inòculs bacterians.

Sembra i avaluació de l’experiment. Es van utilitzar tests plàstiques que contenien 0,90 kg de sòl sense esterilitzar, que es colectó en àrees pertanyents a Agriculture and Agri-Food Canada, Estació Experimental Delhi (London, Ontario, Canadà) (42 ° 52 N, 80 ° 32 O) . Aquest sòl es classifica com Luvisol Marró-Brunosólico Gris (Brunisolic Gray Brown Luvisol, Canadian System of Soil Classification) segons l’informat per Chapman i Putman (1966) i es caracteritza pel predomini de sorra (88%), amb la composició química : N: 0,01%; MO: 1,0%; P2O5: 217 ppm; K2O: 101,0 ppm, NaCl: 6,0 ppm, Mg: 115,0 ppm; Ca: 62,0 ppm; pH: 6,0. A cada test es van sembrar nou llavors, sense esterilitzar. L’avaluació es va realitzar a les tres setmanes de la sembra, d’acord amb el que recomana per Somasegaran i Hoben (1994).

Disseny experimental i tractaments. Es va utilitzar un disseny completament aleatoritzat, amb 15 tractaments-quatre rèpliques:

1. Control fecundat químicament (NH4NO3: 150 ppm N / kg de sòl), segons les recomanacions de fertilització nitrogenada per a aquest tipus de sòl (Lazarovits, G., com. pers.).
2. A2-N7 (aplicació en el moment de la sembra).
3. A2-DS2 (aplicació en el moment de la sembra).
4. Trichoderma (aplicació en el moment de la sembra).
5. A2-DS2-Trichoderma (aplicació de les tres soques bacterianes en el moment de la sembra).
6. A2-N7-Trichoderma (aplicació de les tres soques en el moment de la sembra).
7. NRG34-DS2-Trichoderma (aplicació de les tres soques en el moment de la sembra).
8. Trichoderma (aplicació en el moment de la sembra) + A2-DS2 5d. (Aplicació de les dues soques bacterianes als cinc dies posteriors a la sembra).
9. Trichoderma (aplicació en moment de la sembra) + A2-N7 5d. (Aplicació de les dues soques bacterianes als cinc dies posteriors a la sembra).
10. Trichoderma (aplicació en el moment de la sembra) + NRG34-DS2 5d.(Aplicació de les dues soques bacterianes als cinc dies posteriors a la sembra).
11. NRG34-DS2 (aplicació de les dues soques bacterianes en el moment de la sembra).
12. A2-DS2 (aplicació de les dues soques bacterianes en el moment de la sembra) + Trichoderma 5d. (Aplicació de l’fong als cinc dies posteriors a la sembra).
13. A2-N7 (aplicació de les dues soques bacterianes en el moment de la sembra) + Trichoderma 5d. (Aplicació de l’fong als cinc dies posteriors a la sembra).
14. NRG34-DS2 (aplicació de les dues soques bacterianes en el moment de la sembra) + Trichoderma 5d. (Aplicació de l’fong als cinc dies posteriors a la sembra).
15. Control absolut.

Es van utilitzar cinc plantes per rèplica i es van avaluar les variables: pes sec aeri (g / planta); pes sec radical (g / planta); longitud de la tija (cm / planta); germinació (%) i contingut de clorofil·la foliar, amb un detector de clorofil·la MINOLTA SPAD-501 (Rodríguez-Mendoza et al., 1998).

Anàlisi estadística. Es va aplicar una anàlisi de variància i les diferències entre mitjanes es van trobar mitjançant la dócima de comparació de Duncan (1955). Les dades percentuals es van transformar mitjançant arcsin “x + 0,375 (Lerch, 1976). Es va utilitzar el programa estadístic Statgraphics plus 5.1 per a Windows.

RESULTATS I DISCUSSIÓ

Contingut de clorofil·la

quant a el contingut de clorofil·la (taula 1), el control fertilitzat presentar el major valor (43,68 SPADS / planta, pàg < 0,001), en comparació amb la resta dels tractaments. el va seguir el tractament on es van combinar els ceps A2 i N7, aplicades en el moment de la sembra (40,35 SPADS / planta), el qual va compartir superíndexs comuns amb altres tractaments, però va resultar estadísticament superior (p < 0,001) a el control absolut (38,48 SPADS / planta), així com a A2-N7 + Trichoderma 5d. (38,55 SPADS / planta), Trichoderma + A2-DS2 5d. (38,40 SPADS / planta), Trichoderma (38,35 SPADS / planta), NRG34-DS2. (37,55 SPADS / planta) i A2-DS2 + Trichoderma 5d. (35,93 SPADS / planta).

el fet que el tractament fertilitzat p resentara el major valor en aquesta variable és un indici de l’alta concentració de N induïda per l’aplicació de l’fertilitzant nitrogenat, ja que el contingut de clorofil·la és directament proporcional a el de N a la planta (Biswas et al., 2000). La combinació microbiana A2 (S. meliloti) i N7 (A. zeae), a l’hora de la sembra, va ser la més efectiva. Segons Askary et al. (2009), Sinorhizobium és un gènere d’alta eficiència, causa del seu efecte estimulador de el creixement vegetal en blat, en combinació amb Azospirillum. En aquest sentit, Bécquer et al. (2012a) van informar que la combinació de A2 i N7 va induir el major contingut de clorofil·la, en aquesta espècie.

La presència de Trichoderma en les diferents combinacions no va ser positiva, la qual cosa es pogués deure al fet que aquest fong, pel seu caràcter antagonista amb molts bacteris (Harman et al., 2004), va interferir de manera discreta a el possible benefici per l’ocupació d’alguns dels tractaments combinats, i va exercir un efecte depressor més palpable en tres d’aquests (A2-DS2 + Trichoderma 5d., Trichoderma + A2-DS2 5d., i A2-N7 + Trichoderma 5d.) . Això potser va dependre de l’grau de resistència antifúngica de les espècies bacterianes utilitzades en la combinació.

Pes sec aeri

En el pes sec aeri (taula 1), independentment que el control fecundat (0,82 g / planta) va mostrar valors estadísticament superiors (p < 0,05) a la resta dels tractaments, es va constatar l’efecte positiu de A2-N7 + Trichoderma 5d. (0,58 g / planta), així com de Trichoderma + NRG34-DS2 5d. (0,58 g / planta). Aquests, encara que van ser estadísticament superiors a Trichoderma + A2-DS2 5d., A2-N7, NRG34-DS2 + Trichoderma 5d., NRG34-DS2-Trichoderma, A2-N7-Trichoderma i A2-DS2-Trichoderma, no van diferir de l’control absolut i d’altres tractaments, com A2-DS2. Aquests resultats indiquen que l’efecte positiu d’aquestes combinacions en l’increment de la biomassa vegetal va ser emmascarat pels microorganismes presents en el sòl (no estèril) utilitzat en el control absolut, en què la comunitat bacteriana autòctona de la rizosfera va haver de tenir un paper important. Segons Chelius i Triplett (2000), aquestes rizobacterias, a l’igual que les introduïdes, s’associen a les arrels de la planta, a causa de la influència dels compostos orgànics provinents dels exsudats radicals. Així mateix, el fet que s’igualaren estadísticament els millors tractaments de la inoculació combinada amb els de el control absolut corrobora, de certa manera, la hipòtesi que les combinacions de bacteris amb Trichoderma es poden afectar per l’acció antagonista el fong.

Longitud de la tija

Quant a la longitud de la tija (taula 2), Trichoderma (5,58 cm), A2-N7 (5,50 cm) i NRG34-DS2 (5,50 cm) van ser estadísticament superiors (p < 0,001) a el control absolut ja Trichoderma + A2-DS2 5d. (5,05 cm), NRG34-DS2 + Trichoderma 5d. (5,03 cm), NRG34-DS2-Trichoderma (4,95 cm), Trichoderma + A2-N7 5d. (4,80 cm), A2-N7-Trichoderma (4,73 cm) i A2-DS2-Trichoderma (4,68 cm); i no van diferir de la resta dels tractaments i de l’control fertilitzat (5,18 cm).

Tot i que el tractament inoculat només amb Trichoderma presentar valors estadísticament superiors a la majoria dels tractaments, els altres dos que li van seguir en importància estaven compostos només per bacteris. Això pogués constituir una prova palpable de la influència antagonista el fong, que es va manifestar en determinades variables agronòmiques; tot i que la seva aplicació, per separat, va exercir un efecte positiu en la longitud de la tija. En aquest sentit, Avis et al. (2008) i Shoresh et al. (2010) van informar sobre les propietats biofertilitzants de Trichoderma, sobre la base de l’increment de l’absorció de minerals i la seva solubilització, així com en la producció de substàncies estimuladores de el creixement vegetal. D’altra banda, l’antagonisme de l’fong amb algun cep en específic es pot deure al fet que aquest realitza la seva acció biocontroladora mitjançant la antibiosi, el micoparasitisme i la competència pels nutrients segons el plantejat per Regne et al. (2008). Aquests autors assenyalen que la majoria dels ceps de Trichoderma produeixen metabòlits tòxics volàtils i no volàtils que impedeixen la colonització d’altres microorganismes antagonistes. Aquests metabòlits van ser detectats per Saber et al. (2009), en T. harzianum. No es descarta que alguns d’aquests compostos hagin influït negativament en determinades funcions dels bacteris que estimulen indicadors específics de el creixement vegetal, com les variables anteriorment descrites. Encara Bécquer et al. (2001) van trobar que A. brasilense va contrarestar a T. harzianum en un estudi in vitro, Bécquer et al. (2013) van determinar que aquesta mateixa espècie de fong va realitzar activitat antagonista amb A. canadenc i A. zeae.

Pes sec radical

Pel que fa a l’pes sec radical (taula 2), Trichoderma + A2-DS2 5d. va ser estadísticament superior (p < 0,001) a: A2-N7-Trichoderma, A2-DS2-Trichoderma, NRG34-DS2, A2-N7, control absolut, control fecundat, NRG34-DS2 + Trichoderma 5d. i Trichoderma. El va seguir Trichoderma + NRG34-DS2 5d., Que també va ser estadísticament superior a la resta dels tractaments, amb excepció de A2-N7-Trichoderma.

En aquesta variable van influir positivament dos tractaments combinats que no es van destacar en les variables anteriors. L’evident antagonisme entre els microorganismes utilitzats en aquest experiment no es va evidenciar en el pes sec radical, hagut de potser al fet que Trichoderma, a l’emprar els seus mecanismes de degradació celulolítica en les arrels de l’hostatger (Infant et al., 2009), va permetre l’entrada de els bacteris que van ser inoculades als cinc dies posteriors a l’aplicació de l’fong, i van aconseguir incidir directament en el desenvolupament radical (Sarig et al., 1992).

És important el fet que l’aplicació simple de Trichoderma no exercís cap efecte positiu en les arrels; encara que Gravel et al. (2006) i Chacón et al. (2007) van observar un augment de l’pes sec radical en tomàquet i tabac, respectivament, a l’inocular-amb Trichoderma. D’altra banda, Benítez et al. (2004) van considerar que la colonització de les arrels pel fong, independentment del seu gènere i espècie, comporta la producció de metabòlits tòxics (fitoalexines, flavonoides i terpenoides, derivats fenòlics i altres compostos antimicrobians) per part de la planta, com a resposta a la invasió fúngica. La capacitat de sobreviure a l’acció d’aquests compostos ha de variar d’acord amb la soca utilitzada (Harman et al., 2004).

Germinació

Els valors de germinació (taula 3) van mostrar poca o cap influència positiva dels ceps inoculades. Tant el control fertilitzat com el control absolut van resultar estadísticament superiors a A2-N7, Trichoderma, A2-DS2-Trichoderma, A2-N7-Trichoderma, NRG34-DS2 + Trichoderma 5d .; i no van diferir de la resta dels tractaments.

Aquests resultats no coincideixen amb els trobats per Benítez et al. (1998), que asseguren que Trichoderma produeix substàncies estimuladores de el creixement que influeixen en l’augment de la taxa de germinació en les llavors. Així mateix, Arora et al. (2001) van reportar que soques productores de sideróforos de S. meliloti van incrementar la germinació en cacauet, en presència de Macrophomina phaseolina. No obstant això, Cant-Martin et al.(2004) no van observar diferències en la germinació de llavors d’ají inoculades amb Azospirillum; a l’igual que Torres et al. (2003), en llavors de Phaseolus vulgaris, inoculades amb A. brasilense, Azotobacter chroococcum i Rhizobium leguminosarum, de manera simple o combinada. Bécquer et al. (2012b) tampoc van trobar diferències en la germinació, en blat, a l’aplicar inòculs formats per Azospirillum i Sinorhizobium. A l’sembla, la capacitat estimuladora o depressora dels microorganismes en la germinació depèn no només de l’gènere i l’espècie d’aquests, sinó també de el tipus de planta a què pertanyen les llavors.

Consideracions generals sobre les variables analitzades

Tot i que diversos tractaments van mostrar elevats valors en, al menys, una de les cinc variables, Trichoderma + NRG34-DS2 5d. i A2-N7 es van destacar amb evident superioritat en el contingut de clorofil·la i en la longitud de la tija (A2-N7); així com en el pes sec aeri i en el pes sec radical (Trichoderma + NRG34-DS2 5d.). Aquesta última variable és fonamental, ja que el desenvolupament de la planta depèn de les arrels. Segons assenyalen Sarig et al. (1992), els canvis en la morfologia i fisiologia de sistema radical són un dels efectes més coneguts dels bacteris en el creixement vegetal. L’increment de l’nombre d’arrels laterals i pèls radicals provoca l’augment de la superfície radical disponible per a la captació d’aigua i nutrients (Bai et al., 2003). D’aquí s’infereix la importància de l’aplicació primerenca de Trichoderma, seguida per una combinació de bacteris rizosféricas que colonitzen l’interior de les arrels, gràcies a l’acció celulolítica de l’fong (Infant et al., 2009). Sobre la base d’aquestes consideracions, el tractament Trichoderma + NRG34-DS2 5d. pot aportar millors resultats en la pràctica agrícola; tot i que la combinació de les soques bacterianes A2 i N7 en els experiments de camp que es derivin d’aquesta investigació també podria ser reeixida.

És d’assenyalar que el tractament fecundat presentar diferències significatives respecte a el control absolut en el contingut de clorofil·la i el pes sec aeri, no així en la resta de les variables (pes sec radical, longitud d’la tija i germinació ). En aquest sentit, Díaz et al. (2008) van obtenir resultats similars en la longitud de la tija, en experiments de camp amb sorgo, i també Bécquer et al. (2012a), en la germinació. Aquests últims autors van reportar que dues varietats de blat van presentar valors estadísticament inferiors al pes sec radical, en el cas de el tractament fertilitzat respecte a el control absolut.

A la variable pes sec radical, el tractament fecundat i el control absolut van ser estadísticament inferiors a alguns dels tractaments inoculats indistintament amb Sinorhizobium, Azospirillum i Trichoderma, la qual cosa també demostra l’efecte positiu d’aquests microorganismes en el desenvolupament de la planta.

CONCLUSIONS

Tot i que la combinació dels bacteris rizosféricas amb Trichoderma en el moment de la sembra, o posterior a aquesta, no va mostrar resultats uniformes en les variables estudiades, el tractament Trichoderma + NRG34 -DS2 5d. es va destacar en el pes sec radical i el pes sec aeri. També va sobresortir el tractament A2-N7, en el contingut de clorofil·la i la longitud de la tija. L’aplicació simple de Trichoderma no va mostrar un efecte positiu en la majoria de les variables, i cap dels tractaments va influir positivament en la germinació.

Es recomana avaluar els tractaments Trichoderma + NRG34-DS2 5d. i A2-N7 en experiments de camp amb blat.

REFERÈNCIES BIBLIOGRÀFIQUES

1. Antoun, H .; Beauchamp, C. J .; Goussard, N .; Chabot, R. & Lalande, R. Potential of Rhizobium and Bradyrhizobium species as plant growth promoting rhizobacteria on non-llegums: effect on radishes (Rhaphanus sativus L.). Plant Soil. 204: 57-61, 1998.

2. Antoun, H. & Prevost, D. Ecology of plant growth promoting rhizobacteria. In: Z. A. Siddiqui, ed. PGPR: Biocontrol and biofertilization. Dordrecht, Holland: Springer. pàg. 1-38, 2005.

3. Arora, N. K .; Kang, S. C. & Maheswari, D. K. Isolation of siderophore-producing strains of Rhizobium meliloti and their biocontrol potential against Macrophomina phaseolina that causes charcoal rot of groundnut. Curr. Sci. Índia. 81: 673-677, 2001.

4. Askary, Mehray; Mostajeran, Akbar; Amooaghaei, Rehaeh & Mostajeran, Maryam. Influence of the Co-inoculation Azospirillum brasilense and Rhizobium meliloti més 2,4-D on grain yield and N, P, K content of Triticum aestivum (Cv. Baccros and Mahdavi). American-Eurasian J. Agric. & Environ. Sci. 5: 296-307, 2009.

5. Avis, T. J .; Gravel, Valerie; Antoun, Hani & Tweddell, R. J.Efectes beneficiosos multifacètics dels microorganismes de Rhizosphere sobre la salut i la productivitat de les plantes. Sòl Biol. Bioquem. 40: 1733-1740, 2008.

6. Barea, J. M.; Azcón, R. & Azcón-Aguilar, C. Mycorrizal Fungi i creixement de les plantes que promouen les rizobacterias. A: A. Varma, L. Abbott, D. Werner i R. Hampp, eds. Microbiologia de la superfície vegetal. Heidelberg, Alemanya: Springer-Verlag, pàg. 351-371, 2004.

7. Bai, y.; Zhou, X. & Smith, D. L. Ecologia, gestió i qualitat. El creixement de la planta de soja millorada resultant de la coinoculació de les soques de Bacillus amb el bradyrhizobium japonicum. Cultiu de cultiu. 43: 1774-1781, 2003.

8. Bécquer, C. J.; AntoL, Hani & Prévost, Danielle. Estudi de la Interacció de Trichoderma Harzianum con Bacteries Dinitrofijadoras de Vida Libre. Pastos i farrajes. 24 (1): 35-39, 2001.

9. Bécquer, C. J.; Lázarovits, G. & LaLin, i .. Interacción in vitro Entre Trichoderma Harzianum i bacteries rizosféricas Estimuladoras del crector vegetal. Rev. Cub. Cienc. Agríc. 47: 97-102, 2013.

10. Bécquer, C. J.; LAZAROVITS, G.; Nielsen, Laura; Quintana, Maribel, Adesina, Modupe; Quigley, Laura et al. C. Efecte de la inoculació amb bacteris riosfèrics en dues varietats de blat. Fase II: hivernacle. J. Agric mexicà. Ciència. 3: 985-997, 2012a.

11. Bécquer, C. J.; Prévost, Danielle; Joc, Christine; Gauvin, Carole & Delaney, Sandra. EFECTO DE LA INOCULACIÓ CON Bacteries Rizosféricas en dos Variedades de Trigo. Fase I: Condicions Controladas. Rev. Mex. Cienc. Agríc. 3: 973-984, 2012b.

12. Bécquer, C. J.; Ramos, Yamilka; Nápoles, J. A. & Arioza, María D. Efecto de la Interacció TRICHODERMA-RIZOBIO EN VIGNA LUTOLA SC-123. Pastos i farrajes. 27 (2): 139-145, 2004.

13. Benítez, Tahía; Rincón, Ana M.; Limón, M. Carmen & Codón, A. C. Mecanismes de biocontrol de soques de trichoderma. Int. Microbiol. 7: 249-260, 2004.

14. Benítez, Tahía; Delgado-Jarana, J.; Rincón, A. M.; Rey, M. & Limón, M. Carmen. Biofungicides: Trichoderma com a agent biocontrol contra fongs fitopatògens. A: S. G. Pandalai, ed. Desenvolupaments recents de la investigació en microbiologia. Trivandrum, Índia. vol. 2. p. 129-150, 1998.

15. Biswas, J. c.; Ladha, J. K. & Dazzo, F. B. Inoculació de Rhizobia millora la captació de nutrients i el creixement de l’arròs de les terres baixes. SUIL SCI. Soc. Sóc. J. 64: 1644-1650, 2000.

16. Canto, J. C.; Medina, S. & Morales, A. D. Efecto de la Inoculació amb Azosperillum sp. en plantas de Xile Habanero (Capsicum chínense jacquin). Sistemes tropicals i subtropicals. 4: 21-27, 2004.

17. Chacón, M. r.; Rodríguez, o.; Benítez, t.; Sousa, s.; Rey, m.; Llobell, A. et al. Anàlisis microscòpics i transcriptums de la colonització primerenca de les arrels de tomàquet per Trichoderma Harzianum. Int. Microbiol. 10: 19-27, 2007.

18. Chapman, L. J. & Putman, D. F. Fisiografia del sud d’Ontario. Toronto: Premsa de la Universitat de Toronto, 1966.

19. Chelius, M. K. & Triplett, E. W. Fixació de nitrogen procariòtics; Sistema model per a l’anàlisi d’un procés biològic. Anglaterra: Horizont Scientific Press, 2000.

20. Díaz, a.; Garza, Idalia; Pecina, V. & Montes, N. Respuesta del Sorgo a micorriza arbuscular i azosperillum en Estrella hídric. Rev. Fitotec. Mex. 31: 35-42, 2008.

21. Duncan, D. B. Gamma múltiple i diverses proves F. Biometria. 11: 1-42, 1955.

22. Grava, v.; Martínez, c.; Antoun, H. & Tweddell, R. J. Control de l’arrel de l’arrel de tomàquet efecte hivernacle (Pythium UlTimum) en sistemes hidropònics, utilitzant microorganismes de creixement de la planta. Llauna. J. PATHOL DE PLANTA. 28: 475-483, 2006.

23. HARMAN, G. E.; HOWELL, C. R.; Viterbo, a.; CHET, I. & Lorito, M. Trichoderma espècies-oportunistes de les espècies, simbits de plantes avirulents. Nat. Rev. Microbiol. 2: 43-56, 2004.

24. Howell, C. R. El paper de l’antibiosi a Biocontrol. A: G. E. Harman i C. P. Kubicek, eds. Trichoderma i gliocladium. Londres: Taylor & Francis. vol. 2. Enzims, control biològic i aplicacions comercials. p. 173-184, 1998.

25. Infante, Danay; Martínez, b.; González, Noyma & Reyes, yusimy. Mecanismes d’Acció de Trichoderma Frente a Hongos Fitopatógenos. Rev. Protecció de verdures. 24 (1), 2009. http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S1010-27522009000100002&script=sci_arttext.

26. Lerch, G. La Experimentació en les ciències biològiques i agrícolas. LA HABANA: Editorial Ciència i Técnica, 1976.

27. Lupwayi, N. Z.; Clayton, G. W.; Hanson, K. G.; Arròs, W. Un & Biederbeck, V. O. Rhizobia endofítica en arrels d’ordi, blat i canola. Llauna. J. Plant Sci. 84: 37-45, 2004.

28. Reino, J. L; Guerrero, R. F.; Hernández-Galán, R. & Collado, I. G. Metabòlits secundaris de les espècies de l’agent Biocontrol Trichoderma. Phytochem. Rev. 7: 89-123, 2008.

29. Rodríguez-Mendoza, María de les N.; Alcántar, G.; Agulilar, A., Etchevers, D. J. & Santizo, J. A. Estimació de la Concentació de Nitrógeno i Clorofila en tomàquia Mediante Un Medidor Portátil de Clorofila. Terra Latinoamericana. 16: 135-141, 1998.

30. Rudresh, d. l.; ShivaRakash, M. K. & Prasad, R. D. Efecte de l’aplicació combinada de Rhizobium, fosfat solubilitzant bacteri i trichoderma spp. sobre el creixement, la captació de nutrients i el rendiment de cigrons (Cicer ARITENIUM L.). Sòl aplicat ECOL. 28: 139-146, 2005.

31. Sabre, w. I. a.; Abd el-Hai, K. M. & Ghoneem, K. M. Efecte sinèrgic de Trichoderma i Rhizobium sobre la malaltia de la xocolata i la inducció de la nodulació, activitats fisiològiques i productivitat de Vicia Faba. Res. J. Microbiol. 4: 286-300, 2009.

32. Sarig, s.; Okon, Y. & Blum, A. Efecte de l’inoculació Azospirillum Brasilense sobre la dinàmica de creixement i la conductivitat hidràulica de les arrels bicolor de sorgo. J. NUTR vegetal. 15: 805-819, 1992.

33. Shaban, W. I. & El-Bramawy, M. A. Impacte de la inoculació dual amb rizobium i trichoderma sobre l’amortiment, les malalties de la putrefacció de les arrels i els paràmetres de creixement de les plantes d’alguns cultius de camp de llegums sota les condicions d’hivernacle. Int. Res. J. Agric. Ciència. SUIL SCI. 1: 98-108, 2011.

34. Shoresh, m.; HARMAN, G. E. & Mastouri, FateMeh. Resistència sistèmica i respostes vegetals induïdes a agents de biocontrol de fongs. Anual. Rev. Phytopathol. 48: 21-43, 2010.

35. Somasegaran, P. & Hoben, H. J. Manual de Rhizobia. Nova York: Springer-Verlag, 1994.

36. Torres, r.; Pérez, C. & Suárez, Norma. Influència de la Inoculació de Rizobacterias sobre la Germinació de Semillas de Frijol Comun (Phaseolus vulgaris L.). Centro Agrícola. 30: 56-60, 2003.

37. Vincent, J. M. Un manual per a l’estudi pràctic dels nòduls arrels bacteris. Oxford: Publicacions de Blackwell, 1970.

38. Wolffhechel. H. & Jensen, D. F. Ús de Trichoderma Harzianum i gliocladium vitens per al control biològic de l’amortiment post-emergent i la podridura de l’arrel de cogombres causats per Pythium UlTimum. J. Phytopathol. 136: 221-230, 1992.

39. ZAHIR, Z. A.; Arshad, M. & Frankenberger, W. T. Promoció de les rizobacterias: aplicacions i perspectives en l’agricultura. Adv. Agron. 81: 97-168, 2004.